实验一细菌形态结构的观察.ppt

医学微生物学实验 Experiment of Medical Microbiology 基础医学院病原生物学教研室 基础医学实验教学中心病原生物学与免疫学实验室 杨致邦 2010.1 教材 高等医学院校基础医学实验教学系列教材 病原生物学实验 科学出版社，2008年6月 主编 杨致邦 叶彬 掌握病原生物学的基本方法与基本操作技术； 强化实验室生物安全观念， 掌握无菌操作技术； 加深对病原生物学基本理论知识的理解与认识； 培养独立操作、独立观察和思考、独立分析问题和 解决实际问题的能力； 增强科技创新能力； 培养严谨的作风、科学的方法和严肃认真的工作态 度。 实验教学的目标 临床医学本科实验内容及安排 实验课 的带教内容 学时 数 显微镜录像 1 细菌形态观察 4 需要 2 细菌的生长现象与消毒 灭菌 4 有 3 致病性球菌 4 需要有 4 肠道杆菌 4 有 5 白喉杆菌、厌氧菌4 需要 6 四体、真菌、病毒 4 需要有 临床药学本科实验内容及安排 实验课实验课 的带带教内容 学时时 数 显显微镜镜录录像 1 细细菌形态观态观 察 4 需要 2 细细菌的生长现长现 象与消毒灭灭 菌 4 有 3 致病性球菌 4 需要有 4 药药物的微生物检测 检测4 5 药药物的敏感性实验 实验4 6 四体、真菌、病毒 4 需要有 非临床医学本科实验内容及安排 实验课实验课 内容 学 时时 数 显显微 镜镜 录录像 1 细细菌形态态结结构的观观察 4 需要 2 细细菌的生长现长现 象与消 毒灭灭菌 4 有 3四体、真菌、病毒 4 需要有 实验一 细菌形态结构的观察 Observe on Morphology and Structure of Bacteria 【目的要求】 1.熟悉实验室生物安全规则,掌握无菌操作技术； 2.掌握细菌标本革兰染色的操作步骤和方法； 显微镜(油镜)下细菌形态的观察; 革兰染色结果 判断； 3.掌握细菌的特殊结构（荚膜、鞭毛、芽孢）的形 态特点。 【实验内容】 1.实验室生物安全规则(P3) ； 2.细菌标本革兰染色观察（Grams Stain)(每人做） (P10) ； 3.复习显微镜(油镜)的使用(每人做）； 4.细菌特殊结构（荚膜、鞭毛、芽胞）的观察（示教镜 ） (P104) 。 【实验材料】 (1)菌种: 葡萄球菌、大肠杆菌斜面培养物。 (2)试剂:革兰染色液。 (3)其他: 生理盐水、载玻片、酒精灯、接种环、显微镜、香 柏油、擦镜纸、二甲苯等。 【实验方法】 1细菌涂片的制作 步骤： 涂片 干燥 固定 注意点： 1）无菌操作 2）加生理盐水（固体培养物） 生理盐水 生理盐水 生理盐水 + + + 葡萄球菌 大肠杆菌 葡萄球菌 +大肠杆菌 载玻片 2.革兰染色 1)方法 初染: 结晶紫和碳酸氢钠各13滴,3s-5s，水冲净,甩干。 媒染: 碘液13滴,3s-5s秒钟，水冲净,甩干。 脱色: 95%乙醇数滴,5s-10s, 水冲净,甩干。 复染: 稀释石炭酸复红液13滴,10s，水冲净,甩干。 关键步骤： 掌握脱色程度。 【结果观察】 指标: 形态、染色性、排列。 染色性判断： 革兰阳性菌染成蓝紫色, 革兰阴性菌染成红色。 3.观察 标本片自然干燥或在酒精灯 火焰上烤干后,在涂菌处滴加 1滴香柏油,油镜下观察。 Grams Stain,1000 葡萄球菌: 革兰阳性球菌,成堆或呈葡萄状排列。 大肠杆菌: 革兰阴性杆菌,不规则分散排列。 Grams Stain,1000 4.细菌特殊结构（荚膜、鞭毛、芽胞）的观察 注意点： 观察时只能动显微镜的微调,不要动位置。 要求： 画图记录。 1）破伤风杆菌的芽胞: 芽胞染色1000 鞭毛染色1000 2)变形杆菌的鞭毛: 3)肺炎链球菌的荚膜: 荚膜染色1000 【实验注意点】 1.生物安全、无菌操作,菌种管清理； 2.显微镜(油镜)的使用用后擦镜头； 3.用过的载玻片放进有消毒水的玻缸。 4.做好清洁卫生。 【实验报告内容】 1.细菌标本革兰染色观察（方法、结果画图、讨论 ）； 2. 细菌特殊结构（荚膜、鞭毛、芽胞）观察（画 图）。 【实验报告示范】 实验一 细菌形态结构的观察 【实验内容】 1.实验室生物安全规则（每人掌握）； 2.细菌标本革兰染色观察（Grams Stain)(每人做）； 3.复习显微镜(油镜)的使用(每人做）； 4.细菌特殊结构（荚膜、鞭毛、芽胞）的观察（示教镜）。 【实验材料和方法】 一、细菌标本革兰染色观察 1细菌涂片的制作 菌种： 葡萄球菌、大肠杆菌斜面培养物 方法： 涂片 干燥 固定 1）涂片：在酒精灯火焰旁用接种环无菌操作取生理盐水和葡 萄球菌、大肠杆菌斜面培养物，涂抹、混匀于载玻片上，如 下图： 生理盐水 生理盐水 生理盐水 + + + 葡萄球菌 大肠杆菌 葡萄球菌 +大肠杆菌 3）固定 将载玻片以均匀的速度通过酒精灯火焰来回3次。 2）干燥 将涂片在酒精灯火焰上方约20cm高处烤干。 2.革兰染色 1)方法 初染: 结晶紫和碳酸氢钠各13滴,3s-5s，水冲净,甩干。 媒染: 碘液13滴,3s-5s秒钟，水冲净,甩干。 脱色: 95%乙醇数滴,5s-10s, 水冲净,甩干。 复染: 稀释石炭酸复红液13滴,10s，水冲净,甩干。 3.观察 将标本片在酒精灯火焰上烤干后,在涂菌处滴加1滴香柏油 ,油镜下观察。 4.结果 见图1: 葡萄球菌: 革兰阳性球菌,成堆或呈葡萄状排列 大肠杆菌: 革兰阴性杆菌,不规则分散排列 Grams Stain,1000 图1： 细菌标本 革兰染色观察结果 5.讨论 本实验结果表明,通过革兰染色在油镜下 可清楚地观察到标本片上细菌的形态、染色 性和排列状态。革兰染色可将细菌分为2大 类，即染成蓝紫色的革兰阳性菌和染成红色 的革兰阴性菌。其原理是革兰阳性菌和革兰 阴性菌细胞壁结构的差异。 结果不正确的