实验细菌的芽孢染色和鞭毛染色.ppt

实验三 细菌的鞭毛染色和芽孢染色 主 讲:徐尔尼 生命科学学院生物技术系 一、目的与要求一、目的与要求 学习细菌的芽孢染色和鞭毛染色方法。学习细菌的芽孢染色和鞭毛染色方法。 观察芽孢杆菌形态特征和鞭毛的形态特征。观察芽孢杆菌形态特征和鞭毛的形态特征。 巩固无菌操作技术和显微镜的油镜使用。巩固无菌操作技术和显微镜的油镜使用。 二、基本原理 1 1、鞭毛染色法、鞭毛染色法 细菌的鞭毛很纤细，其直径通常为细菌的鞭毛很纤细，其直径通常为0.010.01 0.020.02mm，所以不能用光学显微镜直接观察到，必所以不能用光学显微镜直接观察到，必 须采用特殊的染色方法，才能被观察。须采用特殊的染色方法，才能被观察。 鞭毛染色原理是在染色前先用媒染剂处理，鞭毛染色原理是在染色前先用媒染剂处理， 使它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进使它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进 行染色。行染色。 二、基本原理 2 2、芽孢染色法、芽孢染色法 由于由于芽孢壁厚、透性低、不易着色芽孢壁厚、透性低、不易着色，因此用，因此用着着 色力强色力强的染色剂孔雀绿或石炭酸复红，在的染色剂孔雀绿或石炭酸复红，在加热加热条件条件 下染色，使染料不仅进入菌体也可进入芽孢内，进下染色，使染料不仅进入菌体也可进入芽孢内，进 入菌体的染料经水洗后被脱色，而芽孢一经着色难入菌体的染料经水洗后被脱色，而芽孢一经着色难 以被水洗脱，当用对比度大的复染剂染色后，芽孢以被水洗脱，当用对比度大的复染剂染色后，芽孢 仍保留初染剂颜色，而菌体和芽孢囊被染成复染剂仍保留初染剂颜色，而菌体和芽孢囊被染成复染剂 的颜色，使芽孢和菌体更易于区分。的颜色，使芽孢和菌体更易于区分。 三、实验器材三、实验器材 1 1、菌种：、菌种：普通变形普通变形杆菌、枯草芽孢杆菌杆菌、枯草芽孢杆菌 2 2、染色剂：、染色剂：硝酸银鞭毛染色液硝酸银鞭毛染色液:(:(A A液、液、B B液）、芽孢液）、芽孢 染色液染色液: :（5%5%孔雀绿染液、孔雀绿染液、0.5%0.5%番红染液）番红染液） 3 3、仪器或其他用具：、仪器或其他用具：载玻片、生理盐水、酒精灯、载玻片、生理盐水、酒精灯、 木夹、接种环、双层瓶、显微镜、擦镜纸、滤纸等木夹、接种环、双层瓶、显微镜、擦镜纸、滤纸等 四、操作步骤四、操作步骤 1 1、鞭毛染色（硝酸银染色法）、鞭毛染色（硝酸银染色法） 取一滴无菌水，滴于玻片一端 取一滴无菌水，滴于玻片一端 取一环菌置于无菌水中，取一环菌置于无菌水中， 让菌体利用鞭毛运动开 让菌体利用鞭毛运动开 然后玻片倾斜，让菌液缓缓流向然后玻片倾斜，让菌液缓缓流向 玻片的另一端 玻片的另一端 室温自然干燥 室温自然干燥 滴加染液滴加染液A A 3-5min 3-5min 水 水 洗洗 用染液用染液B B冲去残水 冲去残水 滴加染液滴加染液B B 1-1.5min 1-1.5min水洗 水洗 干燥 干燥 镜检镜检 结果：菌体深褐色，鞭毛淡褐色并呈波浪形结果：菌体深褐色，鞭毛淡褐色并呈波浪形 。 操作要点：操作要点： 菌种的培养时间为菌种的培养时间为8-108-10h h。 玻片要求光滑、洁净。玻片要求光滑、洁净。 勿用接种环涂布制片。勿用接种环涂布制片。 制片后要自然干燥，不能放在火焰上干燥。制片后要自然干燥，不能放在火焰上干燥。 为使鞭毛清晰可见，水洗时尽量把载玻片冲干净。为使鞭毛清晰可见，水洗时尽量把载玻片冲干净。 四、操作步骤四、操作步骤 2 2、芽孢染色、芽孢染色 涂片 涂片 干燥固定 干燥固定 滴加孔雀绿染液滴加孔雀绿染液 夹住玻片，微 夹住玻片，微 火加热至蒸汽冒出，维持火加热至蒸汽冒出，维持5 5min min 水洗 水洗 番红复染 番红复染 6 6min min 水水 洗 洗 干燥 干燥 镜检 镜检 结果：芽孢绿色，营养体红色结果：芽孢绿色，营养体红色 。 操作要点：操作要点： 加热过程中，要及时补充染液，切勿让涂片干涸。加热过程中，要及时补充染液，切勿让涂片干涸。 在冒蒸汽的条件下，维持足够的时间，否则在冒蒸汽的条件下，维持足够的时间，否则染液不易进入芽孢内。染液不易进入芽孢内。 待玻片冷却后，用缓流自来水冲洗，以免细菌被水冲掉。待玻片冷却后，用缓流自来水冲洗，以免细菌被水冲掉。 尽可能地把尽可能地把孔雀绿染液冲洗干净，以免影响番红的复染。孔雀绿染液冲洗干净，以免影响番红的复染。 五、实验数据及处理结果五、实验数据及处理结果 1 1、根据油镜观察结果，、根据油镜观察结果，绘出枯草芽孢杆菌的形态绘出枯草芽孢杆菌的形态 特征（注意芽孢的形状及着生位置）。特征（注意芽孢的形状及着生位置）。 2 2、绘出普通变形杆菌的鞭毛形态特征。绘出普通变形杆菌的鞭毛形态特征。 六、六、思考与讨论思考与讨论 1 1、用鞭毛染色法准确鉴定一株细菌是否具有鞭毛，要、用鞭毛染色法准确鉴定一株细菌是否具有鞭毛，要 注意哪些环节？注意哪些环节？ 2 2、若涂片中观察到的只是大量游离芽孢，很少看到芽、若涂片中观察到的只是大量游离芽孢，很少看到芽 孢囊及营养细胞，你认为这是什么原因？孢囊及营养细胞，你认为这是什么原因？ 3 3、说明芽孢染色法的原理，