实验八维生素B1片含量测定的方法验证.ppt

药药物分析实验实验 实验八 维生素B1片含量测定的方法验证 设计性实验 实验原理 维生素B1又称盐酸硫胺 （thiamine hydrochloride）， 化学名称为氯化4-甲基-3(2-甲基- 4-氨基-5-嘧啶基)- 甲基-5-(2-羟基乙基噻唑鎓盐酸盐 性 质 溶解性：水中易溶，乙醇中微溶，乙醚中不溶 硫色素反应： 紫外吸收特性：Amax=246nm 与生物碱沉淀试剂反应 氯化物特性： 特征性鉴别特征性鉴别 含量测定含量测定 氯化物检查氯化物检查 原理 特征性鉴别硫色素反应 维生素B1在碱液中可被铁氰化钾氧化生成硫色素 ，色素转溶于正丁醇(或异丁醇、异戊醇)中，显 现于酸中消失的蓝色荧光。（见刘文英主编药 物分析第六版，P258） 含量测定 维生素B1有紫外吸收，Amax=246nm， 实验方法实验方法 1.鉴别鉴别反应应 取本品约5mg，加氢氧化钠试液2.5ml使其溶解 ，加铁氰化钾试液0.5ml与正丁醇5ml，强力振 摇2min，放置使成两液层，上层醇液即显强烈 的蓝色荧光，加酸使成酸性荧光即消失，再加 碱使成碱性，则荧光复现。 2.含量测定 精密称取片粉适量，相当于维生素B125mg，置 100ml量瓶中 加盐酸溶液（91000）约70ml， 摇匀15分钟使维生素B1溶解，并定容至刻度，摇 匀 干燥滤纸过滤精密量取续滤液5.0ml，置 100ml量瓶中，共2份，盐酸溶液（91000）定容 至刻度，摇匀 测 A246， 用吸光系数计算浓度 。 如何计计算出所需要的量？ 稀释释倍数？ 实验内容与要求 鉴别试验 吸收波长选择 精密度试验：用同一份样品溶液测定6次，计算 RSD% 重复性试验：引用其他组同学数据（称样量，吸光度 ）计算标示量%，计算RSD% 稳定性试验：考察样品溶液30min内的稳定性，计算 RSD% 加样回收率试验：根据重复性试验的结果，设计加样 回收率试验 含量测定：根据测定结果计算含量，标示量%。 如何引用？如何引用？ 线线性关系和范围围 分析方法的验证验证 1 精密度试验试验 2 重现现性试验试验 3 加样样回收试验试验 4 稳稳定性试验试验 5 线性与范围线性与范围 目的 范围：达到一定精密度、准确度和线性、测定方法适 用的高低限浓度或量的区间 线性：测试结果与试样中被测物的浓度或量直接呈正 比关系的程度 要求 至少5份系列浓度的对照品溶液，高、低浓度之间要 有明显差距，最好能有一定的比例关系。 线性相关系数符合规定，如UV-Vis法，r 0.99； HPLC法，r 0.999 列出回归方程、相关系数和线性图 线线性关系考察(示例） 序号序号 1 1 2 2 3 3 4 4 5 5 浓度浓度 （mg/mlmg/ml ） 0.012500.012500.025000.025000.037500.037500.050000.050000.062500.06250 测定值测定值 0.2360.2360.3360.3360.4360.4360.5360.5360.6360.636 精密度试验 目的 检测仪器、试剂、操作人员、实验条件等的可 信程度 要求 用对照品按样品溶液的制备方法制备对照品溶 液，同浓度至少平行操作6份，浓度与信号值要 在线性范围内 RSD 2.0%RSD 2.0%，则需要重新选取时间点进行计算，直到 RSD 2.0%) 2150.507 3300.509 4450.513 5600.525 6900.548 71200.567 稳稳定性试验试验(示例) 加样回收率试验 目的 考察准确度，即用该方法测定的结果与真实值 或参考值接近的程度 要求 设计高、中、低三个浓度，每个浓度各分别制 备三份供试品溶液进行测试，计算回收率 RSD 2.0% 加样样回收试验试验 序号称样样量 （g） 待测组测组分 含量 （mg） 对对照品加 入量 （mg） 测测得量（ mg） 回收率（ %） 平均加样样 回收率（ %） RSD （%） 10.16 65.28 20.250015.027.2100.1 30.2512 40.2509 53.04 50.250015.029.898.6 60.2500 70.2504 42.84 80.250015.033.1100.0 90.2510 取含量测定时一半的称样量，0.5g/2 98102% 撰写