临床医学论文闽南地区无偿献血者隐匿性乙型肝炎病毒感染研究.doc

闽南地区无偿献血者隐匿性乙型肝炎病毒感染研究 闽南地区无偿献血者隐匿性乙型肝炎病毒感染研究*欧山海林永财倪宏英张永昌周海容陈长荣(厦门市中心血站,福建厦门361004)摘要:目的研究闽南地区无偿献血者中隐匿性乙型肝炎病毒感染(obi)情况,探讨现有输血传播乙肝病毒(hbv)的检测方法的有效性。方法依据多种与hbv相关血清学指标的检测情况对献血者标本进行hbv携带风险评价分级,对较高携带风险的标本做单份多区段巢式-pcr检测其hbv dna,对低携带风险的标本做10份混合的巢式-pcr检测。采用这一方案,对闽南地区19 360例hbsag阴性的无偿献血者标本做检测分析。结果闽南地区hbsag阴性献血者中的hbv dna阳性检出率为021% (40/19 360, 95% ci: 015%028% ),属于obi;其中抗-hbc阳性检出率85% (34/40),但阳性预测值仅为34% (34/995, 95% ci: 24%47% );hbv nrag阳性预测值30% (6/20),但灵敏度为15% (6/40)。结论现有筛查体系下无偿献血者中仍存在一定比例的obi,需要寻求更为有效的检测方法。 关键词:乙型肝炎病毒,隐匿性感染(obi);巢式-pcr;抗-hbc;核酸检测;无偿献血者;闽南乙型肝炎(简称乙肝)病毒(hbv)感染是我国乃至全世界最重要的公共卫生问题之一。hbv表面抗原(hbsag)是检测hbv感染的最常用指标,也是包括我国在内的大多数发展中国家当前用于血液制品hbv感染筛查的唯一指标。自1978年hoof-nagle等首次报道了1例输注hbsag阴性但乙肝核心抗体(抗-hbc)阳性的血液而致受血者hbv感染,并随后在大猩猩身上获得证实至今,人们已认识到除了感染早期的检测“窗口期”外,多数hb-sag检测阴性但hbv dna阳性的病例由隐匿性hbv感染(occulthbv infection, obi)引起3, obi献血者的血液可能导致受血者感染hbv或引起病毒性肝炎45。obi作为hbv感染的1种特殊类型成为了临床和流行病学的一大难题。对于obi的检测,目前尚缺乏商品化的试剂及其可靠方法,采用核酸检测(nucleic acid testing,nat)方法检测肝组织(或血液)中的hbv dna是目前检测obi的“金标准”;除此之外,抗-hbc或也作为筛查指标,尤其在“抗-hbc单独阳性”(anti-hbc alone)的个体中,hbv dna的阳性率明显著高于其他血清学模式68。另据报道, 1种联合检测hbv前s1抗原和核心抗原的乙肝核酸相关抗原(hbv nrag)的elisa方法,也可用于obi尤其是hbsag“a”表位突变株感染的规模化筛查910。有鉴于此,我们选取部分hbsag阴性献血者的血浆标本检测hbvnrag、抗-hbs和抗-hbc,根据这些血清学指标的检测情况,对标本的hbv携带风险进行评价分级,并进一步做nat检测,以系统了解该地区无偿献血者中obi的情况及现行血液筛查体系的有效性,现报道如下。 1材料与方法11研究对象选取厦门市中心血站2007年7月18日2008年8月27日采血现场hbsag金标试纸及alt试纸初筛合格的无偿献血者血液标本19 518(人)份(5 ml/份),分离血浆, -20保存待检。上述献血者均为厦门及其周边地区的常住者。 12血清学检测hbv nrag(批号:n20070501、n20071201、n20080301),抗-hbs (批号: r20070505、r20071101、r20080405),抗-hbc(批号: c20070601、c20071201、c20080401)检测采用elisa试剂(均购自北京万泰生物药业股份有限公司);hbsag检测也采用elisa方法,使用美国雅培公司murexv3试剂(批号:l030510、l046010、l097610),厦门新创试剂(批号:2007055108、2007095112、2008025101)及北京万泰试剂(批号:s20070601、s20071101、s20080301)初筛,3种试剂均检测为阴性方判为阴性。对初筛阴性的标本进行风险分级后做hbv dna检测,若hbv dna阳性,则再以法国生物梅里埃公司hepanostikahb-sagultra试剂(批号: bv221087)及美国伯乐公司monolisaaghbsultra试剂(批号:bl20080611)复检。 13hbsag初筛阴性标本的风险分级与分组1)hbsag(-) /nrag(+)时hbv dna阳性概率较高,被认作高风险等级,相应标本(20份)归为a组; 2)单一抗-hbc(+)时为中风险等级,相应标本(995份)归为b组; 3)其他血清模式为低风险等级,相应标本(18 345份)归为c组。 14hbv dna检测对hbv nrag(+)或抗-hbc(+)而抗-hbs(-)(共1 015份)均逐份检测;其他血清学模式的标本采用10份混合的方式检测。血清中hbv dna提取采用qiagen公司的qiaamp dnabloodminikit(批号: 20091029-222521)进行,hbvdna检测采用不同区段的6套引物(表1)的巢式-pcr (上海英骏生物技术有限公司,批号:hg080314056),检测下限约为20 cp/ml11。初次nat检测阳性的标本,均取备份标本重新提取dna复检,复检阳性方判为阳性,否则判为阴性。 15统计学方法mantel-haenszel卡方检验或fisher精确概率用于分类变量统计检验; mann-whitneyu检验用于连续变量的方差分析;统计软件采用spss170,p<005为差异具有统计学意义。 2结果21hbsag初筛19 518例标本中,检出158例hbsag(+): 08%, 95% ci (0710)%,性别比(mf)=1101,平均年龄(289)岁; 19 360例hbsag(-):mf =1241,平均年龄(269)岁。 22风险分级(组)及hbv dna检测1)依据hbv nrag、抗-hbs及抗-hbc的检测结果,将hb-sag(-)的19 360份标本分为a组:hbv nrag(+)标本20例,属于hbv携带高风险,做单份检测hbv dna,其中有6例阳性(300%, 95% ci:119%543% );b组:单一抗-hbc(+) 抗-hbs(-)标本995例,属于hbv携带中等风险,做单份hbv dna检测,其中有34例阳性(34%, 95%ci: 24%47% );c组:其他血清学模式抗-hbs(+)或全阴性)标本18 345例,属于hbv携带低风险,采用每10份混合做hbv dna检测,共检测了其中5 000例标本,未发现1例阳性(图1)。2)采用2种进口hbsag试剂对所检出的40例hbvdna阳性标本复检:均为阴性。3)40例obi中,男性28例,女性12例,mf=241(2=3934,p<005),平均年龄(309)岁,与初筛hbsag(+)组比较,差异无统计学意义(t=0044,p>005)。 23hbv nrag和抗-hbc检测对obi的检出率和阳性预期值见表2。 表140例obi中单一抗-hbc(+)标本与hbv nrag(+)标本hbv dna检出率和阳性预期值比较nhbv dna阳性检出数(% )阳性预测值(95%ci)单一抗-hbc(+) 559 34(850) 34 /995(342% )hbv nrag(+) 20 6(150) 6 /20(300% )3讨论在hbv低流行的国家和地区,目前多通过hb-sag与抗-hbc或hbv nat一起检测来降低obi对受血者造成的可能风险1316;在西方发达国家 ,hbsag检测阴性的献血者中有0007%005%的hbv dna阳性1721。在中国等处在hbv高流行区的发展中国家,由于抗-hbc的高本底阳性率和nat的高费效比,目前仍仅采用hbsag筛查,献血者中obi的存在情况尚不清楚,考虑到这些地区普通人群的高hbv携带率,评估这些地区hbsag筛查后残余的hbv经血传播风险十分必要。 我们将血清学指标结合nat方法筛查了闽南地区19 360(人)份献血者标本,结果显示本地区hbsag(-)献血者中任有约021% (40/19 360, 95%ci: 015%028% )的obi者(图1)。leili等12的研究表明,在我国台湾地区hbsag(-)献血者中存在011% (12/10 727, 95% ci: 006%020% )的obi者。2个相邻地区的相近结果证实了在hbv高流行区,献血者中hbsag筛查后残余的hbv经血传播风险明显高于发达国家,是不容忽视的问题。 当然,由于我们未对全部标本做单份nat检测,本组资料可能存在一定的遗漏,从而导致对残余hbv风险的低估。 hbv nrag的检测靶标是独立于hbsag之外的hbv抗原,本组资料中检测obi的阳性预测值较高(30% ),但由于献血者中obi者的病毒载量一般较低,该指标用于献血者obi筛查的灵敏度仅为15%;而40例obi中的34例(850% )属于“单一抗-hbc阳性”,显示该血清学模式或可作为规模化筛查obi的指标,可是该指标较低的阳性预测值(342% )(表2)如果通过抗-hbc来筛查当前献血者中的obi,需多报废497%的合格血浆(961/19 326)或许将阻碍其在常规血液筛查中的应用。因此寻求更为灵敏的hbsag检测试剂或者更为经济有效的nat方法仍将是今后进一步提高中国血液安全的发展方向。 参考文献hoofnagle jh, seeff lb, bales zb, et a.l type b hepatitis aftertransfusionwith blood containing antibody to hepatitisb core anti-gen.n engl jmed, 1978, 298(25): 1379-1383.thiersv,nakajima e,kremsdorfd, et a.l transmission ofhepatitisb from hepatitis-b-seronegative subjects.lancet, 1988, 2(8623):1273-1276.3raimondog, pollicinot,cacciola i, et a.l occult hepatitis b virusinfection. jhepato.l 2007, 46(1): 160-170.4yoshibam, sekiyamak, sugata f, et a.l post-transfusion fulminanthepatitisb after screening for hepatitis b virus coreantibody. lan-cet, 1992, 339(8787): 253-254.5larsen j,hetland g, skaugk. posttransfusion hepatitis b transmit-ted by blood from a hepatitis b surface antigen-negative hepatitisbvirus carrier.transfusion, 1990, 30(5): 431-432.6el-zaatarim,kazmah,naboulsi-majzoubm, et a.l hepatitis b vi-rusdna in serum of anti-hbc only -positive healthy lebaneseblood donors: significance and possible implications. j hosp in-fect, 2007, 66(3): 278-282.7vitale f,tramuto f,orlandoa, et a.l can the serological status ofanti-hbc alone be considered a sentinelmarker fordetection