炎症性肠病患者难辨梭状芽孢杆菌毒素B的测定及其临床意义.pdf

n a t i o n a 1 me d i c a 1 f r o n t i e r s o f c h i n a ， a p t 2 0 1 3 ， v o 1 8 n o 7 中 国医疗前沿 2 0 1 3 4 n 第8 卷 第7 期 临床研究 4 7 炎症性肠病患者难辨梭状芽孢杆菌毒素b 的测定及其临床意义 王才华尹少朋庞智 【 摘要】目的 炎症性肠病( i b d ) 患者的难辨梭状芽孢杆菌感染率明显增加， 本研究旨在检测缓解期和复发期i b d患者的粪便中 难辨梭状芽抱杆菌毒素b的水平。 方法纳入研究的 1 9 0 例确诊的i b d患者 ， 包括溃疡性结肠炎(uc ) 患者 1 2 0 例及克罗恩病 ( c d ) 患者7 0 例 ， 均采集粪便标本。 同时募集无肠道疾患的健康体检者1 0 0 名为对照。 通过人难辨梭状芽孢杆菌毒素b型酶联免疫分 析试剂盒( e l i s a ) 方法对粪便样本中毒素b 进行检测， 采用g r a p h p a d p r i s m 5 软件包进行统计分析。 结果 1 9 o 例ib d患者中， 感 染者 3 3 例 ( 1 7 4 ， 其 中uc 2 3 例 ( 1 9 2 ，c d 1 0 例 ( 1 4 3 ) ， 健康对照者中未发现感染者。i b d组感染率明显高于对照组 ， 差异 有统计学意义( p 0 0 5 ) 。 1 2 标本收集 收 集所 有 受试 者清 晨第 1 次排便 时 的大便 ， 留取 粪便 5 0 0 rag ( 或水样便 5 0 0 m1 ) 于粪便收集盒中， 置于- 2 0 c储藏待检。 1 3 人难辨梭状芽孢杆菌毒素b抗原酶联免疫分析( e l i s a) 1 3 1 标准品的稀释与加样 ： 在酶标包被板上设标准品孔1 0 孔， 在第一、 第二孔中分别加标准品1 0 0 i ， 然后在第一、 第二孔中 加标准品稀释液 5 0 g l ， 混匀， 稀释后各孔加样量都为5 0 ， 浓度分 别为 6 0 n g l，4 0 n g l，2 0 n g l，1 0 n g l，5 n g l 。 1 3 2 加样 ： 分别设空白孔( 空白对照孔不加样品及酶标试剂， 其余各步操作相同) 、 待测样品孔。 在酶标包被板上待测样品孔中 先加样品稀释液4 0 g l ， 然后再加待测样品1 0 ( 样品最终稀释度 为5 倍) 。 加样将样品加于酶标板孔底部， 尽量不触及孔壁， 轻轻 晃动混匀 。 1 3 3 温育 ： 用封板膜封板后置 3 7 温育3 0 mi n。 1 3 4 配液 ： 将 3 0 倍浓缩洗涤液用蒸馏水3 0 倍稀释后备用。 1 3 5 洗涤 ： 小心揭掉封板膜， 弃去液体， 甩干， 每 l i i 满洗涤 液， 静置 3 o s 后弃去， 如此重复5 次， 拍干。 1 3 6 加酶 ： 每孔加入酶标试剂 5 0 g l ， 空白孔除外。 1 3 7 温育 ： 操作 同 1 3 3 。 1 3 8 洗涤 ： 操作同1 3 5 。 1 3 9 显色和测定 ： 每孔先加入显色剂a5 0 g l , 再加入显色剂 b 5 0 l ， 轻轻震荡混匀，3 7 避光显色1 5 mi n 。 终止 ： 每孔加终止 液5 0 p l ， 终止反应 ( 此时蓝色立转黄色) 。 测定 ： 以空白空调零， 在 波长为4 5 0 n m的微e l i s a板的阅读器上进行读数， 依序测量各 孔的吸光度( od值 ) 。 测定应在加终止液后 1 5 rai n以内进行。 1 4 统计学处理 采用g r a p h p a d p r i s m 5 软件包， 采用偏态和非匹配的f 检 验对数据进行检验 ， 并分析数值的分布是否符合高斯分布。 如果 分布不是正态分布， 则使用ma n n - wh i t n e y检验。p0 0 5 ) 。7 0 例c d患者 中，1 6 例为小肠型患者 ， 感染率为 0 ( 0 1 6 ) ； 2 4 例为结肠型患者， 感染率为6 2 4 ； 3 0 例为小肠结肠 型患者，c d感染率为4 3 0 。 结肠型和小肠结肠型 c d患者的感 染率显著高于小肠型c d患者( p0 0 1 o 2 3 疾病活动指数与难辨梭状芽孢杆菌感染的关系 根据tu r e l o v e 和wi t t s 的uc疾病活动度评分标准， 在uc组 中，5 2 例轻度患者的感染率为7 7 ( 4 5 2 ) ，2 4 例中度患者的感染 率为1 6 7 ( 6 3 6 ) ，3 2 例重度患者的感染率为4 o 6 ( 1 3 3 2 ) 。uc 患者的感染率随疾病严重程度的上升而增高( p 0 0 1 ) 。 根据 c d 疾病活动度评分标准， 在c d组中，2 5 例轻度患者中感染阳性率为 4 0 ( 1 2 5 ) ，2 4 例中度患者的感染率为1 2 5 ( 3 2 4 ) ，2 1 例重度 患者的感染率为2 8 6 ( 6 2 1 ) 。 在c d组中， 感染率随疾病严重程度 的上升而增高， 且差异有统计学意义( p 0 0 1 ) 。 3 讨论 研究发现， 难辨梭状芽孢杆菌感染在i b d患者 中有 日 益增多 的趋势。c l a y t o n 等 发现相对于健康人群， 临床缓解的i b d患 者大便中的艰难梭菌毒素的检出率更高。 在i b d患者中难辨梭状 芽孢杆菌的感染率高达8 2 ， 而在一般健康人群 中其感染率仅 为 1 o 。 在i b d患者中c d i 发病率的增加能进一步帮助我们理解 i b d的发病机制和i b d的进程。 本研究通过人难辨梭状芽孢杆菌 毒素b抗原酶联免疫分析( e l i s a) 方法检测显示，i b d组中感染 率为 1 7 4 ， 其中uc为 1 9 2 ，c d为 1 4 3 ， 而对照组均未发现 阳性患者， 这与c lay t o n 等 的研究结果相符。 本研究中，uc组与 c d组该菌的感染率差异有统计学意义， 这与国外文献报道uc患 者该菌感染率显著高于c d 患者的结果一致 。 同时， 我们发现活 动期的i b d患者该菌的感染率显著高于非活动期患者。 根据文献报道 ， 在i b d患者 中， 几乎任何抗生素的使用均 会增加难辨梭状芽孢杆菌的感染风险， 且免疫抑制剂与广谱抗生 素协同使用者的感染率显著高于单用广谱抗生素治疗者。 这表 明， 临床上应合理使用抗生素， 同时注意营养支持及免疫调节等 对症治疗， 就可能会减少感染风险。i b d患者中存在着较高的难 辨梭状芽孢杆菌感染率， 尤其是处于疾病活动期的患者。 对于这 些存在难辨梭状芽孢杆菌感染的i b d患者一般推荐使用 甲硝唑 和( 或 ) 万古霉素治疗， 但为防止出现万古霉素耐药菌株， 首选甲 硝唑。 也可应用益生菌制剂进行辅助治疗以调节宿主免疫反应和 增强黏膜屏障功能。 由于本研究样本量较少， 对于存在难辨梭状 芽孢杆菌感染的i b d患者的相关治疗措施有待于进一步的探索 和研 究。 考虑到本研究的结果， 将来的研究应包括大样本的前瞻性研 究， 目的是研究i b d患者粪便中难辨梭状芽孢杆菌毒素b与相关 血清抗体之间的联系， 同样地， 也包括i b d不同临床分期患者的 血清抗体水平之间的联系。 对血清毒素b抗体毒素的中和活性的 评估可能会对难辨梭状芽孢杆菌感染和i b d致病机制的免疫学 机制提供更多的信息 参考文献 【 1 ky n e l， wa r n y m ，qa ma r a，e t a 1 as y mp t o ma t i c c a r r i a g e o f cl o s t r i d i um di f f i c i l e a nd s e r u m l e v e l s o f i gg a nt i b od y ag a i ns t t o x i n aj 】 n e n g l j me d， 2 0 0 0 ， 3 4 2： 3 9 0 3 9 7 2 mc f a r l a n d l v， s u r a wi c z c m ，s t a mm we ri s k f a c t o r s f or cl o s t r i di u m di f f i c i l e c a r r i a ge and c di f f i c ne a s s oc i a t e d di a r r he a i n a c o ho r t o f h o s pi t a l i z e d p a t i e n t s j j i nf e c t di s， 1 9 9 0， 1 6 2： 6 7 8 -6 8 4 【 3 ro d e ma n n j f，d u b b e r k e e r，re s k e ka， a 1 i n c i d e n c e o f c l o s t r i d i u m d i f f i c i l e i n f e c t i o n i n i n fl a mma t o r y b o we l d i s e a s e j cl i n ga s t r o e nt e r o l he pa t o l ， 2 0 0 7， 5： 3 3 9 -3 4 4 4 an a n t h a kr i s h n a n an， mc g i n l e y e l， bi n i o n dg e x c e s s ho s pi t a l i s a t i o n bur d e n a s s o c i a t e d wi t h cl o s t r i di u m d i f f i c i l e i n p a t i e n t s wi t h i n fl a mma t o r y b o we l d i s e a s e j g u t ， 2 0 0 8 ， 5 7 ： 2 0 5 2 1 0 5 c l a y t o n e m，re a mc， s h a n a h a n fth e v e x e d r e l a t i o n s h i p b e t we e n cl o s t r i d i um d i f f i c i l e a n d i n fla mma t o r y b owe l d i s e a s e：a n a s s e s s me n t o f c a r -r i a ge i n a n o u t pa t i e nt set t i ng a m o ng pa t i e nt s i n r e mi s s i o n j 】 am j g a s t r o e n t e r o l ， 2 0 0 9 ， 1 0 4 ： 1 1 6 2 -1 1 6 9 6 s c h n e e we i s s s ， ko r z e n i k j ，s o l o mo n dh，e t i n fl i x i ma b a n d o t he r i mmu no mo du l a t i ng d r ug s i n pa t i e nt s wi t h i n fla mma t o r y b o we l d i s e a s e a n d t h e r i s k o f s e r i o u s b a c t e r i a l i n f e c t i o n s j 】 al i me nt pha r ma c o l the r， 2 0 0 9， 3 0： 2 5 3 -2 6 4 7 中华医学会消化病学分会炎症性肠病协作组 对我国炎症性肠病诊断 治疗规范 的共识意见 j 中华消化杂志 ， 2 0 0 7 ， 2 7 ( 8 ) ： 5 4 5 - 5 5 0 8 s i n h p， b a r r e t t ta，yu n l cl o s t r i d i u m d i f f i c i l e i n f e c t i o n a n d i n fl a mma t o r y b o we l d i s e a se：a r e v i e w j 】 ga s t r o e n t e r o l re s pr a c t ， 2 01 1 ， 2 01 1 ： 1 3 6 0 6 4 ( 收稿 日期 ： 2 0 1 3 - 0 2 - 2 6 ) ( 本 文编辑 ： 张思雨 ) f 上4 ： p i 1 8 1 健 ， 2 0 0 8 ， 2 3 ( 7 ) ： 9 5 0 - 9 5 1 3 】 胡林林 ， 陈艳 通化市2 0 0 0 2 0 0 6 年5 岁以下儿童死因分析及干预 j 中国妇幼保健 ， 2 0 0 8 ， 2 3 ( 2 8 ) ： 4 0 0 2 - 4 0 0 3 4