中国药典》2010版二部生化药品增修订概况与解读梁翠荣.ppt

中国药典2010版二部 生化药品增修订概况与解读 梁翠荣 山东省药品检验所 2010版药典宗旨： l提高药典质量， l应用高新技术， l解决安全隐患， l赶超国际水平。 生化药的定义 生化药主要从动、植物及微生物发酵提取的、化学合成、生物-化学半合 成或用现代生物重组技术制得的一类药品。 2010版药典收载品种 l氨基酸及其衍生物 l核苷酸及其衍生物 l酶与辅酶 l多肽及蛋白类 l多糖及脂类 增修订概况 1.凡例:增加对制法的要求 2.正文:收载标准189个，增加36个，修订144个, 删除2个。 3.附录:增加2个 (1)蛋白质含量测定法 (2)合成多肽中的醋酸测定法 修订1个 电泳法增订第六法 等电聚焦水平板电泳法 凡例 l制定“制法要求” 的准则 l1.用于注射用的或直接与伤口接触的提取类原料(凝血 酶冻干粉)，应在原料的质量标准中增加“制法要求”。 l2.其他剂型不在其相应原料的质量标准中增订“制法要 求”，而由凡例统一规范。 凡例 制法项下主要记载药品的重要工艺要求和质量管理要求 l所有药品的生产工艺应经验证,并经国务院药品监督管理部门批准,生 产过程均应符合GMP的要求。 l来源于动物组织提取的药品，其所用动物种属要明确，所用脏器均应 来自经检疫的健康动物，涉及牛源的应取自无牛海绵状脑病地区的健 康牛群；来源于人尿提取的药品，均应取自健康人群。上述药品均应 有明确的病毒灭活工艺要求以及质量管理要求。 l直接用于生产的菌种、毒种、来自人和动物的细胞、DNA重组工程菌 及工程细胞,来源途径应经国务院药品监督管理部门批准,并应符合国 家有关的管理规范。 附录 蛋白质含量测定法 l凯氏定氮法 l福林酚法 l双缩脲法 l2，2-联喹啉-4，4-二羧酸法 l考马斯亮蓝法 l紫外-可见分光光度法 附录 l注意 l各测定法依据的蛋白质反应原理不同，线性范围不同，同时由于 各品种的蛋白质性质，结构的迥异导致同品种采用不同的测定方 法其结果有较大差异。 l不同品种应针对自身蛋白质特性选择适宜的测定方法并做相应的 方法学验证。 l常用的对照品有牛血清白蛋白、人血白蛋白、酪蛋白、免疫球蛋 白及各品种的自身对照品。应尽可能选用与待测品种蛋白质结构 相同或相近的蛋白质作对照品。 附录 合成多肽中的醋酸测定法 为合成多肽中的醋酸检查，提供统一的方法。 色谱条件与系统适用性试验：C18柱 210nm检测 流动相A: 0.07%磷酸溶液(pH3.0) 流动相B:甲醇 理论板数按醋酸峰计算不低于2000 梯度洗脱 1.2ml/mlin 时间 (min)流动相A(%)流动相B(%) 05955 5105050 10205050 2022955 2230955 附录 l注意 l对照品溶液：取冰醋酸适量，精密称定，用流动相A- 流动相B(95:5)的混合溶液制成约0.1mg/ml（浓度可 随供试品中醋酸的含量适当调整） l供试品溶液：按各品种项下规定的方法制备。 l醋酸峰的保留时间约在34min，采用梯度洗脱，主 要是让多肽组分从色谱柱中洗脱出来。 附录 合成多肽 醋酸限度 l生长抑素 3.0%15.0% l胸腺法新（胸腺肽1） 不得过 5.0% l鲑降钙素 4.0%15.0% l醋酸丙氨瑞林 不得过 7.5% l醋酸奥曲肽 5.0%12.0% 2010版生化药标准品种数汇总 类别2005版标准 （品种） 2010版标准 （品种） 增加标准（ 品种） 标准（品种） 增长% 删除 氨基酸及其 衍生物 42（22）52（25）10（3）23.8%（14% ） 核酸及其衍 生物 44（10）51（11）7（1）15.9%（10% ） 酶与辅酶 28（11）34（14）6（3）21.4%（27% ） 多肽、蛋白 26（11）30（13）8（3）30.8%（27% ） 2 多糖 15（5）19（6）3（1）20.0%（20% ） 脂 2（1）4（2）2（1）100.0%（ 100.0%） 总数 157（61）189（71）36（12）22.9%（ 19.6%） 2 氨基酸及其衍生物 l品种与剂型 氨基酸收载品种（25个）较全，几乎包含国内外所有的氨基酸原料， 包含的剂型有片剂、注射液、胶囊剂、滴眼液、颗粒剂、 口服溶液 剂及冲洗液。 l项目 鉴别：单一氨基酸品种的标准中统一增订了专属性较强的TLC法， 有的品种同时用红外光谱法；氨基酸衍生物用红外光谱法。 检查：其他AA TLC法和HPLC法 部分品种热原修订为细菌内毒素 滴眼液品种增订渗透压摩尔浓度 含量测定：滴定法、比色法及HPLC 法。 核苷酸及其衍生物 l品种与剂型 收载品种（11个）和剂型较全，剂型有片剂（片、 含片、 咀嚼片） 、注射剂（小针、输液、粉针）胶囊剂、乳膏剂、滴眼液、滴鼻液、颗 粒剂及口服溶液剂。 l项目 检查：溶液的澄清度与颜色 有关物质 TLC法和HPLC法 残留溶剂、 炽灼残渣等 输液、滴眼液品种增订渗透压摩尔浓度 复方葡萄糖输液增订5-羟甲基糠醛(HPLC法) 部分品种热原修订为细菌内毒素 含量测定：UV及HPLC 法。 盐酸阿糖胞苷 l上海所起草，天津所、广东所复核，达到国外标准。 l增订项目6项： 1.溶液的澄清度与颜色 2.含氯量（电位滴定法）：按无溶剂的干燥品计算，含氯量应为 12.4% 12.9%。 3.有关物质（HPLC法） 4.残留溶剂（GC法）：甲醇（0.3%）、乙醇（0.5%） 5.炽灼残渣 不得过0.5% 6.重金属（附录 H 第二法）不得过百万分之二十。 l含量测定：由UV-E法修订为HPLC法。 有关物质（HPLC法） l色谱条件： C18柱 254nm检测 流动相A:磷酸盐缓冲液(pH7.0 ）-甲醇（98：2） 流动相B:磷酸盐缓冲液(pH7.0 ）-甲醇（70：30 l测定方法：加校正因子的主成分自身对照法 已知杂质3个（尿嘧啶、尿苷、阿糖尿苷）对盐酸阿糖胞苷峰的相对保留时间分别 为0.55 、1.14 、1.62；校正因子分别为2.9 、1.72 、1.54；未知杂质2个，对 盐酸阿糖胞苷峰的相对保留时间约为0.38 、0.43的校正因子均为1.72 ；其他杂 质峰的校正因子均按1.1计算。 l计算公式： l限度：尿嘧啶、尿苷均不得过0.1%；阿糖尿苷不得过0.3%；其他单个杂质不得过 0.1%；所有杂质总和不得过0.3%。 酶与辅酶 l品种与剂型 收载品种（14个），剂型有片剂（片、 肠溶片）、注射剂(小针、粉针) 、胶囊剂(软胶囊、胶囊) 、颗粒剂。 l项目 检查：溶液的澄清度与颜色 有关物质 (纯度、高分子物质)HPLC法(分子排组色谱法) 部分品种热原修订为细菌内毒素 效价测定：每1mg的效价不得少于XX单位，修订为每1 mg中XX 酶的活力不得少于XX单位。 如抑肽酶,按干燥品计算,每1mg的效价不得少于3.0单位,修订 为按无水物计算,每1mg抑肽酶的活力不得少于3.0单位。 抑肽酶 l该品种由上海药检所起草Chp2005、Bp2008/Ep6.0、USP32版均收载，本版继续收载，但 依据USP作了三个方面的修订。有效控制抑肽酶产品的纯度，使标准的制定达到或超过国 外标准。 l1.检查高分子蛋白（USP32） 关键是采用三根串联Gel色谱柱（TSK-G4000SWXL柱） 柱温35 280nm检测 流动相:3mol/L醋酸溶液 流速1.0ml/min, 二聚体（112 加热2小时)相对RT0.9，分离度1.0，拖尾因子2.5。 限度：高分子蛋白（RT抑肽酶）峰的总量不得大于1.0%。 l2.检查去丙aa-去甘aa-抑肽酶和有关物质 参照USP32采用新增附录毛细管电泳法：我国第一个用该法上药典的品种。 l3.检查N-焦谷氨酰-抑肽酶和有关物质（参照USP32） 色谱柱：TSK-GEL IC-Cation-SW 柱温40 210nm检测 柱温：40 流动相：A磷酸盐缓冲液 B磷酸盐-硫酸铵缓冲液 梯度洗脱 相对RT0.9，分离度1.0，拖尾因子2.0。 限度：不得大于1.0%；单个未知杂质不得大于0.5%；未知杂质总和不得大于1.0% 多肽及蛋白类 l品种与剂型 收载品种13个，少部分为脏器提取的激素、肽类。安全性无法保障的品 种如垂体后叶粉、注射液等删除。合成肽类药品，纯度较高、质量优良 ，大部分质量标准与国际接轨。剂型多为注射剂。 l项目 高分子蛋白 有关物质 相关蛋白 （蛋白质就是由多个氨基酸残基组成的多肽链。一般以51个aa残基，分 子量为5778的胰岛素划分,高于此分子量的称为蛋白,小于此的为肽) 含量测定：HPLC法，部分肽和小分子蛋白中的生物活性、生 物鉴别由化学测定法代替。 金属离子：原子吸收光谱法 安全性检查：细菌内毒素、异常毒性、微生物限度、过敏等。 胰岛素 lChP2010版依据USP33、EP6.0标准，参照2005版分别对来源、性状、鉴别 、 检查项下含量测定项、活性检查作了修订和补充 （该品种江苏所起草，中检所复 核） l1.鉴别：由HPLC法改为肽图分析,经V8酶水解胰岛素,对其分子碎片 中的肽图进行分析,该法能确定不同种属的胰岛素,专属性强。 l2相关蛋白：参照USP32、EP6.0由聚丙烯酰胺凝胶电泳改为分离度 较好的HPLC法，214nm检测 梯度洗脱 限度：A21脱酰胺胰岛素5.0%，其它相关蛋白5.0%。 l3.高分子蛋白：将一般柱色谱改为分子排阻色谱，色谱条件与系统适 用性试验均与ChP2005重组人胰岛素标准一致。 限度：保留时间小于胰岛素的所有峰面积之和1.0%。 l4.锌检查：由比色法该为原子吸收光谱法。 l5.增加细菌内毒素、微生物限度检查。 l6.含量测定：用HPLC法代替生物活性测定法。考虑到胰岛素生物活性的重 要性，原料在检查项中增加生物活性测定，参考USP32，动物数减半，生物统计 简化，作为限度实验，使该法常规测定时既能省时、省力、省成本，又能有效控 制质量。 多糖及脂类 l糖类主要分类 单糖(简单的多羟基醛或酮）如六碳糖(葡萄糖、果糖)、五碳糖(核糖) 聚糖(单糖缩合而成)，20个单糖结构以下的为低聚糖,蔗糖、麦芽糖等, 20个以上的为多糖。纯多糖：右旋糖酐、香菇多糖； 杂多糖：肝素、硫酸软骨素、透明质酸等。 l品种与剂型 多糖类 硫酸软骨素钠、片、胶囊 肝素钠、注射液、乳膏 右旋糖酐铁、片、注射液 右旋糖酐20、氯化钠注射液、葡萄糖注射液 右旋糖酐40、氯化钠注射液、葡萄糖注射液 右旋糖酐70、氯化钠注射液、葡萄糖注射液 脂类 前列地尔、注射用前列地尔 多烯酸乙酯、软胶囊 增修订项目 l金属离子：原子吸收光谱法 l有关物质：HPLC l比活 肝素钠150U/mg170U/mg l含量测定：HPLC、GC l比旋度 肝素钠不小于+35 不小于+50 l残留溶剂 l输液品种增订渗透压摩尔浓度 l复方葡萄糖输液增订5-羟甲基糠醛（UV法） l甲氧基苯胺值 硫酸软骨素钠 l中检所起草 该品种质量指标有显著性提高,含量测定从原来比色法的40%左右，直提至 90%（口服）。用专一性强且灵敏的酶解法，分解硫酸软骨素成A、B、C ，再用离子色谱法分离硫酸软骨素成B、C和A，按外标法，以峰面积之和 计算，使硫酸软骨素含量为90%105% 。灵敏度优于USP 和EP，光电滴 定法，因无专属性，其它多糖混杂，使硫酸软骨素含量偏高。 l含量测定：离子色谱法 色谱条件：强阴离子交换柱 232nm检测 梯度洗脱 流动相A:水(稀盐酸调pH值至3.5 ） 流动相B: 2mol/L氯化钠溶液(稀盐酸调pH值至3.5 ） 酶解法：供试品用水制成100mg/ml溶液，取100l，加Tris(pH8.0)缓冲液 800l，再加硫酸软骨素ABC酶（用Tris(pH8.0)缓冲液制成1单位/ml溶液） 液100l， 37水浴反应1小时，100 加热5分钟，冷却，离心 20min(10000r/min)，取上清液，滤过，进样20l。另取硫酸软骨素对照品 ，同法操作。 甲氧基苯胺值 l测定原理 油脂中的不饱和脂肪酸，被氧化成过氧化物，过氧化物进一步分解生 成醛类或酮类，醛类或