DB32∕T 904-2006 兽用抗菌药物制剂中安乃近的测定 高效液相色谱法

 附 录 A ICS 65.020.01 B40 备案号：18649-2006 江苏省地方标准 DB32/T 9042006 兽用抗菌药物制剂中安乃近的测定 高效液相色谱法 Determination of analginum in antimicrobial veterinary drug High performance liquid chromatography 2006-03-25 发布 2006-05-25 实施 江苏省质量技术监督局 发布 DB32 DB32/T 9042006 前  言 安乃近是吡唑酮类解热镇痛药，由于其副作用较为多见，为保证兽药产品的安全有效，建立一种抗 菌药物制剂中快速简便、分离好、准确可行的安乃近的测定方法，特制定本标准。 本标准按照GB/T 1.1-2000标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写规则和GB/T 1.2-2002 标准化工作导则 第2部分：标准中规范性技术要素内容的确定方法编写。 本标准附录A为资料性附录。 本标准由江苏省农林厅提出。 本标准由江苏省兽药监察所起草。 本标准主要起草人：刘建晖、时勇、毕昊容、邵德佳、颜京平、朱林、周杨、尹原妍。 DB32/T 9042006 1 兽用抗菌药物制剂中安乃近的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了兽用抗菌药物制剂中安乃近的测定 高效液相色谱法的原理、 试剂和材料、 仪器设备、 试样的制备、分析步骤及允许差。 本标准适用于用高效液相色谱法测定兽用抗菌药物制剂中安乃近的添加量， 本方法最低检测浓度为 10ng/mL。 2 原理 兽用抗菌药物制剂中的安乃近用甲醇提取，提取液在HPLC反相柱上分离，在265nm波长处检测， 用外标法根据峰面积计算安乃近的含量。 3 试剂和材料 除特殊注明外，本标准所使用的试剂均为分析纯，水为蒸馏水，色谱用水为超纯水。 3.1 甲醇：色谱纯（色谱）、分析纯（提取）。 3.2 乙腈：色谱纯。 3.3 磷酸二氢钾：分析纯。 3.4 安乃近对照品溶液：准确称取安乃近对照品 0.02g（精确至 0.00001g，使用前于 105烘箱中干燥 至恒重，储存在硅胶干燥器中），置于 100mL 棕色容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。其浓 度为 200 g/mL。 3.5 磷酸缓冲溶液：取磷酸二氢钾 6.8g，加水使成 1000mL，调节 pH 值至 4.5。 4 仪器设备 高效液相色谱仪（配紫外检测器）、电子天平、pH 计、恒温烘箱、超声波清洗器、振荡器。 5 试样的制备 5.1 固体样品 研磨均匀后取样。 5.2 液体样品 样品混合后，直接量取。 6 分析步骤 6.1 试验溶液的制备 DB32/T 9042006 2 准确取试样 1g 或 1mL（精确至 0. 001g 或 0.00001L）于 100mL 棕色量瓶中，加入甲醇适量，常温 下振荡 30min 使溶解，用甲醇稀释至刻度，摇匀，必要时滤过，准确量取续滤液 5mL，置 50mL 棕色 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。进样前用 0.45 m 滤膜过滤。 6.2 测定 6.2.1 色谱条件 色谱柱：C18柱，150mm4.6mm（id）。 流动相：甲醇-乙腈-磷酸缓冲溶液(15580) 。 柱温：30。 流速：1.0mL/min。 检测波长：265nm。 进样量：10 L。 6.2.2 样品测定 按高效液相色谱仪说明书调整仪器操作参数，用两次以上对照品溶液，对系统进行校正。 将分析样品依次按上述操作条件供高效液相色谱仪进样测定 （色谱图参见附录A） ， 按外标法计算。  6.3 结果计算 试样中安乃近的含量按式（1）计算： X A ms Cs 10 As m 100（1） 式中： X试样中安乃近含量，单位为百分含量（ ）； A样品溶液中安乃近的峰面积； ms对照品的质量，单位为克（g）； Cs对照品含量，单位为百分含量（）；  As对照品溶液中安乃近的峰面积； m样品取样量，单位为克或毫升g（mL）； 每个试样取两份样品进行平行测定，以其算术平均值为测定结果。结果表示到小数点后两位。 7 允许差 同一分析者对同一试样两次平行测定