当归对小鼠结直肠癌作用机制的代谢组学研究--国家自然科学基金国际合作与交流项目计划书.doc

国家自然科学基金资助项目计划书项目批准号依托项目编号申请代码收到日期国家自然科学基金委员会资助项目计划书资助类别： 亚类说明：附注说明：项目名称：当归对小鼠结直肠癌作用机制的代谢组学研究资助经费： 10万 执行年限： 2年 合作国别(地区)/国际组织： 负 责 人：徐铃燕 合作者：电 话：电子邮件：依托单位： 北京中医药大学 通讯地址： 北京市朝阳区望京中环南路6号北京中医药大学邮政编码： 100102 电 话：表日期： 2015 年11月15日国家自然科学基金委员会2008年12月31日制关于填报国家自然科学基金资助项目计划书的说明一、 收到国家自然科学基金委员会资助项目批准通知（以下简称批准通知）后，请认真阅读本填报说明和自然科学基金相关项目及财务管理办法（查阅Http://），按批准通知的要求认真填写国家自然科学基金资助项目计划书（以下简称计划书）。二、 填写计划书时要求科学严谨、实事求是、表述清晰、准确。计划书经项目主管部门审核批准后，将作为项目拨款、研究计划执行、检查和验收的依据。三、 计划书简表部分自动生成。 四、 项目摘要及报告正文部分请按以下要求撰写：1、 必须撰写中、英文摘要及主题词，填报经费预算表。2、 项目组成员和研究内容按申请书执行，一般不得修改。3、 研究内容、方向及研究方案：如果批准通知中明确要求调整研究内容，须对修改的内容作详细说明。4、 国际(地区)合作与交流活动：按双方约定开展（按年度撰写）。5、 预期成果：属理论性研究成果，要注明水平和影响；属应用性研究成果，要注明其应用前景，可能达到的技术指标，以及可以产生的经济、社会效益等。简表姓名徐铃燕性别 女出生年月 1993年 6 月民族 汉 学位 硕士职称 硕士研究生电话传真 电子邮件工作单位 北京中医药大学 所在院系所 中药学院 合作者信息英文姓名性别出生年月中文姓名国家或地区最高学位专业领域专业技术职称合作者单位中文英文通讯地址电话传真电子信箱名称代码 联系人 电子邮件电话网站地址 项目名称资助类别 亚类说明 附注说明 申请代码 项目类别属性 研究类/交流类执行年限 资助经费 第 23 页 版本: 1.000.000项目摘要中文摘要(500字以内)：当归作为“药食同源”的中药材，具有抗炎抗氧化、增强免疫力的作用。在课题组前期研究中，当归超临界提取物具有抗结直肠癌的作用，但是其作用机制尚不明确。本课题拟采用代谢组学的方法，对AOM/DSS模型老鼠尿液进行分析，通过空白组与模型组、模型组与给药组的比较，寻找与当归抗结直肠癌有关的生物标记物，并通过开源数据库中的代谢通路，找到与生物标记物有关的代谢通路，初步探究抗结直肠癌的作用机理，指导当归超临界提取物口服制剂的开发并为其提供理论基础。本课题拟采用AOM/DSS造模，小鼠分为空白组、模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组灌肠给以当归超临界提取物（其中空白组不进行造模、空白组与模型组不进行给药处理），给药完成后收集尿液进行分析，拟采用RPLC-MS、HILIC-MS等仪器，并用Markerlynx软件分析，寻找可能的生物标记物。通过网上现有的开源数据库，找到其代谢通路，进一步验证生物标记物，阐明当归抗结直肠癌的作用机制。关键词(不超过5个，用分号分开): 当归超临界提取物；抗结直肠癌；代谢组学；生物标记物Abstract(limited to 800 words)：Chinses Angelica is one kind Chinese herbal medicine, which is the same as one food, has the effect of anti - inflammatory and anti - oxidation and enhancing immunity. Previous research shows that the effect of the extract of Radix Angelica sinensis on the resistance to colorectal cancer was not clear. In this paper, we use the method of the metabolic group to analyze the urine of AOM/DSS model rats, and find the biological markers related to the anti colorectal cancer, and explore the mechanism of the anti colorectal cancer, and provide a theoretical basis for the development of Chinese angelica extract. AOM/DSS model was used in this research. The mice were divided into blank group, model group, low-dose group, medium dose group and high dose group, Angelica supercritical extracts to mice by coloclysis(the blank control group without modeling, control group and model group were not given drug treatment). Delivery after the completion of urine analysis, adopts HPLC-MS, HILIC-MS and other instruments, and analyzed by Markerlynx software, for possible biomarkes.Through the existing open source database on the Internet, to find its metabolic pathway, to further verify the biological markers, to clarify the mechanism of action of the Chinese angelica.Keywords(limited to 5 keywords,seperated by;): Supercritical angelica extract Colorectal cancer Metabonomics Biological marker经费预算表 （金额单位：万元）预算编制说明： 在填报本表之前，请根据项目资助类别认真阅读相关的资助经费管理办法；经费预算的编制以申请书中的经费申请表为基础，以国家自然科学基金项目资助批准通知书中的资助金额为依据； 编制经费预算时，不考虑不可预见因素和前期投入； 购置与试制仪器设备在5万元以上（包括5万元）时，须在报告正文中逐项说明用途和必要性。年度合计年年年年年经费(万元)10其中研究经费7.0国际(地区)合作与交流经费1.5机动经费1.5科 目预算经费经费经费备 注（计算依据与说明）一研究经费7.01科研业务费4.2（1）测试/计算/分析费3GC/MS LC/MS HPLC （2）能源/动力费0（3）会议费/差旅费0.5（4）出版物/文献/信息传播事务费0.6（5）其它0.12实验材料费2.0（1）原材料/试剂/药品购置费SD大鼠等（2）其它3仪器设备费0.84实验室改装费5协作费二国际(地区)合作与交流经费（=资助费40%）1.51项目组成员出国(境)合作交流2境外专家来华合作交流3. 出国(境)参加会议4. 在华举办会议三劳务费1.0四管理费0.5合 计 10与本项目相关的其他经费来源国家其他计划资助经费0其他经费资助（含部门匹配）0其他经费来源合计0.0000 国家自然科学基金国际(地区)合作与交流项目计划书报告正文（一） 立项依据与研究内容1.项目的立项依据1.1大多数抗癌药物存在的问题及当归的药用价值开发大多数的抗癌药物在杀死癌细胞的同时也损伤正常细胞,临床上表现出很多副作用,特别是化疗药物对患者免疫系统造成的损害。因此,从天然动、植物中寻找毒性低、疗效好的抗癌活性成分,是国内外癌症防治研究的热点。当归作为“药食同源”的中药材，常与其他中药配伍应用，素有“十方九归”之称。近几年当归的药用价值引起越来越多研究学者的注意，与多种学科领域结合，对当归有效成分和药用价值进行开发。 当归（ Angelica sinensis(Oliv.) Diels ）别名干归、秦哪、西当归、岷当归、金当归、当归身、涵归尾、当归曲、土当归，是伞形科植物，其根可入药，是我国传统常 用中药之一，主产为甘肃眼县。能够补血活血、调经止痛、润肠通便，同时还可洽疗风湿擦痛等疾病，当归能够清除氧自由基同时具有抗炎镇痛、抗脂质过氧化作用、抗肿瘤作用和增强免疫力的作用。当归的主要成分有挥发油、多糖类、黄酮类、有机酸类等。挥发油以当归内酯和藁本内酯为代表，近几年研究表明二者均能够抑制癌细胞的增殖具有较好的抗肿瘤作用；多糖类主要糖类为葡萄糖、阿拉伯糖以及糖醛酸。多糖类成分能提高机体免疫功能，抑制肿瘤增殖，是诱导肿瘤细胞凋亡或分化的天然诱导剂。当归多糖具有抗氧化作用，具有一定清除氧自由基的能力，能减轻结肠炎症反应及组织损伤。1.2代谢组学研究全面研究了代谢产物的变化代谢组学(Metabonomics/Metabolomics)是 20 世纪 90 年代中期，由英国伦敦帝国理工大学Jeremy Nicholson 教授及其同事提出，是继基因组学、转录组学、蛋白组学之后生物系统学另一个重要的研究领域，它是以整体指标分析为基础，利用高通量检测及数据处理为手段，通过系统整合及信息建模为目的的系统生物学的一个分支。代谢组学是通过针对考察生物体系统受到外界的刺激或干扰后其体内的代谢产物变化或及其随时间的变化，以研究生物体系内的物质代谢途径。目前代谢组学作为一门新兴科学，已经被广泛应用于药物毒性、药物机理、动物模型、植物和微生物、中药成分安全评价以及中医证候研究等领域，并取得了一定的突破和进展。 代谢组学具有弥补基因组学和蛋白质组学在生命科学研究中的不足，主要以研究代谢终产物以揭示机体受遗传和外界环境影响后的变化规律与相关机制；与转录组学、蛋白质组学相比，代谢组学具有其如下优势：检测的体液主要为血液、尿液，不需要静脉穿刺和提取活体组织，对机体损伤小；代谢组学能为整个机体功能提供统一性信息，而得到的信息量巨大；机体微小的变化都会在代谢物上得到放大，从而使代谢物更容易被检测到；代谢组学不需要大量的表达、基因组序列数据库；代谢物的种类数比基因和蛋白质的要少的多，代谢物的种类大约为 103数量级，而细菌和基因数量级最小的也得有几千个；与转录物和蛋白质相比，指定的代谢物在每个机体中都是相同的；机体体液的代谢物能反应整个机体体系的生理、病理变化。所以代谢组学研究技术更通用。代谢物的含量变化可以看成是生物体受基因或外界环境发生变化时做出的的应答反应。代谢组学是以整体理论方法研究生物体系中各分子物质之间以及机体所受环境的相互作用。中药是我国传统文化的组成部分之一，积累了数千年的临床经验，并拥有其独特的系统理论体系。绝大多数中药为植物，中药及其方剂都是复杂的混合物体系，而中药的“多组分、多靶点、整体调节”与代谢组学的“整体性、系统性、综合性”的思想相一致。为此，对中药的研究可以利用代谢组学分析方法，以对中药的物质基础、作用机理、作用位点、药效作用、组方和毒副作用以及中药种植资源提供可靠的依据。综上，本课题特色在于将代谢组学运用于当归对小鼠结直肠癌的研究，全面的分析小鼠内源性代谢物的变化，寻找与当归抗结直肠癌有关的生物标记物，并进一步阐释抗结直肠癌的作用机制。（二） 国内外研究进展肿瘤是一种发病率逐年上升的疾病，尤其恶性肿瘤已严重影响人类的生存。因此，寻找有效抗癌药物是目前肿瘤研究的重点。目前，随着中药抗肿瘤作用的发现，从中药中开发有效抗肿瘤药物已成为热点，当归也引起了学者关注，研究证实当归不同提取物能有效抑制肿瘤生长，显示出一定抗肿瘤活性。1当归多糖抗肿瘤效应当归多糖（Angelica polysaccharide，APS）为当归有效成分之一，中药多糖抗肿瘤以其作用机制多方位、多环节、高效低毒影响肿瘤细胞增殖以及有较好抗肿瘤特点而被学者广为关注。曹蔚1等通过研究APS-1cII（Angelica polysaccharide-1cII，APS-1cII）抗肿瘤机制，证实均一性APS-1cII 对体外培养肿瘤细胞无增殖抑制作用，但对S180 荷瘤小鼠肿瘤生长具抑制效应，且能增加荷瘤机体免疫细胞数量和免疫器官质量，并刺激免疫细胞分泌TNF-、IL-1。此机制可能与APS-1cII 参与荷瘤机体免疫调节直接促使肿瘤凋亡或间接抑制肿瘤细胞增殖有关，通过体液免疫和细胞免疫，作用于非特异性及特异性免疫细胞，综合实现体内抑瘤作用。陈曦2等从当归粗多糖中分离纯化到均一性杂多糖APS-bII，并探讨了APS-bII 体外抗肿瘤机制，结果表明，APS-bII浓度范围为（31000mg/L）时，可对人结肠癌细胞SW-1116和人肝癌细胞HepG2 产生较为显著增殖抑制作用。APS-bII 虽能对体外培养的多种肿瘤细胞产生抑制，但其作用机制尚且不明，有待更为深入的研究。曹蔚等从当归中分离纯化得到新型酸性多糖APS-3c，用于研究其对体外培养肿瘤细胞的毒性，结果表明，相比对照组APS-3c 对人HeLa 和HepG2 细胞没有显著增殖抑制效应，而对人白血病HL-60 及SWlll6 肿瘤细胞有一定毒性。研究发现，当归酸性多糖APS-3b 能显著抑制S180 肿瘤生长，延长S180 荷瘤小鼠生存时间，这与APS-3b 促进脾细胞增殖，上调脾细胞中IFN-gamma、IL-6 及IL-2mRNA 表达，促进腹膜巨噬细胞产生TNF-alpha 及NO 相关。郑敏3等用APS 研究了对人白血病K562 细胞的增殖与分化作用，得出结论，APS 对K562 细胞增殖有显著抑制作用，并可降低K562 细胞C-MYC 表达水平，促进其向红、粒细胞方向分化，这与APS 阻止K562 细胞由G0/G1 过渡至S、G2M 期，影响参与K562 细胞增殖与分化的相关基因而产生抗肿瘤作用有关。华自森等证实APS 能够抑制K562 细胞增殖、诱导其凋亡并促进其分化。由此可见APS 是一类极具价值、并具前景的抗肿瘤药物。吴素珍4等通过建立S180 小鼠模型研究了硫酸酯化当归多糖（SPAS）的抗肿瘤作用。证实，当归多糖经硫酸酯化后，能延长荷瘤小鼠存活期，并能使小鼠移植性肿瘤S180 生长受到抑制，与阴性对照组相比肿瘤重量明显较轻。2. 当归挥发油的抗肿瘤效应当归内酯（ASDL）为当归挥发油成分之一，龙锐5通过建立荷瘤小鼠H22 肝癌模型，研究了ASDL 抗肿瘤效应。结果表明，ASDL 具显著抑制小鼠H22 肝癌移植瘤的生长作用，有良好抗肿瘤活性，ASDL 的抑瘤作用是通过增加胸腺和脾脏系数，增强淋巴细胞增殖、巨噬细胞吞噬功能、CTL 和NK 细胞活性而实现。将当归挥发油成分之一正丁烯基苯酞（ n-butylidenephthalide，n-BP）作用于人前列腺癌细胞PC-3 和LNCaP。结果显示，n-BP 能通过提高细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子及降低检验点蛋白表达，而使两种细胞均停滞于G0/G1 期，且能受内质网应激诱导调节而产生细胞毒作用，亦能抑制荷LNCaP 瘤裸鼠体内肿瘤生长，抑瘤率达68%。研究表明，体外适量n-BP 能显著抑制人肺癌A549 端粒酶活性及hTERT mRNA 表达，从而对其产生生长抑制作用；体内试验发现，n-BP 对荷A549 瘤裸鼠亦能产生生长抑制作用。可见，n-BP 在体内外均能对发挥抗肿瘤效应6。研究显示，用甲醇从当归中提取的一种新型藁本内酯对癌细胞K562、L1210 具有很强细胞毒作用，IC50 分别达到了（4.780.18）mol/L，（2.270.10）mol/L7。藁本内酯对人结肠癌细胞HT-29 具有细胞毒和增殖抑制作用，对HT-29 细胞增殖抑制作用强于对人正常结肠细胞CCD-18Co 的细胞毒作用，对前者细胞IC50 为（60.636.79），表明，藁本内酯的抗癌活性主要是通过抑制癌细胞增殖实现的。藁本内酯对人恶性胶质瘤T98G 细胞转移具有显著抑制效应，并与剂量成正相关，此机制与调节3 种Rho GTPases（RhoA，Rac1 and Cdc42）的表达有关，可见，藁本内酯通过调节Rho GTPases 表达，以抑制癌细胞转移的方式，也可能发挥抗肿瘤效应。3.当归水提液抗肿瘤效应顾勤8等探究了单味当归水煎液对小鼠黑素瘤B16-BL6细胞的影响及其机制，结果显示，当归水煎液可显著抑制小鼠B16-BL6 细胞增殖，减少肺转移结节数，降低肺转移程度。陈景华9等考察当归经水提醇沉MEM 培养液稀释后对共培养的人黑素瘤细胞（A375）和角质形成细胞（HaCaT）合成黑素能力的影响。证实，当归水提醇沉物能显著抑制共培养细胞合成黑素，并与提取物浓度呈一定量效关系。4.当归丙酮提取物抗肿瘤效应用丙酮10提取了当归脂溶性成分，研究其对多形性成胶质细胞瘤的药理效应活性，提取物作用于GMB8410细胞及荷GMB8410瘤裸鼠体内，得出结论，当归丙酮提取物能通过降低凋亡蛋白组织蛋白酶B及VEGF的表达水平，在体外能对GMB8410细胞产生增殖抑制效应；体内能够抑制脑肿瘤生长及其新生血管的形成，这可能与细胞周期受抑及凋亡受促有关。5 当归超临界提取物及馏分对结直肠癌的预防作用研究11从体外细胞实验研究当归超临界挥发油总提取物及其分子蒸馏馏分抗炎、抗氧化能力，以及对Nrf2/ARE通路的调节作用。采用AOM/DSS小鼠结直肠癌模型验证当归超临界提取物及馏分的癌症预防作用，并与细胞实验作比较。结果表明当归的脂溶性成分能够激活Nrf2/AR通路，发挥抗炎抗氧化作用。馏分4的作用效果显著。当归脂溶性成分能够干预结直肠癌的发生发展，馏分4作用效果较当归超临界总提取物显著。以上综述表明，当归具有确切抗肿瘤活性。当归不同提取物在抗肿瘤方面显示出良好药理活性是中药在抗肿瘤方面的独特性，相比化学药物而言，当归抗肿瘤，具高效低毒特点，这在肿瘤治疗方面相比化疗法独具优越性，不仅能产生较好疗效，且能保护机体正常组织细胞。说明充分开发当归还可为开拓抗肿瘤新型药物提供科学指导。当归具有多种化学成分，但目前当归有效成分中仅报道了其多糖、挥发油、水煎液及丙酮提取物抗肿瘤效应，而当归香豆素类，黄酮类，有机酸等化学成分尚没有抗肿瘤方面研究。有必要深入挖掘当归有效抗肿瘤活性成分，这对充分开发利用当归极具意义，也能为挖掘抗肿瘤药物提供思路、为开拓有效抗肿瘤药物奠定基础。参考文献：1曹蔚,李小强,侯颖,等.当归多糖-1cII 的抗肿瘤活性研究J.中国新药杂志,2008,17(12):1018-10212陈曦, 曹蔚, 孙阳,等. 当归多糖APS-bII的结构特征及体外抗肿瘤作用J. 科学技术与工程, 2010, 10:1839-1843.3郑敏, 王亚平. 当归多糖对K562细胞增殖抑制与诱导分化的实验研究J. 中国中西医结合杂志, 2002, 第1期(1):54-57.4吴素珍, 李加林, 陈水亲,等. 硫酸酯化当归多糖抗肿瘤实验研究J. 时珍国医国药, 2012, 02期:319-320.5龙锐. 当归内酯的免疫调节作用及抗肿瘤活性的研究D. 四川大学, 2006.6ChiuSC,ChenSP,HuangSY,etal.Inductionofapoptosiscoupledto endoplasmic reticulum stress in humanprostatecancercellsby n-butylide-nephthalideJ.PLoSONE,2012,7(3):e337427ChenQC,LeeJ,JinW,etal.Cytotoxicconstituentsfromangelicaesinensis radixJ.ArchPharmRes,2007,30(5):565-5698顾勤, 徐建亚, 程罗根,等. 当归对黑色素瘤细胞粘附、侵袭、运动和转移能力的影响J. 中药材, 2007, 03期:302-305.9陈景华, 王兴焱, 王雪,等. 当归提取物对黑素瘤细胞与角质形成细胞共培养模型黑素合成的影响J. 中国实验方剂学杂志, 2012, 17期:205-208.10 Lee WH, Jin JS, Tsai WC, et al. Biological inhibitory effects of the Chinese herb danggui on brain astrocytomaJ.Pathobiology,2006,73(3):141-14811 李晓宁. 当归超临界提取物及馏分对结直肠癌的预防作用研究D. 北京中医药大学, 2013.（三） 项目的研究内容、研究目标,以及拟解决的关键科学问题【研究内容】2.1当归超临界提取物的提取 本课题采用实验室已经成熟的当归超临界提取物提取方法，最佳萃取工艺为萃取压力30MPa，萃取温度50，萃取时间2h，CO2 流量25L/h，分离釜 压力8MPa，温度50，分离釜 压力系统尾压，温度35。2.2小鼠造模本课题采用实验室较为成熟的小鼠结直肠癌造模方法，采用SPF 级雄性 Balb/c 小鼠，200g左右，以 10mg/kg 体重单剂量腹腔注射 AOM， 分别在第 1，3，5 周饮水中加入 2%DSS，自由饮用。其余时间饮用动物试验中心提供的高纯水，实验全程自由摄食，喂养12周。2.3生物标记物的寻找及验证本实验将运用代谢组学方法，建立大鼠尿液样本的代谢组学分析方法，研究AOM/DSS慢性炎症相关的结直肠癌模型大鼠的内源性代谢物的变化，寻找与当归抗结直肠癌有关生物标记物，分析当归超临界提取物对生物标记物的表达量的影响，找到当归超临界提取物适合的给药剂量，并结合各生物标记物的相关代谢通路，初步分析抗结直肠癌的作用机制。【研究目标】1. 基于代谢组学建立研究小鼠尿液代谢产物变化的分析研究方法2. 基于AOM/DSS小鼠慢性炎症相关的结直肠癌模型与代谢组学研究方法，找到与当归抗结直肠癌有关的内源性小分子生物标志物3. 观察当归的抗结直肠癌活性，分析其对生物标记物的表达量的影响，寻找与生物标记物有关的代谢通路，初步探明抗结直肠癌的作用机制，推动中药当归的现代抗癌作用研究3拟采取的研究方案及可行性分析（包括研究方法、技术路线、实验手段、关键技术等说明）；AOM/DSS模型造模3.1技术路线采集尿液样本前处理 小鼠给药对照组低剂量组中剂量组高剂量组空白组采集尿液，样本制备数 据 采 集数 据 处 理数 据 分 析Markerlynx软件分析（PCA和OPLC）当归超临界提取物对生物标记物的表达量的影响抗结直肠癌作用机制相关代谢通路3.2实验方案3.2.1小鼠造模SPF 级雄性 Balb/c 小鼠，200g左右，以 10mg/kg 体重单剂量腹腔注射 AOM， 分别在第 1，3，5 周饮水中加入 2%DSS，自由饮用。其余时间饮用动物试验中心提供的高纯水，实验全程自由摄食，喂养12周。3.2.2当归超临界提取物提取当归超临界提取：最佳萃取工艺为萃取压力30MPa，萃取温度50，萃取时间2h，CO2 流量25L/h，分离釜 压力8MPa，温度50，分离釜 压力系统尾压，温度35。3.2.3动物分组（每组10只）及给药方式空白组、模型组、低剂量组（15mg/kg）、中剂量组(30mg/kg）、高剂量组（60mg/kg）给药方式：1-12周灌肠给药（一周3次，隔天给药）3.2.4尿样的收集与制备（1）将大鼠禁食（自由饮水）12h，灌肠给药后置于代谢笼中，收集随后的24h尿液。尿样于4下离心5min，转速为10000rpm，取上清液存于-80冰箱中备用。（2）SPE（固相萃取）：将含5.0mol肌酐的大鼠尿样用于SPE处理,分别用2.0mL H2O和2.0mL MeOH进行洗脱分离,获得水洗脱部分和甲醇洗脱部分。将水洗脱部位冻干,甲醇洗脱部位氮气吹干,两部位分别用500L 50% 乙睛和500L H2O复溶。在正、负离子检测模式的ESI电离条件下,水洗脱部分选用HILIC-MS(亲水性色谱-质谱),甲醇洗脱部分采用RPLC-MS（反相液相色谱-质谱）谱进行检测。3.2.5色谱条件RPLC色谱条件：HILIC色谱条件：质谱条件：分别采用正、负离子检测模式的ESI电离方式,扫描模式为TOF扫描,质量扫描范围均为m/z 100-1000，各种气路均使用氮气,具体参数见下表。【可行性分析】1.工作基础扎实：实验前期准备工作充分，调查了当归国内外研究的近况，表明了当归具有抗肿瘤活性，以及抗结直癌的功效。通过查阅大量文献资料，积累了基于中药代谢组学的理论知识，前期工作基础为本项目的立项提供了前期可行性验证。2研究平台合理：本课题拟采用HPLC-MS辅以NMR检测及分析技术，既具有LC-MS分离度高、检测灵敏、快速等优势，又兼顾NMR强大的结构解析能力，实现成分的微量、快速、高通量检测，结合多变量统计学方法，全面、客观反映不同药效成分的共性及差异性物质基础。利用基于NMR方法的体内代谢组学技术，研究不同药效成分的体内作用，结合生物信息学分析，推导不同药效成分作用后引起的差异性代谢通路调控。3.研究团队涉及多学科人才：本项目申请团队具备从事掌握了相关的数理统计方法，为本项目的顺利实施提供了方法学及技术方面的保障。项目组成员能熟练使用LC-MS、NMR等分析仪器及软件，项目组研究人员构架合理，涉及中药化学、药剂学、药理学、药物分析等多学科专业人员，综合能力强，可保障研究顺利实施。4. 年度研究计划及预期研究结果（包括拟组织的重要学术交流活动、国际合作与交流计划等）。2016.1-2016.3(1)当归超临界提取物的提取(2)小鼠造模2016.3-2016.6(1)小鼠给药，收集尿液并样品前处理(2)采用RPLC-MS、HILIC-MS等色谱进行数据分析，并寻找可能的生物标记物。2016.6-2017.6（1）分析与生物标记物有关的代谢通路，初步探究抗结直肠癌的机制（2）拟参加国内外交流会1次【预期研究成果】1. 基于代谢组学建立研究小鼠尿液代谢产物变化的分析研究方法。2. 基于AOM/DSS小鼠慢性炎症相关的结直肠癌模型与代谢组学研究方法，找到与当归抗结直肠癌有关的内源性小分子生物标志物。3. 观察当归的抗结直肠癌活性，分析其对生物标记物的表达量的影响，寻找与生物标记物有关的代谢通路，初步探明抗结直肠癌的作