血小板血型基础与临床PPT课件.ppt

血小板血型基础与临床 1 主要内容 lHPA及其相关实验诊断 l血小板血型的主要临床意义 lPTR的对策 2 血型 l所有血液成分的遗传性标志。 3 血型的发现 l红细胞血型：1900年，Landsteiner发现ABO 血型。 l血小板血型：1959年，Van Loghem发现Zwa 血型。 l白细胞血型： 1960年，Lalezari发现HNA 1965年，Bassuat发现HLA 4 血小板血型系统 l血小板血型抗原主要有二大类 血小板相关抗原 血小板特异性抗原 5 血小板相关抗原 l血小板表面存在的与其他细胞或组织共有的抗 原 。又称血小板非特异性抗原或血小板共有 抗原。 l包括主要组织相容性抗原（HLA）和红细胞血 型系统相关抗原 。 6 血小板表面的HLA抗原系统 l血小板表面存在HLA-A、HLA-B和HLA-C位点 等HLA类抗原 。 l未发现血小板表面存在HLA-DR、HLA-DP和 HLA-DQ等类抗原。 l但是经过细胞因子的刺激，在血小板表面能产 生HLA-DR抗原。 7 血小板表面的红细胞血型系统 l血小板表面存在ABO、Lewis、I、i和P等红 细胞血型系统抗原。 l但不存在Rh、Duffy、Kell、Kidd和 Lutheran等血型系统抗原。 8 血小板特异性抗原 l人类血小板抗原（Human platelet antigen, HPA） 是位于血小板膜糖蛋白（glycoprotein，GP）上的 抗原表位。 l按发现时间顺序排列如下：Duzo、PlA（Zw） 、PlE、Ko（Sib）、Bak（Lek）、Yuk（Pen ）、Br（Hc、Zav）、PLT、Nak、Gov、Sr等 等。 9 血小板特异性抗原系统国际命名 l血小板特异性同种抗原系统一律命名为人类 血小板抗原系统（HPA）。 l不同的抗原系统按发现顺序用数字编号 l对偶抗原按其在人群中频率由高到低，用字 母命名，高的为a，低的为b 。 l1990年被国际输血协会确认的血小板特异 性抗原有5个系统共10种抗原，正式命名为 HPA-1HPA-5。 10 PNC l2003年国际输血协会（ISBT）和国际血栓 和止血协会（ISTH）建立的血小板命名委 员会（The Platelet Nomenclature Committee，PNC） 。 11 12 血小板特异性抗原的分子生物学 l在已知其分子机理的22个血小板抗原中，其基 因多态性大多是由于相应血小板膜糖蛋白结构 基因中的SNP引起，而致相应位置的单个氨基 酸变异所致，唯一的例外是HPA-14w。 lHPA-14w： 19091911delAAG K611del 13 14 未命名的HPA Vaa、Moua：前者被定位于GPb/a上， 后者尚未被定位。它们的等位基因结构多态 性和蛋白结构多态性也也尚不了解故暂时未 被归入HPA命名法。 Duzo抗原虽第一个被发现，但至今未发现 第二例抗-Duzo，其所在糖蛋白、蛋白结构 和基因结构多态性均未知。 15 血小板血型相关实验技术 l近年来，随着分子免疫学、分子生物学的发展 和各种标记技术（如流式细胞术、荧光显微镜 、免疫电镜等）在医学领域的应用，血小板血 清学检测方法有了很大进展，一些分子生物学 技术也开始应用于血小板血型分型。 l除血小板特异性抗原HPA外，血小板表面的 HLA、ABO等抗原也具有重要临床意义。由于 ABO血型可用相关红细胞方便地检测，故临床 上对血小板血型的检测主要集中在HPA和HLA 的检测上。 16 血清学试验 l血小板免疫荧光试验（PIFT） l血小板固相微板技术：又称为固相红细胞粘附 法（SPRCA）或混合细胞粘附试验（MRCA ） l单克隆抗体特异的血小板抗原固定试验（ MAIPA） l改进的抗原捕获酶联免疫吸附试验（MACE） l流式细胞仪检测技术（FCM）和珠子介导的血 小板相关抗体检测法（LifeMatchTM Luminex100 screening assay） l微柱凝胶血小板定型试验 17 HPA基因分型 l由于目前所知的大部分HPA等位基因多态 性皆为单核苷酸多态性（SNP），故HPA 的基因分型方法与SNP检测方法类似 。 18 HPA基因分型方法 lPCR-RFLP ：Newman等（1989年）首先应用。 HPA-4（Yuk）和HPA-8（Sr）系统缺乏合适的酶 切位点，不能直接使用此法进行分型。 lPCR-ASO ：Mcfarland等（1991年）首先将此技 术用于HPA-1的分型。 lPCR-SSP ：Metcalfe和Waters等首先将此技术 用于HPA-1的基因分型。 lPCR-SSCP ：Peyruchaud等（1995年）报道利 用PCR-SSCP对HPA-1和HPA-3进行基因分型 。 lPCR-SEQUENCE 19 其他基因分型方法 l寡核苷酸连接试验（OLA）或连接酶链式反应 。 l同源双链优先形成试验（PHFA） 。 l差异性解链曲线图分析 。 l5核酸酶分析（TaqManTM分析） 。 20 血小板血型的主要临床意义 l免疫性血小板减少症 自身免疫性血小板减少症（AITP) 同种免疫性血小板减少症 药物诱导免疫性血小板减少症 (DIIT) 21 自身免疫性血小板减少症（ AITP) lAITP比自身免疫性溶血性贫血（AIHA)更常见 。分3类：ITP，再次ITP，急性病毒感染后血 小板减少症。统称ITP。 lPAIgG检测是其最有价值的试验。但是PAIgG 并非特异，其阳性诊断价值仅为46%，阴性诊 断价值为82%。 22 同种免疫性血小板减少症 l新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜 （NAITP ） l输血后血小板减少性紫癜 （PTP） l血小板输注无效 （PTR） 23 新生儿同种免疫性血小板减少性紫 癜 （NAITP ） lNAITP类似于红细胞血型系统的HDN l在白种人中，NAITP的发病率约为1/1000 1/2000，80%是由HPA1a抗体引起的。 lNAITP的死亡率约为10%，第一胎的发生率约 为2059%。 l产前诊断对预后非常重要。 24 25 血小板输注无效 l约有2050%白血病患者，80%再障患者在 长期输注血小板后，发生血小板输注无效。 26 血小板输注 l 目的：主要是防止出血。 l 指征：血小板数量减少或功能异常患者。 l原则：手术或产科病人: 50109/L时，一般需要预防性输注 50100109/L时，视病情而定 100109/L时，通常不需输注 l输注剂量：一般21011以上 27 血小板输注 l 血小板功能障碍，近期有服用阿斯匹林等血小 板抑制药者: 即使计数100109/L，在估计其治疗 中 会有出血倾向时，也应输注血小板。 l 大量使用制剂或全血1520单位以上者: 应输注。 lI、药物引起的血小板减少症等: 除非有大出血危险，一般不宜输血小板。 28 血小板输注无效的判定指标 29 判断原则 l不正常反应：1小时PPR70%），血小板交 叉试验的有效性较差，除非HLA的配合性较好。 49 美国红十字总会的一项调查表明 l基于HLA配型和交叉配合试验两种筛选方法 的血小板输注成功率一致。 lA、Bu配合级效果优于交叉配合性试验。 lBx级与C、D级无区别。 l在已排除非免疫性因素的情况下，有一半的 PTR患者不能检测到血小板抗体。 50 建议的策略 lCREG法 l用SPRCA法随机交叉配型 如果使用CREG法 ，特别建议进行HLA抗体筛 选 要求临床医师检测CCIs 51 如果 lHLA抗体筛选阴性，随机输注；考虑检测HPA 抗体，特别是在排除非免疫因素引起血小板输 注无效的情况下。 l仅有ABO系统抗体，使用ABO血型一致的血 小板或O型血小板。 lHLA抗体阳性，但PRA70%或CCIs差 l抗原阴性血小板交叉配型 。 l选择性召集A,BU级配合的献血员。 53 同种免疫性PTR对策（3）： 其他 l大剂量IVIg ：对于自身免疫性血小板减少性紫癜 患者，大剂量IVIg可以增加血小板计数60%。对 于同种免疫引起的PTR，效果仍有争议，且费用 过高。 l血浆交换 。 l免疫抑制：疗效需23周，不适宜立即输注者。 l输注去除HLA抗原血小板：仍有争议。 l冰冻保存自身血小板。 54 总结（1） l对于不相合的红细胞输注，人们肯定不能容忍， 而对于不相合的血小板输注，人们却认为是常规 。 l事实上，血小板输注无效，往往也伴随着死亡 出血而亡