《肠杆菌科鉴定全》PPT课件.ppt

肠杆菌科 一.分布 9版伯杰鉴定细菌手册分为24个属， 108个种 现增加到31个属,常见的15个属 1.占临床分离菌总数50% 2.占G-杆菌总数80% 3.占败血症50% 4.占尿路感染70 二.临床意义 l有些菌属对人类有明显的致病作用 n1、鼠疫耶耳森菌-引起烈性传染病 n2、 埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属、 耶耳森菌属可导致腹泻、食物中毒.伤寒 l有些菌属与医院感染有关 n1、肺炎 n2、脑膜炎 n3、菌血症 n4、各种部位的感染 l多数菌属是肠道正常菌群，也是条件致病菌 n与人类感染有关的肠杆菌科细菌有31个菌属， 其中临床标本中常见的菌属有15种 克雷伯菌属 爱德华菌属 邻单胞菌属 变形杆菌属 普罗威登斯菌属 沙门菌属 耶尔森菌属 志贺菌属 沙雷菌属 肠杆菌属 埃希菌属 哈夫尼亚菌属 枸橼酸杆菌属 摩根菌属 多源菌属 三.微生物特性 n1.G-杆菌 ， 多数有鞭毛、菌毛 n2.发酵葡萄糖，兼性厌氧 n3. 氧化酶阴性 4.还原硝酸盐为亚硝酸盐 5.触酶（） 6.营养条件不高， 拉丝试验 涂片：G-b 氧化酶试验 非发酵菌、弧菌 + 肠杆菌科细菌、不动、嗜麦芽菌 双糖试验 FO 不动、嗜麦芽肠杆菌科细菌 苯丙,葡盐, 枸 , 硝, 赖, 鸟, 氨对, 山, 肌, 侧, 吲哚 硝酸盐还原 + 嗜麦芽不动 四 、 鉴 定 流 程 图 种属鉴定 科的特征 硝酸盐还原 葡萄糖发酵 氧化酶 触酶 属间鉴定特征 属内种间鉴定特征 血清学分型 报告细菌种名 报告细菌血清型 概 述 分子生物学鉴定 五、肠杆菌科的初步分群 n可用苯丙氨酸和葡萄糖酸盐试验将肠杆菌 科分为四大组 菌 属 名 苯丙氨酸 葡萄糖酸盐 变形杆菌属 + 普鲁维登斯菌属 + 摩根氏菌属 + 塔特姆菌属 + 克雷伯菌属 + 肠杆菌属 + 多源菌属 + 沙雷菌属 + 西地西菌属 + 哈夫尼亚菌 + 埃希菌属 志贺菌属 沙门菌属 枸橼酸杆菌属 爱德华菌属 耶尔森菌属 克卢瓦菌属 兰恩氏菌属 + + 六.苯丙氨酸阳性组的各属鉴别 n试 验 变形杆菌属 普鲁维登菌属 摩根氏菌属 塔特姆属 nH2S + - - - n枸橼酸盐 +/- + - - n靛基质 +/- + + - 1.变形杆菌属内各种的鉴别 试 验 普通变形杆菌 奇异变形杆菌 潘氏变形杆菌 产粘液变形杆菌 靛基质 + - - - 鸟基酸 - + - - 木糖 + + + - 2.普鲁维登菌属各种的鉴别 试 验 产碱 斯图 雷极 普鲁维登斯菌 普鲁维登斯菌 普鲁维登斯菌 侧金盏花醇 + - + 甘露醇 + - - 生化反应雷氏斯氏产碱拉氏海氏 吲哚产生+- 肌醇 + + - - V 海藻糖-+ - 戊五醇 + - + -+ 3.摩根菌属种的鉴定 试验 摩根摩根菌 摩根菌(生物1群) 赖氨酸 - + 动力 + - 4.塔特姆菌属的鉴定 苯丙氨酸 H2S 枸橼酸盐 鸟氨酸 靛基质 + - - - - +_ + + + + + + 苯丙氨酸+ H2S 枸橼酸盐靛基质 鸟氨酸靛基质侧金盏花醇 甘露醇 普 通 变 形 杆 菌 奇 异 变 形 杆 菌 潘 氏 变 形 杆 菌 产 碱 普 鲁 维 登 斯 菌 雷 极 普 鲁 维 登 斯 菌 斯 图 普 鲁 维 登 斯 菌 摩 根 菌 塔 特 姆 菌 .苯丙氨酸阳性组菌属鉴别索引图 5 - 七.葡萄糖酸盐阳性组各属鉴别 试 验克雷伯菌 属 沙雷菌属肠杆菌 属 哈夫尼亚 菌属 多源菌属 动 力-+ DNA酶 -+- 鸟氨酸 -+- 枸橼酸 盐 +-+ u原克雷伯菌属（klebsiella）有5个种，2个亚种 肺炎克雷伯菌（K. pneumoniae） 产酸克雷伯菌（K. oxytoca） 解鸟氨酸克雷伯菌（K. ornithinolytica） 植生克雷伯菌（K. planticola） 土生克雷伯菌（K. terrigena） 分 类 克 雷 伯 菌 属 臭鼻亚种 鼻硬结亚种 解鸟氨酸柔特勒菌（R. ornithinolytica ） 植生柔特勒菌（R. planticola） 土生柔特勒菌（R. terrigena） 柔特勒菌属 (Raoultella) This proposal is base on 16S rDNA and rpoB gene sequencing and carbon assimilation studies. 培养特征 血琼脂上菌落较大，呈 黏液状，以接种环挑取 时易拉成丝 在肠道培养基上呈发酵 乳糖小菌落 在液体培养基内生长混 浊、浓厚、可见菌膜， 管底有粘性沉淀物 K. pneumoniae 菌落（血平板 ） 克 雷 伯 菌 属 1.克雷伯菌属各种的鉴别 试 验 产酸克雷 伯菌 肺炎克雷 伯菌 臭鼻克雷 伯菌 鼻硬结克 雷伯菌 靛基质+ 甲基红+ 丙二酸 盐 + + + 克雷伯菌和柔特勒菌种间鉴定表 生化反应应 肺炎 克雷 伯菌 产产酸 克雷 伯菌 解鸟鸟 氨酸 柔特 勒菌 植生 柔特 勒菌 肺炎 克雷 伯菌 臭鼻 亚亚种 肺炎 克雷 伯菌 鼻硬 结亚结亚 种 土 生 柔 特 勒 菌 脲脲酶+- 吲哚产吲哚产 生-+-(-)- 鸟鸟氨酸-+-(-) 甲基红红-(-)+V V-P+V+-+ 丙二酸盐盐+-+ 枸橼橼酸盐盐+V-V 克 雷 伯 菌 属 S. marcescens菌落特征（普通营 养平板） 沙 雷 菌 属 S. marcescens菌落特征（普通营 养平板） 沙 雷 菌 属 2.沙雷菌属各种的鉴别 试 验粘质沙雷菌液化沙雷菌 红色沙雷菌 鸟氨酸+ 阿拉伯糖 + 分类：现有13个种2个生物型 u原有7个种2个生物型 产气肠杆菌(E. aerogenes) 阴沟肠杆菌(E. cloacae) 杰高维肠杆菌 坂崎肠杆菌 泰洛肠杆菌 中间肠杆菌 聚团肠杆菌 河生肠杆菌生物群1 河生肠杆菌生物群2 u后增加7个菌 阿氏肠杆菌 何氏肠杆菌 溶解肠杆菌 超压肠杆菌 克沃尼肠杆菌 考伯肠杆菌 帕瑞勒肠杆菌 肠 杆 菌 属 3.肠杆菌属各种的鉴别 试 验坂崎杆菌 阴沟杆菌 产气杆菌 格高菲杆菌 赖氨酸+ 山梨醇+ 本菌属的细菌生化反应不典型，常用的商品化鉴定系统 很难达到90以上的鉴定正确率 肠杆菌属种间鉴定表 生化反应应 产产 气 杰 高 维维 帕 瑞 勒 聚 团团 河生， 生物群 1 癌 生 阪 崎 何 氏 阴 沟 克 沃 尼 中 间间 考 伯 阿 氏 河生， 生物群 2 溶 解 超 压压 赖赖氨酸脱 羧羧酶+- 山梨醇+-V-+ VP试验试验+VV+-+ 七叶苷+V+-V+V+ 蜜二糖+VV+-+-+-+ 蔗糖+V+-+V+-+- 精氨酸脱 氢氢酶-+V+-+VV+- 鸟鸟氨酸脱 羧羧酶+-V+-V+ 核糖醇+-V- 鼠李糖+V+-+ -甲基-D- 葡萄糖苷+-V-+VV-+ 黄色素-V-+-V- 肠 杆 菌 属 4.哈夫尼亚菌属鉴定 n葡萄糖酸盐 枸橼酸盐 棉子 糖 n + n5.多源菌属种的鉴定 试验 聚团多源菌 弥散多源菌 赖 氨 酸 - - 鸟 氨 酸 - - 水扬苷 + - 5.葡萄糖酸盐阳性菌属鉴别双岐索引图 + + + + + + + + + + + - + + + 葡萄糖酸盐+ 侧金盏花醇 赖氨酸 鸟氨酸 赖氨酸 鸟氨酸 靛基质枸橼酸盐 山梨醇丙二酸盐 阴沟肠杆菌 产酸克雷伯菌 山梨醇 肺炎克雷伯菌 产气肠杆菌 红色沙雷菌 多源肠杆菌 鼻硬结克雷伯菌 臭鼻克雷伯菌 哈夫尼亚菌 山梨醇 格高菲肠杆菌 阿拉伯糖 贩崎肠杆菌 阴沟肠杆菌 粘质沙雷菌 液化沙雷菌 八.苯丙氨酸葡萄糖酸盐阴性组的各属鉴别 试 验 沙门 菌属 志贺 菌属 埃希 菌属 枸橼 酸杆 菌属 耶尔 森菌 属 爱德 华菌 属 甘露醇 + ONPG + 动 力 + 枸橼酸盐 +/+ 赖氨酸 + 枸 橼 酸 杆 菌 属 分 类 枸橼酸杆菌属（Citrobacter）包括11个种 弗劳地枸橼酸杆菌 (C. freundii) 差异枸橼酸杆菌（C. diversus） 库斯枸橼酸杆菌 无丙二酸盐枸橼酸杆菌 (C. amalonaticus) （C. koseri） 布拉吉枸橼酸杆菌 （C. braakii） 雷登枸橼酸杆菌 （C. rodentium） 塞拉克枸橼酸杆菌 （C. sedlakii） 魏克曼枸橼酸杆菌 （C. werkmanii） 扬哥枸橼酸杆菌 （C. youngae） 吉乐枸橼酸杆菌 （C. gillenii） 穆利枸橼酸杆菌 （C. murliniae） 法玛丽枸橼酸杆菌 （C. farmeri） 1.枸橼酸杆菌属各种的鉴别 试 验费劳地 枸橼酸 杆菌 异型枸 橼酸杆 菌 丙二酸盐 阴性枸橼 酸杆菌 鸟氨酸+ 侧金盏花醇+ 注意：很多鉴定系统的数据库中不包括枸橼酸杆菌属新种名称和分类资料 枸橼酸杆菌种间鉴定表 生化反应应 弗 劳劳 地 穆 利 杨杨 格 吉 乐乐 魏 克 曼 无 丙 二 酸 盐盐 法 玛玛 丽丽 布 拉 吉 库库 斯 赛赛 拉 克 雷 登 鸟鸟氨酸脱羧羧酶-+ 丙二酸盐盐利用-+-+ 尿素水解VV+-+VVV+ 卫卫矛醇发发酵-+-VV+- KCN生长长+-+- 蔗糖发发酵+V-V-+-V- D阿拉伯醇发发 酵 -+- 蜜二糖发发酵+V-V-+-+- 枸 橼 酸 杆 菌 属 2.爱德华菌属各种的鉴别 试 验 迟缓爱 德华菌 保科爱 德华菌 鲶鱼爱 德华菌 H2S+ 甲基红+ 3.埃希菌属种的鉴别 试 验大肠埃希菌大肠埃希菌（不 活泼株） 葡萄糖产气 + 动 力 + 致泻性E.coli分为5类： 肠毒素型大肠埃希菌 (ETEC) 肠致病性大肠埃希菌 (EPEC) 肠侵袭型大肠埃希菌 (EIEC) 肠出血型大肠埃希菌 (EHEC) 肠凝聚型大肠埃希菌 (EAggEC) 埃 希 菌 属 临床意义 (Clinical Significance) E.coli以肠道外感染多见，主要有泌尿系统感染 E.coli中的致病菌株能引起各种类型的腹泻，根 据其不同的血清型别、毒力和临床症状 鉴定要点 u不活跃大肠埃希菌与志贺菌易混淆，需相互鉴 别 醋酸钠钠葡萄糖 铵铵利用 粘质质酸盐盐 产产酸试验试验 大肠肠埃希菌 志贺贺菌属 埃 希 菌 属 大肠埃希菌 在中国兰平板上为蓝色菌落 大肠埃希菌 在伊红美蓝平板上为紫黑色菌落 大肠埃希菌 在麦康凯和SS平板上为红色菌落 培养特征 u兼性厌氧菌 u营养要求不高 u菌落呈中等大小、无 色、半透明、光滑 u在SS平板上，因产生 H2S可形成黑色中心 的菌落 伤寒沙门菌菌落形态（SS平板 ） 四 沙 门 菌 属 u常用血清：O多价血清（含AF群） O、H、Vi抗原因子血清 方法：从临床标本中分离到菌株经纯培养后，符 合沙门 菌属生物学特性，则 采用A-F多价血清初步确定是否为Salmonella 1. 如阳性，即用O因子血清分群；再用第一相H 因子血清定型，也可用第二相辅助定型 2. 如阴性：应考虑是否有Vi抗原? 血清学分型 加热或传代 去除Vi抗原 凝集：做O多价和单价凝集 不凝集：可能为AF以外 沙 门 菌 属 如是双相菌，进一步用复合血清1、2、5检查第 2相抗原。 群菌 型抗原1相2相 A甲型副伤寒1,2,12a B乙型副伤寒1,4,12b1.2 鼠伤寒1,4,12i1.2 C1丙型副伤寒6,7(Vi )C1.5 C1猪霍乱6,71.5 D伤 寒1,9(Vi)d 肠 炎1,9,12g,m 都柏林1,9,12(Vi)g,p E火 鸡3,10e,h1.w 山夫顿3,15e,h1.b F河伯丁1,3,19g,t u兼性厌氧菌 u营养要求不高 u普通平板：中等大小 、半透明、光滑 u鉴别培养基：乳糖不 发酵的菌落 培养特性 菌落形态（麦康凯平板） 志 贺 菌 属 种属鉴定 u菌属特征 u发酵葡萄糖产酸不产气 u赖氨酸（） uH2S（） u尿素（） u动力（） 志 贺 菌 属 5.志贺菌属的鉴定 n先用志贺多价血清与菌种凝集，如多价血清凝集为志 贺菌，多价里不包含鲍氏C16-20再进一步用因子血清凝 集而定群。 亚群和种血 清 型 痢疾A 110 福氏B 1a,1b,2a,2b,3a,3b,4a,4b,5,6 鲍氏C1C15 宋氏D 6.耶尔森菌属各种的鉴别 试验鼠疫耶 耳森菌 假结核耶 耳森菌 小肠耶 耳森菌 弗氏耶 耳森菌 中间耶 耳森菌 鸟氨 酸 - - + + + 鼠李 糖 - + - + + 密二 糖 - + - - + 7、苯丙氨酸、葡萄糖酸盐阴性组菌属鉴别 双歧索引图 + + + + + + + + + + + 苯丙氨酸、葡萄糖酸盐 - 甘露醇 ONPG 枸橼酸盐动 力 H2S 侧金盏花醇赖氨酸 沙门菌属 志贺菌属 迟缓爱德华菌 甲基红 异型枸橼酸杆菌 鸟氨酸葡萄糖产气 耶尔森菌属 丙二酸盐阴性枸橼酸杆菌 费劳地枸橼酸杆菌 大肠埃希菌 大肠埃希菌（不活泼株） 保科爱德华菌 鲶鱼爱德华菌 肠杆菌鉴定选用多少生化反应管为好 ： 苯丙氨酸、葡萄糖酸盐、赖氨酸、鸟氨酸、氨基酸 对照、枸橼酸盐、硝酸盐、侧金盏花醇、山梨醇、 甘露醇、ONPG、靛基质、双糖（H2S） 九、兰恩氏菌属的鉴定 苯丙氨酸葡萄糖酸盐枸橼酸盐靛基质 + + + 十.西地西菌属各种的鉴别 试验戴氏西地西菌拉氏西地西菌 奈氏西地西菌 鸟氨 酸 + - - 山梨 醇 - - + 十一.克卢瓦菌属各种的鉴别 试验抗坏血酸克卢瓦菌 冷半月克卢瓦菌 赖氨酸 + - 十二.API鉴定系统(20E) 菌液制成0.5麦氏浊度,加入20E板条, 火一样的热情 浪一样的冲劲 十三肠杆菌科某些菌株的特殊性质 1.变形杆菌菌落呈迁延性生长 2.克雷伯菌自身菌落可拉出丝来 3.多源聚团菌在M-H平板上产生黄色 n4.沙雷菌M-H 平板上产生铁锈红色 5.宋内志贺菌无色不透明 菌落 6.菌落溶血的大肠杆菌 7.能产生H2S的菌株 变形杆菌 爱德华菌 伤寒沙门菌 费劳地枸橼酸杆菌 大肠杆菌 8.如是大肠杆菌 就应该是 赖氨酸阳性 枸橼酸阴性 靛基质阳性 侧金花醇阴性 9.如是二类菌 95%枸橼酸试验阳性 靛基质阴性 10.超广谱-内酰胺酶（ESBLS） 1983年世界首例报道，最初在肺炎克雷伯菌中检 出。 长期大量使用第三代头孢菌素后产生此酶，长期大量使用第三代头孢菌素后产生此酶， 由由 - -内酰胺酶突变（内酰胺酶突变（CTMCTM，SHVSHV）而来。而来。 可通过质粒传导，主要由大肠杆菌和克雷伯菌属 产生 ESBL的筛选与确证试验 、 u邻单胞菌属(Plesiomonas)只有一个菌种，即 类志贺邻单胞菌(P. shigelloides) u该菌属以前归属于弧菌科，后根据基因特征 认为与肠杆菌科细菌有更密切的关系，而归 属于肠杆菌科 邻 单 胞 菌 属 分 类 与气单胞菌属、弧菌属鉴别 菌种 氧化 酶 鸟鸟氨 酸脱 羧羧酶 纤维纤维 二糖 TCBS 生长长 O/129 敏感试试 验验 邻单邻单 胞菌 +-+ 气单单胞菌属 +- 弧菌属 +-+ 邻 单 胞 菌 属 同志们好 十四.大肠杆菌的特点 1. 侵袭力 K抗原 菌毛 2.肠毒素 LT 引起腹泻 ST 大肠杆菌的特点 引起腹泻的五类菌: 肠毒素型大肠埃希菌(ETEC)-旅行者腹泻,水样便 肠致病性大肠埃希菌(EPEC)-婴儿腹泻,水泻粘液便 肠侵袭性型大肠埃希菌 (EIEC)-类似菌痢,脓血粘液便 肠出血型大肠埃希菌 (EHEC)-水源食源性污染,血便, 典型的是O157:H7,引起溶血性尿毒综合症 肠凝聚型大肠埃希菌(EaggEC )-慢性腹泻,水样便,无 LT和ST 大肠杆菌的特点 对多种糖产酸产气,吲哚、甲基红、 VP 、枸橼酸盐(IMVC)+ + - - 五种致病性大肠杆菌要用特异性血 清凝集加以鉴别 十五.沙门菌属的特点 所有动物可分离到沙门菌,有2000多血清 可引起人类胃肠炎、败血症、伤寒 沙门菌属的特点 伤寒菌 口 小肠 淋巴结 血液 (肝脾骨髓) 胆囊 肠腔Ag+Ab) 排出体外 S-R变异:菌落光滑-粗糙 H-O变异:失去鞭毛