ELISA实验报告(酶联免疫吸附测定)结果.pdf

elisa 实验报告 -森贝伽生物实验技术中心 前言 酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，elisa）的基本 原理是：使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。使抗 原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体， 这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活 性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标 抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。 用洗涤的方法使 固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开， 最后结合在固相载体上的酶 量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变 为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深 浅刊物定性或定量分析。 elisa 可用于测定抗原，也可用于测定抗体。该法适于测定细胞培养上清、 血清、血浆及组织液中的样本，干扰小可以测到每毫升纳克水平的细胞因子（或 受体）的水平。 材料与方法 1 材料 1.1 主要试剂 elisa 检测试剂盒(from：森贝伽生物/senbeijia) 1.2 主要仪器及耗材 酶标仪：芬兰（labsystems multiskan ms）公司产品 洗板机：芬兰（thermo labsystems）公司产品 离心机：微量高速离心机（国产） 移液器：吉尔森 p 型移液器(pipetman)产品 培养箱：隔水式恒温培养箱（国产）产品 其他所需耗材均为国产。 2 方法 2.1 实验过程 （1）标准品的稀释与加样：标准品按照说明书稀释好五个梯度，各个梯度每孔 加样量都为 50l； （2）加样：分别设空白孔、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样 品稀释液 40l，然后再加待测样品 10l。加样将样品加于酶标板孔底部，尽 量不触及孔壁，轻轻晃动混匀； （3）温育：用封板膜封板后置 37温育 30min； （4）配液洗涤：将 30（48t 的 20 倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30（48t 的 20 倍） 倍稀释后备用；小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30sec 后弃去，如此重复 5 次，拍干； （5）加酶：每孔加入酶标试剂 50l，空白孔除外； （6）温育：用封板膜封板后置 37温育 30min； （7）洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30sec 后弃去，如此重复 5 次，拍干； （8）显色：每孔先加入显色剂 a50l，再加入显色剂 b50l，轻轻震荡混匀， 37避光显色 15min； （9）终止：每孔加终止液 50l，终止反应； （10）测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（od 值）。 测 定应在加终止液后 15min 以内进行。 2.2计算 以标准物的浓度为纵坐标，od 值为横坐标，计算出标准曲线的多项式二次 回归方程，将样品的 od 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即 为样品的实际浓度。 实验结果举例（相关技术问题可咨询我们） 编号od 值浓度（ng/l） 空白0.0320 标 11.986240 标 21.341160 标 30.72380 标 40.41140 标 50.19620 110.447238.501 120.598328.599 130.517280.141 140.506273.583 150.368191.771 160.349180.575 170.361187.644 180.411217.172 190.393206.529 1100.537292.078 210.515278.948 220.549299.249 230.549299.249 240.642355.045 260.561306.427 270.526285.510 280.489263.458 310.458245.029 320.536291.481 330.496267.625 340.504272.391 350.547298.054 360.519281.333 380.750420.328 410.518280.737 420.506273.583 430.534290.286 440.469251.564 450.479257.509 460.567310.018 480.333171.158 510.469251.564 520.525284.913 530.498268.817 540.438233.163 550.581318.404 560.498268.817 570.437232.570 580.567310.018 590.455243.248 610.579317.205 620.523283.720 630.633349.629 650.569311.216 660.425225.459 670.498268.817 680.534290.286 710.381199.442 720.298150.