需氧革兰阳性杆菌ppt课件.ppt

需氧革兰阳性杆菌 芽胞杆菌属 Bacillus 李斯特菌属 Listeria 丹毒斯菌属 Erysipelothrix 加德纳菌属 Gardnerella 需氧芽胞杆菌属（Bacillus）48个种 与医学有关5个种 炭疽芽胞杆菌（B.anthracis） 蜡样芽胞杆菌（B.cereus） 蕈状芽胞杆菌（B.mycoides） 巨大芽胞杆菌（B.megaterium） 苏云金芽胞杆菌（B.thuringiensis ） 1 临床意义 引起人、蓄共患的急性传染病，包括皮肤炭疽、肺炭 疽、肠炭疽、败血性炭疽，烈性传染病, 死亡率极 致病因子： 荚膜：抗吞噬，有利于细菌在组织内繁殖扩散 炭疽毒素：保护性抗原、致死因子、水肿因子 病后可获得持久免疫力 炭疽芽胞杆菌2 炭疽芽胞杆菌 革兰阳性大杆菌，两端截平，竹节状排列，有芽胞、 无鞭毛、可有毒株有荚膜，芽胞椭圆形，小于菌体， 位于菌体中央，多在有氧条件下形成，2530，在 培养基中、土壤内、动物尸体解剖后暴露在空气中， 都易形成芽胞在活体或完整未解剖尸体内不形成芽胞 ，尸体严禁解剖 3 普琼平板：灰色、粗糙型菌 落；卷发状边缘（低倍镜下 ） BAP：不溶血 NaHCO3 BAP： 有毒株产生荚膜呈黏液 型菌落，挑取时呈粘丝状(鉴 别要点) 无毒株粗糙型菌落 培养特性 n肉汤培养基：絮状 沉淀 n明胶371824h 表面液化成漏斗状 ，由于细菌沿穿刺 线向四周扩散形成 倒松树状。 4 生化反应 葡萄糖+ 、麦芽糖+ 、蔗糖+、 卵磷脂酶弱+、触酶+ 硝酸盐还原试验+、VP、吲哚、硫化氢 、柠檬酸盐、尿素 明胶液化 胨化牛乳：在牛乳中生长24天后牛乳凝固 并缓慢胨化 5 抗原 l菌体多糖抗原：与毒力无关，耐热，特异性 不高，病兽脏器皮毛加热后仍可与相应抗体 反应，称Ascoli热沉淀反应 l荚膜多肽抗原：抗吞噬，与毒力有关 l芽胞抗原： l炭疽毒素Anthrax toxin： 由保护性抗原、 致死因子、水肿因子形成。 6 抵抗力 耐热、耐干燥 对氧化剂敏感 对青霉素、磺胺类抗生素敏感 7 微生物学检查 标本的采集：分泌物、痰、血液、粪便 、呕吐物、脑脊液等，严禁宰杀解剖死 蓄。 标本的处理：液体标本取沉渣分离培养 ；固体标本用生理盐水浸泡，水浴杀死 非芽胞菌；血液、脏器、渗出液增菌或 直接分离培养 8 痰、呕吐物、CSF 及炎症分泌物 2%兔血清肉 汤快速增菌 374h 荚膜荧光抗体染色 或荚膜肿胀试验 直接涂片 荚膜染色 G染色 初步报告 0.2ml注射小白鼠 腹腔，8h后解剖 涂片G染色、 荚膜染色 初步报告 快速检验程序 核 酸 检 测 Ascoli试验 皮毛、腐 败脏器等 9 生化反应 噬菌体裂解 青霉素抑制 毒力试验 皮毛、腐败脏器等血液 以NG制成悬液 经加温或饱和 尿素处理 肉汤增 菌培养 BAP或戊 烷脒平板 2%兔血清肉汤48hG染色镜检菌落特征 动力观察 串珠试验 确定报告 荚膜肿胀试验 分离培养 检验程序 法定报告传染病，发现疑是病例应于24小时内上报CDC 10 戊烷脒多粘菌素琼脂 基础培养基 25g/L戊烷脒: 杀灭利什曼原虫等寄生虫 3000IU/L多粘菌素 2%脱纤维羊血 11 检验方法 涂片染色：革兰阳性大杆菌、竹节状排列、 有明显荚膜和芽胞初步报告 荚膜荧光抗体染色或荚膜肿胀试验 核酸检测：核酸杂交 分离培养：BAP或戊烷脒多粘菌素B等选择性 培养基。 2%兔血清肉汤增菌分离培养 12 菌落特征 形态染色 生化试验:表131 串珠试验: 接种于含青霉素(0.050.5U/ml) 的肉汤中，37 6h，大而均匀成串的圆球 状菌体，与青霉素抑制细菌细胞壁合成有关 ，类炭疽无此现象 鉴定试验 13 接种于含青霉素5、10、100U/ml琼脂平板， 3724h 生长 受抑制不生长 串珠和青霉素抑制联合试验： 兔血琼脂平板 抑菌环 青霉素纸片 青霉素抑制试验 串珠形成区 14 噬菌体裂解试验：AP631炭疽噬菌体 NaHCO3毒力试验：接种于含0.5%NaHCO3和10% 马血清的平板，10%CO2、37、2448h，有毒株 形成荚膜黏液型菌落，无毒株不形成荚膜粗糙型 菌落 毒素动物试验：小鼠、家兔或豚鼠皮下接种 植物凝集素试验：荧光或酶标记PHA与菌体多糖反应 Ascoli热沉淀试验：可作追溯性诊断 其它实验 15 临床意义 l 食物中毒：含菌量达105/g以上，夏、秋季多 见，中毒食物大多无腐败、变质现象，感 官性状正常，应引起注意 呕吐型耐热肠毒素 腹泻型不耐热肠毒素 l 全眼球炎（外伤后） l 心内膜炎、败血症和脑膜炎 蜡样芽胞杆菌 Bacillus cereus 16 蜡样芽胞杆菌 Bacillus cereus 形态：革兰阳性大杆菌、两端钝圆 、有芽胞、周鞭毛、无荚膜 培养特性：需氧或兼性厌氧，最适 温度3035，营养要求不高。 普通琼脂平板：菌落较大，灰白色， 表面粗糙似毛玻璃状或融蜡状，有 蜡样光泽 BAP 有溶血 卵黄平板生长迅速，培养3h后， 虽看不到菌落，但该菌可分解卵磷 脂而形成白色的混浊环，称乳光反 应或卵黄反应 17 生化反应 葡萄糖、蔗糖、麦芽糖等 卵磷脂酶+ 、VP 胨化牛乳、液化明胶， 多次传代后生化特性常可改变 18 微生物学检查 呕吐物、残留食物等 活菌计数接种 BM BAP 卵黄琼脂平板 371824h 直接涂 片染色 镜检 动物试验 生化反应血清凝集 报告结果 19 结果解释 l因食品暴露于空气中，在一定程度都会受到 本菌污染，所以不能分离出该菌就认为是引 起食物中毒的病原菌。 从食物中分离出菌数105CFU/g，提示本菌 活跃生长，构成潜在危险 从可疑食物分离到的菌株与从病人粪便和(或 )呕吐物中分离到的菌株属同一血清型 20 三、枯草芽胞杆菌 21 生物学性状形态染色 革兰阳性大杆菌、 两端钝圆 有芽胞、无荚膜、 有鞭毛 22 培养特性 BM：灰白色、不透明、干燥、锯 齿状粗糙大菌落 BAP：溶血大菌落 23 生化反应 触酶+ 葡萄糖、甘露醇、木糖、阿拉伯糖 串珠试验 卵磷脂酶 24 炭疽芽胞杆菌与其他需氧芽胞杆菌的鉴别 鉴别项目 炭疽芽胞杆菌 枯草芽胞杆菌 蜡样及其他芽胞杆菌 形态 菌体两端平截、长链 两端钝园、短链 两端钝园、短链 荚膜 多肽荚膜 动力 + + 菌落 卷发状，有毒株为M型 锯齿状、R型 蜡样或R型 肉汤生长 絮状沉淀、上层清 形成菌膜 均匀混浊有菌膜 卵磷脂酶 + + 溶血反应 不溶或微溶血 溶血 溶血 Ascolis试验 + 串珠试验 + 青霉素抑制试验 + 植物凝集素试验 + 荚膜肿胀试验 + 荧光抗体染色 动物毒力试验 + 蜡样芽胞杆菌的肠毒素可致 小鼠等动物发病致死，但不产生荚膜，其他需氧芽胞杆菌（） 噬菌体裂解试验 + 25 李斯特菌属 产单核细胞李斯特菌 红斑丹毒丝菌 26 一、产单核细胞李斯特菌 生物学性状 革兰阳性短小杆菌成双排列 有鞭毛（1820有动力； 37动力缓慢），无芽胞，无 荚膜 4可生长 BAP：灰白色菌落，有狭窄的 溶血环 半固体培养基：倒伞形生长 27 生化反应 发酵多种糖类 硝酸盐还原试验 甲基红+ VP试验+ 抵抗力 n耐碱不耐酸 n对热敏感 n对多种抗生素敏感（ 首选氨苄青霉素） 对磺胺、杆菌肽、多 粘菌素耐药 28 临床意义 主要引起脑膜炎、败血症 传播途径：粪口途径，胎盘和产道 致病因子：溶血素和菌体表面成分 29 微生物检查 标本 涂片革兰 染色镜检 荧光抗 体染色 动力检查 （25，37） 血液 肉汤增菌 脑脊液 沉淀物 咽喉拭子 、组织、 粪便冷增 菌 接种羊血琼脂平板 生 化 反 应 血清学试验 动物试验 30 二、红斑丹毒丝菌 革兰阳性杆菌，无芽胞，无鞭毛，无荚膜 厌氧或微需氧 BAP：形成两种菌落光滑型小菌落和粗造型大菌 落。 发酵葡萄糖及乳糖、液化明胶、产生硫化氢 主要引起家畜感染及人类丹毒 31 加德纳菌属 阴道加特纳菌 32 生物学性状 多形性，单个或成双排列，染色不定（视菌 龄和菌种而定：临床株G+，保存株 G）， 无芽胞、无荚膜、无鞭毛 兼性厌氧，营养要求高，BAP：可有溶血 葡萄糖、麦芽糖、蔗糖 氧化酶、触酶 对青霉素类敏感、对磺胺类耐药 33 临床意义 与非特异性阴道炎（BV）有关 BV是阴道内乳酸杆菌被另一组厌氧 菌为主的细菌取代，同时伴有阴道分泌 物性质改变的一组综合征。 主要病因为阴道内乳酸杆菌大量减 少，伴有阴道加特纳菌、类杆菌、消化 球菌及支原体大量增殖。 34 微生物