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葡萄病毒及其防治研究概述1990年第4期辽宁农业科学葡萄病毒病及其防治研究概述郑怀民赵奎华(辽宁省农业科学院植保昕)一蔼追锁斡研究强于19世纪末以美孱的“piercesdiscasc开始的,但真正广搓,细致的研究是在本世纪4o年代之后.葡萄病毒病种类多,分布广,危害大,已受到全世界的关注.除北美外,欧洲,南美,澳洲,南非以及亚洲的一些国家也都相继开展了这方面的研究工作.随着科学技术的进步,人们对葡萄病毒病的认识更加深入.从症状的描述到使用电子显散镜探知病毒粒子从磨擦接种,嫁接检验到血清学的酶联免疫吸附测定,从热处到长点组织培养获得无毒母株,从健康葡萄母树的选育到建立无病毒苗木的生产体系.已从生物学领域的各个角度加速了葡萄病毒病的发生,发展过程以及防治方面的研究.我国于1986年始由国家农业部和中国科学院植物所主持了一个协作组.开展了葡萄病毒病的调查研究工作.据美国gohen教授对我国1o个葡萄品种的检铡结果,8o的品种带有卷叶病毒,7o%的品种带有茎痘病毒,29的品种帮有淦皮病毒.i989年郑怀民等调查辽宁省的23个葡萄品种普遍带有病毒.个别品种带毒率高达100.且病毒种类多(扇叶,卷叶,拴皮,茎痘和斑点病毒).经过几年的努力,从对葡萄病毒病的症状学观察,描述到生物学鉴定技术,热疗处理,生长点组织培养以及无毒母株的快速繁育等方面都获得了可喜的进展,可望能在近几年内达到无病毒葡萄苗木的实用化.一,葡萄病毒病的种类,病原及其分布_j_1_一一_1rf本文的葡萄病毒病包括一些目前尚未搞清但症状类似病毒病构精害及一些立克农俸和曹原奉病害.葡萄病毒病种类繁多,分布广(见表1).这是由于葡萄可受多种病毒的侵染.其数目已在3o种以上.当然由于研究的局限性.这里很可能存在着同一种病毒由于报告人的不同而付予不同的名称.有些是属于同一种病毒的不同株系.有些是属于菌原体或立克次体等等.综合起来,在经济上为害较大的有4种,即扇叶病毒,卷口i-病毒,栓皮病毒和茎瘟病毒.扇叶病毒侵染葡萄后.由于葡萄品种和发病时期的不同而表现出三种不同的症状类型,有扇叶型(fanleaf),黄化花叶型(yellowmosaic)和脉带型(veinbanding),因而有人统称为扇叶退化症(fanleafdegeneration).卷叶病,栓皮病和茎瘟病其病原目前仍不十分清楚,根据其能够通过嫁接传播和葡萄罹病后的症状而归为病毒病之列.以色列的几位病毒专家从卷叶病株上分离到马铃薯y病毒组的典型丝状病毒,有人认为这就是卷叶病的病原.但还需要进步证实.茎痘病(stempitting)又名茎纹孔病(legnoficcio),有人说这与扇叶病毒有关,在意犬利和法国有证据说明当线虫hinemaindex存在时,茎纹孔病就象扇叶病样在大田扩散,而在瑞士和美匿未证实茎瘟病株中存在扇叶病毒.可能的情况是茎瘟病有几类不同的痫原.二,葡萄病毒病的为害症状及其传播方式葡萄病毒病由于种类较多,其症状存在着枉j互交钳的现软,外台染的较多,杵识别诊断忡采了披式自册雅,有肘使是旧种-.再毒由f经染的品种和发不而表现各舜,如扇叶退化班.然而,不同的病毒或多或少总是存在着差异,如卷叶病和栓皮病虽然二者都可能造成浆果为红色的葡萄品种叶子变红,但卷叶瘸红叶其叶脉仍保持绿色,而栓皮病则整叶变红,又如栓皮病与茎瘟病二者在树干部位的症状极为相似,即都表现木质痘斑和淘槽,但在以沙地葡萄(.rupstris)系统为砧木时,茎瘟病只在搂口以上的木质部表现疵状,而拴皮病在按ka上一f均可出现症状.葡萄病毒病可以根据其传播方式分成四类t(i)土壤线虫传病毒病i(2)土壤真菌传病毒病;(g)蚜虫传病毒瘸;(4)传毒介体不详的病毒病.表现症状主要有:扇叶,褪绿,斑纹,黄化7e,f叶脉带化,叶脉黄化,线斑纹,透明斑点,星状花叶,褪绿环纹,卷叶,黄他,皱叶,耳突,萎缩,丛簇,腿棱,小粒果,栓皮,苇蛊等.三,葡萄病毒病的诊断和病毒鉴定症状是识葡萄病毒耩的重要依据,具有较高的诊断价值.许多葡萄病毒可以通过观察症状初步确定,如扇叶,花叶,脉带等,有些品种如瓶儿,甲裴露被卷叶病毒感染届可引起叶子变红,反卷.欧洲一些国家在无毒母本园建立后每年都要通过肉,带脉病毒球牧nm,咏球状30nm.日本的shigetonanba等认为卷叶病原为一种较长而弯曲的杆状病毒.酶联免疫吸附测定(elisa)是一种快速鉴定葡萄病毒病的手段.有资料表明,对于葡萄扇叶稿毒,铬黄花叶病毒,葡萄无味果病毒可以用这种方法进行赢.但对于葡萄卷叶辅毒,检皮病毒和茎痘病毒目丽甩在葡萄病毒病的鉴定中应用最毋舶离属指示植物鉴定法,这电是被人们认为最可靠的一种方法,根据病毒的汁液和非汁液传染性而使用两种不同类型的指示植物.前者用革本撮示一植物,常见的有千日红(gorahrena.g/obo.一日),昆诺藜(chencodiumuinoa),苋色藜(chenopodium.amaranticolor)和黄瓜(cncclmissatiuz)等届者利用葡萄属的木本指示植物,常见的有st.geog,cargnane,mission,bacco22a,in一33,ma1一aro,emperor,cabernetfranc和itall:等.草本指示植物鉴定时使_刖常j盘【的金刚砂磨擦接种法,即取被检树的叶片或根放在研钵内捣碎,加入510倍量的ph7.0的o.1m磷酸缓冲液和:.5的尼占丁用脱脂棉轻轻磨擦稻有400600目金刚砂的指示植物叶片,接种后用清水冲洗接种叶,若带有病毒的话,几天后在指示植物的按1和上位叶表现症状,见表2.木本指示植物鉴定时是通过嫁接的方法,除嵌芽接法和芽接扦插法外,目前最常用的是绿枝嫁接快速鉴定法.这种鉴定方法快而准确.如用st.george鉴定fleek时,1个月即可表现出斑纹症状,鉴fanleal-ttj2n后可出现扇状畸形;用caberne.franc鉴定leafroll时28个月后表现卷叶短状,碍ln一33鉴定corky.bark只需2个日叶转上就出现褪绿斑或早期红叶,34个月后枚条节间或叶栖出现忡胀.部分枝条出现龟裂.绿枝嫁接的方法i990年第4期辽宁农业一一一1墒簟痫种要,.一,症状,播jj建:要分名i为r症萄岛升稿q匈卷叶葡萄控皮瘸葡萄茎痤病葡萄黄佗花叶萄萄斑点崭简萄铬黄花叶u1葡萄脉带病镯萄黄嘛病葡萄星状花叶病葡萄无味果病葡萄叶昧坏死病葡萄金黄寅lgfvglivgcbv.gspvgymvgfiv?ijgcmvigvbvgyvvgamv葡萄皮尔斯舟j葡萄耳妻煮i葡萄黄斑赢葡萄脉花叶霜葡萄赢技辆i铂萄传染性死瘟葡萄梢桔粕葡萄joanessyve瘸锄萄黑术痈葡萄矮缩病葡萄bratislava铺萄黑比诺红畸萄南舟菜花叶一葡萄番茄跻斑寮萄番茄丛蝮病葡萄番茳黑环们萄烟草环琏癣萄烟草花叶霜gavgvnvgfd(类苗质体)gpd(立克次体)gevgysvgvmvgftvginvgsnvgjsvfi,1v.sb,ym.yb.dwlr,rddwlr,rd.scbr.wpwym.ty.sbfi,vclt.li.ly,lw.sb.wli.lp,ly.vblc.lp.sb,vm.am.vcfsl,uf.w.wejvbs.w】gl,lr.ly,wlb.wes.bs.c.wym.vbvm.vnftln.lylc.lp.lwdw.fv.lc.vbgbw类茁质体)bwgsvjdw.wgbv.ymglrpvgamvgtrsvgtbsvgtbrvgtrvgtmvrdwly.vrdwfl.ls,sb,ymbsls,rs.wdw.ls,sb,ymlr.vmif.ntic.jt,nth.ji.nt】c.ntge.ltge,lgt.sotst?jt,ntnt?ftntntat?47兰要甜布全量金界美酗誊大利苷美恒意大利等量l目等尘世界匈牙蒯跌北美等燕意大利,美国等罟永生世葬?法国辞美国.墨西哥等殴制.黄国等澳太荆亚垒世界?美国,意大剥等捷克和斯洛伐克苏叶伯绿斑.lb:叶烧.斗枯,li:叶畸形.lp:墁致班.lm:叶坏死班.lr.叶.ls叶艇点lt:叶化.lw:白化叶.ly:叶黄化.nt=鼗盟悻,ns:互茹.rd:扛叶rs:nl习,砸.sb小靼sc:且壁胀或腹裂.set:觯传.sot:土f.t;新捎,ty:树柑黄化.uf.果无味,vb带脉.vbs:脉黑斑.vc;昧明,vn叶脒土f=死.vm;叶脒黄砸.vr,红脉.w;植林衰弱,wb;丛簇.we:着色不良.wp:术质癌斑.ym;黄化花叶.yv:黄脉.表内为传播方式不咀蛾尚米最后定论.gggggggggg?48?辽宁杠业科学l990年第4期表2草奉指示植物对病毒的反应千雨红晶诺蘑葡萄病毒igfvgvmvgvbvgcivgyvvgamvlgtrsvgtrv1gtbrvgprmvlc-nn;cc?nic一=_览色藜上位叶霰种叶l寺位注;c;褪绿斑m:斑驻.v脉阴,d:扭曲畸形,n:坏死斑,t:顶端坏死.是以指示植物为砧木,将待检树的单芽茎段劈接于指示植物上,指示植物的剪口下留一饱满芽,其余副梢抹掉,嫁接成活后随时和祭接口下饱满芽所生剐梢的症状反应.各种木本指示植物对病毒的反应见表8.当然也有将指示植物嫁接在被检树上的情况,其效果也比较理想.四,葡萄病毒病的防治对于葡萄病毒病应坚持综合防治原则.在国外也曾试图选择一些杀病毒药剂,但均未得到满意的效果.最近加拿_人曾将杀病毒剂丑ribavirin,dhpa,araa和pyazofaran加入茎尖组织培养基中使之杀死病毒已取得一定的进展.培育无病毒葡萄苗木是一项经济而有效的措施.欧,美,日本等某些地区和品种已达到无毒化(主要是无卷叶,扇叶,拴皮表3木本指示植物对病毒的反应病毒名称st.geor窖ebcco22aln-33missi0ncaign*nemataroemperorc*bemetfrancitarlagfvlp,fgymvym.lpgvbvlp,vgcmvymgyvv一一gtbrvrgamvfvgmivfigspvwpgpdv一一glrvydwgfdvlr.ggcbv一一gysv一一gllvgev一一一f一一一ymym一一vb一一一一ym一一一lp,vbr一一一fi一一wp-一一lblr,rdvb,rd一一一scvb一一ym一一m.cuymyv.m一一lbwedw.y一一一wp立新旧,人人,了由于葡萄病毒病所造成的拟大.除此之外诸如消除传毒介件,;选育抗性砧术和严格的裣疫措施也是葡萄辅毒病防治中不可缺少的环节.培育无病毒葡萄母株主要采取三种措施t(1)热处(2)生长点飙织培养j(8)热处理稚陡点组织培养相结合.热处理作为一种有效的治疗衙椅病毒病的方法已在全世界广泛使用.热处理法对崮叶祸株的脱毒较容易,但对卷叶病,栓皮病和茎痘痫株均较困难.据美国报道,除崩叶退化症外其余几种病毒热处理脱毒率只宥75%,有时必须经过几年或凡十年长期反复多次的处理才能奏效,对于黄斑病和l;6c花叶病热处理毫无效果.生长点组织培养是一种较新的生物学技术,它在葡萄脱病毒考碡巴获得许多诚功的实例,如葡萄卷叶病,yellowspeckle和fleck等.日本的masahlk婚提零叶毒3,840c热处理100天以上脱毒率仅有60,而采用茎生长点培葬怯脱毒率达80.4.当然,热处理和生嵌点培养其脱毒l效果往往因不同葡萄品种,不同辅毒而青差异,单独使用哪一种办法都有它的局限性如热处理卷叶病毒时对木品1种的脱毒率为100%,对甲州,奥山宝石等品种为鉴此,人们想到了将二者结合起来进行脱病毒,结果表明这种办法的脱毒效果比单一方法好得多.热娃理和生长点培养相结台是将二者各自.约优势融为一体,傍脱毒效果更为理想.郑怀民等旺穹88)通过这种方i击获得了若干个品种的无病毒葡萄母株兵体作法是首先格盆裁葡萄放在3窖出m恒温热处理箱内处理28个月,一然后切职基生长点组织0.30.5毫米进往培弊.培养基(1妇康杰品种)以1/2ms4-gia1+iba0.5+6bai.o4-s:00+a6o0.为佳,生长点在此培养基上可以完成愈份组织增生和茎叶分化两个步骤,而根分化培养基以1/2b5+iaa+s1ooflo+ao较为可靠.试管苗移出后进行绿枝嫁接鉴定,经两个生长夺的重复最确定无毒母株.热处理和生长点纵培养桕结台的另一利方式是在组织培养过程率进行热处理.根据p.bolkus等报道,在试管苗培养过程中不同的病毒所要求的脱毒温度有很大的变异性.如对葡萄扇叶病毒在白天25】嵌问20c条件不能脱掉,而35恒温条件脱毒率100,对于黄斑病毒日25和夜20c条件1脱毒事100%,相反在35恒温条件脱喾率只有56%.生长点组织培养曲脱毒效果很大程度上取决于生长点切取的大小,一般讲,切盼越小,脱毒率越高,但培养成活率就越低.另外,不可否认生长点切取的越小在培养过程中发生变异的可能性就越大(主要是染色体数目),这样原品种的优良特蛙就会受到威阱.因此在生长点切取大小的决簟中应保持遵慎态度.建立各级无毒葡萄母本国,大力推广无毒葡萄苗木是限制病毒扩散,减轻病毒危害韵一项必要措施.通过大量繁殖和推广无毒葡萄菊木,及早更新带毒株,达到无毒他育苗和栽培.建立各级无毒葡藏母本园和大力推广无毒苗末应晦国家政府f统广设计和管理,比较简单的程序为,在葡萄的无毒母本目柏生l产园以及苗圃的?50?辽宁农业斟学1990丰第4期金邦1号植物健生素对康太葡萄的试验效果赵文启(辽宁省敬业科学院)金邦1号是一种新型壶塑堕堑萱薹,为了解其对康太葡萄的生长,品质,产量的影响,特做此试验.一,材料与方法t989年于沈阳市东陵公园葡萄园,选长势,座果,树体大小,树龄,立地条件及管理水平相似的8年生康太葡萄6株,于花前,花后及幼果期喷施金邦1号500倍液,并以清水为对照,每一处理各8株,即单株区组,3次重复.调查及化验项目.花朵,花序座果率,果实(果粒)大小,果实营养成分(单糖双糖