ELISA在食品检验中的应用.ppt

酶联免疫分析技术在 食品检验中的应用,1/30/2019,酶联免疫分析法(ELISA)是把抗原抗体反应的特异性和酶的高效催化作用有机结合起来的一种非放射性标记免疫检测技术。,ELISA技术流程,1/30/2019,ELISA在食品检验中的应用,食品中农药残留的检测 食品中药物残留的检测 食品中毒素的检测 食品中微生物的检测 食品中转基因产品的检测 食品中其他成分的检测,1/30/2019,1.1 食品中农药残留的检测,自1983年以来，ELISA成为许多国际权威分析机构(如AOAC)分析残留农药的首选方法。有些发达国家，如美国、德国已开发出商品检测试剂盒应用于食品、蔬菜和环境中的农药残留的检测分析。 迄今为止，应用ELISA检测食品中的残留农药主要是除草剂、杀菌剂和杀虫剂。 Clegg等建立了分析草甘膦的ELISA；余万俊等用抗杀虫脒单克隆抗体为试剂，建立了间接竞争法、直接竞争法和标记抗原竞争法等三种测出大米中杀虫脒的ELISA；浙江大学的朱国念等研究出ELISA试剂盒来检测克百威。,1/30/2019,1.2 食品中药物残留的检测,为了促进动物生长，预防动物的各种传染病、寄生虫病的发生，越来越多的激素类兽药、抗菌药、抗寄生虫药，常常被用作饲料添加剂，小剂量长期喂养禽畜水产等动物，导致肉类食品中的兽药残留超标现象日益严重。现在国际上比较重视的残留药物有抗生素、磺胺类、呋喃类、喹喏酮类、激素类和转基因类药物。人们都在寻求适用的检测方法,1/30/2019,8O年代后期，ELISA在残留分析中发展迅速，吴定等制备了兔抗氨苄西林钠血清，建立了快速测定乳中氨苄西林钠含量的ELISA方法 。 2003年，LoomansE 等用新霉胺作为免疫原建立ELISA方法同时检测牛奶中的庆大霉素、卡那霉素和新霉素。,1/30/2019,1.3 食品中毒素的检测,食品中的毒素有三种： 一、细菌产生的毒素； 二、真菌所产生的毒素 三、一些动植物中含有天然毒性蛋白。,1/30/2019,采用辣根过氧化氢酶(HRP)标准高亲和力的黄曲霉B1抗体，可以建立直接竞争抑制ELISA 快速筛选法。 在获得抗河豚毒素(TXX)的单克隆抗体的基础上建立了检测TXX的间接ELISA方法，其最低检出浓度为1.0103mg/I ，明显优于传统方法。 与传统方法相比，间接El ISA方法的样品提取方法比较简单。,1/30/2019,1.4 食品中微生物的检测,常规的微生物学检验：以分离培养、生化试验及血清学试验来进行判断，不仅需要大量的手工劳动，而且检验周期长(67d)。 ELISA检测：不受各种样品成分的影响，而且在23d内即可完成样品筛选。粪样、鱼粉、奶样，其敏感性和特异性分别高达100和97.6。 现已发现有些细菌，如副溶血性弧菌、幽门螺杆菌、大肠杆菌等在低温贫营养的条件下，可以进入“活的非可培养态”，在适当状态下还可以复苏，仍具有致病力。常规的培养法无法检测到处于这种状态的细菌，造成漏检。而ELISA在这方面具有一定的潜力。,1/30/2019,1.5 食品中转基因产品的检测,Rogan等人用ELISA法检测出传统大豆加工产品中混有的CP4 EPSPS蛋白质。这种蛋白质检测方法具有商业可利用性，并具有高度选择性和灵敏性。 FDA 已研究了用双夹心ELISA法来检测食品是否含转基因玉米成分。Envimlogix ELISA测试盒可用于测定玉米中的cry9e蛋白，共测试了9种含玉米的食品，结果的重现性相当好。,1/30/2019,1.6 食品中其它成分的检测,免疫球蛋白(Immunoglobulin，简称Ig)指具有抗体活性，能与相应抗原发生特异结合的球蛋白，是构成体液免疫的重要的物质。牛乳中特别是初乳中免疫球蛋白的含量相当高，最近开发的免疫奶，就是通过对乳牛进行免疫注射从而提高牛奶中的免疫球蛋白的含量；再有市场中强化免疫球蛋白的奶粉等，因免疫球蛋白也是一种蛋白质，具有蛋白质的共性，但其在上述制品中含量又相对的少，常规的蛋白测定法无法测出免疫球蛋白的含量。用ELISA 即可成功解决这个问题，且同时可完成含量与活性的检测。,1/30/2019,以辣根过氧化物酶标记不同动物肌肉和血清球蛋A抗血清检查牛肉、马肉、猪肉、羊肉和驼肉，检出率均在95以上，经与其他血清学方法比较，证实用该法鉴别不同肉类具有较高的敏感性和特异性，而且方法简便，设备简单，判断指标客观真实。 目前，ELISA可检测14种畜禽熟肉制品，包括牛肉、羊肉、鹿肉和马肉等，在掺假率为1时即可检出。,1/30/2019,1/30/2019,对试剂的选择性高, 很难同时分析多种成分,对结构类似的化合物有一定程度的交叉反应,分析分子量很小的化合物或 很不稳定的化合物有一定的困难,缺 陷,1/30/2019,许多学者致力于