食品添加剂维生素B1的质量规格要求、生产使用工艺和检验方法，食品中该添加剂的检验.doc

食品添加剂的质量规格要求、生产使用工艺和检验方法，食品中该添加剂的检验方法或者相关情况说明1 维生素B1的质量规格要求质量规格要求符合日本食品添加物公定书中维生素B1的相关要求：项目规格检测方法性状白色或略带黄白色微细结晶或结晶性粉末，无气味或略带特殊的气味符合食品添加物公定书确认试验符合注1纯度试验（1）溶液性状不比比较液的颜色浓注2（2）PH值2.73.4注3（3）硫酸盐0.011%（以SO4计）注4（4）重金属20g/g以下（以Pb计）注5水分5.0%注6灼烧残渣 0.20%注7含量98.0102.0%注8【注1】确认试验：（1）在本品水溶液（1500）1ml加入醋酸铅试液1ml及氢氧化钠溶液(110)1ml时，溶液呈黄色。在水浴中加温，溶液变为褐色，放置后，会生成黑褐色的沉淀。（2）在本品水溶液（1500）5ml加入氢氧化钠溶液(125)2.5ml及新调制的铁氰化钾溶液(110)0.5ml后，再加入异丁醇5ml，剧烈振摇2分后放置分层，在紫外线下观察，异丁醇层显青紫色荧光。此荧光加酸成酸性时消失，加碱成碱性时又出现。（3）本品显氯化物反应。【注2】纯度试验溶液性状：称取本品1.0g，加水溶解，配成10ml液体。此液体澄明，颜色不比以1/60mol/L重铬酸钾溶液1.5ml加水配成的1000ml溶液的颜色深。【注3】纯度试验PH值：为2.73.4（1.0g，水100ml）。【注4】纯度试验硫酸盐：以SO4计0.011%以下（1.5g，对照液 0.005mol/L 硫酸0.35ml）。【注5】纯度试验重金属：以Pb计20g/g以下（1.0g，第1法，对照液 铅标准液2.0ml）。【注6】水分：5.0%以下（0.5g，直接滴定）。【注7】灼烧残渣：0.2%以下。【注8】含量：将本品换算成无水物后，含有盐酸硫胺（C12H17ClN4OSHCl）98.0102.0%。2 维生素B1的生产使用工艺2.1维生素B1因其具有良好的水溶性因此可以添加到各类型食品中作为营养强化剂来使用。目前GB 14880及其公告中液态饮料类只有饮液、乳饮料类及风味饮料（限果汁（果味）型饮料）中可以添加维生素B1，本次预申请其在“果蔬汁类” 饮料中来使用。2.2 添加了维生素B1的果蔬汁饮料生产工艺成品溶解、搅拌质量检查包装杀菌、冷却质量检查填充质量检查混合、搅拌质量检查混合、搅拌搅拌加热溶解混合、搅拌将称量好的原料1投入有离子交换水的搅拌罐中溶解、搅拌均匀将称量好的原料2、原料3投入搅拌罐中，混合搅拌均匀将称量好的原料4和各种维生素及矿物质加入搅拌罐中，混合搅拌均匀将称量好的原料5加入搅拌罐中，混合搅拌均匀3 维生素B1的检验方法3.1分别精确称取待测样品与盐酸硫胺标准品（预先与以维生素B1同样的方法测定水分）0.1g，各自加入与流动相同一组成成分的溶液使之溶解，准确定容至50ml。3.2分别精确量取上述溶解溶液10ml，各自正确加入苯甲酸甲酯的甲醇溶液（150）5ml，再加入与流动相同一组成成分的溶液至50ml，以此作为检测以维生素B1同样的方法测定水分）0.1g，以此作为检测溶液和标准溶液。3.3分别量取检测溶液和标准溶液10l，按照以下的操作条件进行液相色谱分析。求得检测溶液和标准溶液的苯甲酸甲酯的相对硫胺素峰面积的比QT及QS，根据下记公式求得本品中盐酸硫胺的含量。盐酸硫胺的含量=3.4操作条件：检测器：紫外吸光光度计（测定波长 254nm）色谱柱充填剂：510m液相色谱分析用ODS硅胶柱管：内径约4mm，长1530cm不锈钢管柱温：25左右的一定的温度流动相：将1-辛烷磺酸钠1.1g加入乙酸（1100）1000ml使之溶解，取该液600ml，加入甲醇/已腈混合液（3：2）400ml。流量：调整流量，使硫胺素的保持时间为12min。本方法参考：日本食品添加物公定书（第8版）维生素B1（硫胺素盐酸盐）的定量检测方法。4 食品中维生素B11的检验方法（高效液相色谱法2(公定法)）4.1仪器和试剂4.1.1附带荧光检测器的高效液相色谱仪(HPLC(FL)4.1.2反应泵4.1.3色谱柱：反相分配型，内径4.6mm，长度150mm4.1.4标准维生素B1：日本药典标准品盐酸硫胺标准品（日本公定书协会）醋酸缓冲液(pH4.5)：取4mol/l醋酸钠溶液40ml和50%醋酸溶液20ml，用2L水溶解过滤或离心分离后，使用其上清液。4.1.5酶溶液：取维生素B1定量用高峰淀粉酶B0.5g，在临用时溶于10ml醋酸缓冲液(pH4.5)中，过滤或离心分离后使用其上清液。合成沸石：活性吸附剂，吸附维生素B1定量用4.1.6 0.01mol/l磷酸二氢钠0.15mol/l高氯酸钠混合溶液(pH2.2)：取磷酸二氢钠(无水,特级)2.4g,高氯酸钠(无水,特级)36.7g，加水,定容至2L.使用PH计，用高氯酸调整pH值至2.2 。4.1.7 25w/v%氯化钾0.1mol/l盐酸溶液(洗脱液)：加入8.5ml浓盐酸至1L25w/v%氯化钾溶液中。4.1.8 0.01w/v%铁氰化钾15w/v%氢氧化钠溶液：取10mg铁氰化钾(特级)放入100ml褐色容量瓶中，加入15%氢氧化钠溶液，定容至100ml。每次使用时配制。4.1.9 其他试剂若无特别说明,均使用色谱纯。4.1.10 玻璃容器选用褐色的玻璃容器。4.2 试验溶液的配制精密量取样品(110g)放入100ml提取瓶3中。加入0.1mol/l盐酸50ml,沸水浴中加热30分钟，时而搅拌进行提取.在50以下冷却，用4mol/l醋酸钠溶液调整pH值至4.04.5。添加5ml酶溶液，在37下保温一晚后，加入醋酸缓冲液(pH4.5)定容至100ml。过滤后的滤液作为样品溶液。精确注入适量的样品溶液(含15g维生素B1)至已用水填充了活性合成沸石(1.5g)的吸附柱中，以1ml/min的流速让其吸附。用5ml水冲洗吸附管内壁,然后用3060ml沸水清洗色谱柱后,用沸腾的洗脱液以1秒1滴(3ml/min)的流速洗脱，分取大约25ml的溶出液。降到室温后,用洗脱液定容至25ml，作为HPLC用试验溶液。4.3 标准溶液的配制4.3.1标准原液在105下干燥标准维生素B1 2小时，在干燥器内冷却30min后，精确量取100mg放入1L褐色容量瓶内，加入1mol/l盐酸50ml溶解后，用水定容(100g/ml，在阴凉处保存6个月稳定,每隔6个月配制一次)。4.3.2 标准溶液精确量取5ml标准原液放入500ml褐色容量瓶内，用0.1mol/l盐酸定容(1g/ml, 每隔1个月配制一次)。4.3.3 HPLC用标准溶液用加热完毕的洗脱液稀释标准溶液，分别制成浓度为0.1、0.05和0.02g/ml的HPLC用标准溶液。4.3.4 测定 分别注入HPLC用标准溶液20l至高效液相色谱仪内4，测定各维生素B1 的峰值，根据此峰值制备标准曲线。并根据此标准曲线求得样品中维生素B1的含量。(高效液相色谱仪操作条件)色谱柱：内径4.6mm,长度150 mm,不锈钢制5。流动相：0.01mol/l磷酸二氢钠0.15mol/l高氯酸钠的混合液(pH2.2)甲醇(9:1v/v)检测器：荧光分光光度计6波长：激发波长375nm, 荧光波长440nm流量：0.8ml/min反应液：0.01mol/l铁氰化钾15w/v%氢氧化钠溶液, 0.4ml/min7反应管：内径0.8mm，长度100cm4.3.5 计算试液中维生素B1的含量(mg/100g)CV/V25N100/W10-3 C：根据标准曲线求得的维生素B1的浓度（g/ml）V：定容量（ml） V：色谱柱吸附量（ml）N：稀释率W：试样采取量（g）1 允许作为食品添加剂使用的维生素B1类中的dibenzoyl thiamine（二苯甲酰硫胺素），bisbentiamine（二苯甲酰二硫化硫胺），不能用该试验方法检测。若对上述成分进行定量，则需要采用不同的试验溶液配制法。thiamine dicetylsulfate（硫胺素十六烷基硫酸盐）, thiamine thiocyanate（硫胺素硫氰酸盐）, Thiamine Naphthalene-1,5-Disulfonate（硫胺素萘-1，5-二磺酸盐）及thiamine dilaurylsulfate（硫胺素二月桂基硫酸盐）通过硫胺素定量。 另外,也有像hydroxyethylthiamine(HET)一样在活体内进行丙酮酸代谢的中间体，作为活体丙酮酸的某种形态而存在。HET包含在总硫胺素这个概念之内，根据使用铁氰化钾的硫色素法,可求得丙酮酸和硫胺素的合计量。2 有注入高效液相色谱仪后，相对各种维生素B1磷酸盐酯生成各种硫色素的postcolumn定量法。但由于食品中的维生素B1磷酸盐酯全部变成游离的维生素B1 后被吸收，所以通过酶分解全部变成游离维生素B1 后再用色谱柱后衍生postcolumn法定量。此外，也有用溴化氰或铁氰化钾做硫色素，进行溶剂萃取，注入至高效液相色谱仪后检测其荧光的色谱柱前衍生法。此法有不需要反应泵的优点，同时也有容易受样本不同反应率影响的缺点。3 褐色玻璃制,带有100ml刻度线和瓶塞的提取瓶。可用烧杯和容量瓶代替使用。4 考虑通过试注等,稀释成和标准溶液0.1g/ml大致相同。由于沸石色谱柱的绝对吸附负荷量大约为10g，因此需要4倍以上稀释时，可再一次操作沸石色谱柱来比较值的大小。5 使用Cosmosil C18 Econopac(TESQUE公司)或相当品。6 为提高灵敏度，检测器的单位容量宜大(例如12l)。7 虽然氢氧化钠的浓度在1%20%的