纤维素酶辅助法提取核桃叶总黄酮的工艺研究开题报告.doc

附件4 楚雄师范学院本科毕业论文（设计）开题报告楚雄师范学院本科毕业论文（设计）开题报告书题 目 纤维素酶辅助法提取核桃叶总黄酮的工艺研究 姓 名 熊顺琼 学 号 20111053118 系（院） 化学与生命科学学院 专 业 科学教育 （师范类） 指导教师 宋建梅 2015年 3月 23 日论文（设计）题目纤维素酶辅助法提取核桃叶总黄酮的工艺研究选题的动因与根据（说明选择本课题的理论价值、实践意义；综述国内外有关本课题的研究动态及见解）在云南大理州巍山县紫金乡一带核桃资源丰富，人们除利用果实、木材外，对核桃叶及外果皮很少利用。核桃叶含VB、VC、VD、VE、胡萝卜素等丰富的营养物质与核桃醌、核桃甙、鞣质及黄酮类等生物活性物质，其中黄酮类化合物含量可达726。核桃叶能防治维生素缺乏症、淋巴结、甲状腺肿大、黄疸病、结核病等，也能解毒、消肿等1。黄酮类化合物是广泛地存在于植物中的一类化合物，具有抗癌、抗衰老、抗炎、降血糖、降血压、调节内分泌等多种功能，还具有强有力的自由基清除性和较强的天然抗氧化性，在医药、化妆品、食品等领域有着广泛的应用。从植物中提取黄酮类化合物的方法有溶剂法1（热水提取法、碱性水或碱性稀醇提取法、有机溶剂提取法）、微波辅助提取法3、超声波振荡提取法6、酶辅助提取法4、双水相提取法1、半仿生提取法、膜分离法、热压流体萃取法、高压液相提取法1。目前人们对核桃叶中黄酮的提取研究用的方法是以槲皮苷为对照品，采用氯化铝显色紫外分光光度法，结合单因素试验和正交试验对该体系进行系统优化研究，或者以70%乙醇回流法，测定山核桃叶中总黄酮的含量10。据所查文献尚未有用纤维素酶辅助法提取核桃叶总黄酮的工艺研究的相关报道，纤维素酶能破坏核桃叶细胞壁纤维素的苷键，降解纤维素，使细胞壁疏松、破裂，减少提取过程中的传质阻力，因此，本课题将尝试用用纤维素酶酶解预处理与乙醇浸提法相结合从核桃叶中提取总黄酮，通过单因素试验考察酶用量、酶解时间、酶解温度、pH对总黄酮提取率的影响，优化提取工艺条件，以期为核桃叶中黄酮类化合物的高效利用提供参考。课题的主要内容：1、 原料处理2、 核桃叶中总黄酮的提取3、定性检验4、核桃叶提取液中总黄酮含量的测定（1）标准曲线的绘制（2）总黄酮含量的测定5、单因素试验（1）酶用量（2）酶解时间（3）酶解温度（4）pH6、正交试验7、结果与分析8、小结与讨论研究方法：1、 原料处理流程摘取新鲜的核桃叶洗净晒干粉碎备用2、 提取工艺流程干燥的核桃叶粉末添加适量纤维素酶加入少量的乙醇水溶液和pH缓冲溶液酶解乙醇水溶液浸提恒温水浴抽滤得滤液测定滤液中总黄酮的含量3、 定性检验通过与盐酸一镁粉反应，黄酮化合物溶液颜色逐渐变为紫红色，另外在提取物中加入FeCl3，NaOH，溶液分别变为蓝色、棕黄色8，加入AlCl3溶液变为黄绿色，由此可判断被测物可能是黄酮类化合物。4、提取液中总黄酮含量的测定8 标准曲线的绘制。以芦丁为对照品，利用紫外可见分光光度计在510 nm波长处测定不同浓度芦丁标准溶液的吸光度，绘制标准曲线。总黄酮浓度的测定。吸取10 ml核桃叶总黄酮提取液于50 mL容量瓶中，加入10 mL 30%的乙醇（体积分数，下同）及2 mL50 g/L的亚硝酸钠，摇匀后放置6 min；加入2 mL 100 g/mL的氯化铝，摇匀后放置6 min；再加入20 mL40 g/L的氢氧化钠，混匀，用30%的乙醇定容至刻度，15 min后测定A510 nm，依据芦丁标准曲线回归方程计算提取液中总黄酮的浓度，计算核桃叶粉末中总黄酮类化合物的提取率。总黄酮提取率=（提取液体积提取液中总黄酮化合物浓度）/核桃叶粉末质量100%5、单因素试验 根据70%的乙醇浓度，1.5小时的酶解时间，1：15的料液比，50摄氏度的酶解温度为参考。设置单因素试验分别考察酶用量、酶解时间、酶解温度、p、乙醇体积分数和乙醇用量对总黄酮提取率的影响8。4、 结果与分析（1）酶用量对总黄酮提取率的影响（2）酶解时间对总黄酮提取率的影响（3）酶解温度对总黄酮提取率的影响（4）酶解PH对总黄酮提取率的影响（5）正交试验5、小结与讨论完成期限和采取的主要措施：完成期限：2015年3月1日至2015年5月31日主要措施：1.查阅相关资料进行初步选题 2015年3月1日至2015年3月17日2.确定题目 2015年3月17日至2015年3月19日3.撰写开题报告 2015年3月23日至2015年3月30日4.进行开题答辩 2015年3月31日5.进行实验，选择适宜提取条件 2015年4月1日至2015年5月13日6.根据实验结果撰写毕业论文 2015年5月14日至2015年5月18日8.修改论文 2015年5月19日至2015年5月23日9.完成论文 2015年5月24日主要参考资料：1 董宇黄酮类化合物的提取方法研究及展望J吉林人民研究院，2009，(4)：33-352 何莉萍何瑜萍醇法提取荷叶中总黄酮的工艺研究J科技创新与应用，2013，（4）：145-1483 薛晓丽荷叶总黄酮的提取工艺研究A吉林：吉林农业科技学院实验管理中心，20094 段文录，吴峰敏，张延萍等纤维素酶法提取鱼腥草总黄酮工艺J河南科技大学学报自然科学版，2010，（1）：109-1115 马子娇，许颖，刘佳等甘草废渣中甘草黄酮提取工艺研究J中国实验方剂学杂志，2010，16（15）：9133-91346 杨东升，黄倍蕾，谢晓红等.海南桉叶黄酮提取方法研究A海口，20117 孙钟雷，谭属琼 脐橙皮中黄酮提取条件的优化A安微农业科学，2010，（15）：8197-81998 向闱纤维素酶法与乙醇浸提法提取总黄酮纤维素酶与乙醇浸提法提取总黄酮A，中国学术期刊网，2012：0439-8114（2012）23-5445-039 陈志伟，陈坤，胡银川等苦丁茶总黄酮提取工艺优化研究J食品研究与开发，2012，（6）：53-5810