细胞生物学实验-ABO血型鉴定试验.ppt

人体血型（ABO型）检验 实验内容 目的意义 实验原理 材料 试剂 相关实验说明 实验步骤 实验要求 目的意义 通过本实验，了解人类血型的遗传特性及其遗 传方式；掌握人体血型（ABO型）的检验方法 。同时了解自己的血型。 实验原理 人类的ABO血型遗传是由基因决定的。很多時间，一个基因 只包含两个等位基因。但是，控制血型的基因I则有三个不 同等位基因。即同一时间内，一个位点可以有其中任何两 个等位基因出现。 等位基因A使红血球产生抗原A； 等位基因B使红血球产生抗原B； 等位基因O使红血球不产生抗原； 等位基因A和B为等显性，O对A和B均为隐性。 血型鉴定的原理是根据红细胞上有或无抗原和抗 原或AB抗原，将血型分为型、型、型及型四种。 本实验采用红细胞凝集试验，用已知抗和抗分型血清来 测定红细胞上有无相应的抗原或抗原或AB抗原来确定 ABO血型。 血 型可能基因型 A B AB O IAIA或IAIO IBIB或IBIO IAIB IOIO 材料 采集管、载玻片、脱脂棉、针、75%酒精、 受检者血液 。 试 剂 实验说明 1人体的血液是怎样产生的 2血液有哪些功能 3血液由哪些成分组成 4造血需要哪些原料 5血型 6父母的血型与子女的血型关系 7输血 8血型与性格 人体的血液是怎样产生的 血液是一种流体组织，充满于心血管系统中，在 心脏的推动下不断循环流动。每个人体内的血液 ，都是自己体内产生的，不是由母体血液流入胎 儿血管先天带来的。骨髓是人体最重要的造血器 官。在正常情况下它不仅生成红细胞、粒细胞和 血小板，同时也生成淋巴细胞和单核细胞。骨髓 每秒钟可造出1700万个血细胞。人体血液中所有 不同的血细胞，都是来自于肝脏、骨髓和胸腺里 的始祖细胞多能干细胞及由此移行的定向干 细胞。 这就是人体血液产生的基本道理。 血液有哪些功能 到目前为止，世界上还没有哪个国家能够人工制造血 液来代替人类自身血液的生理功能。人们之所以把血 液看作为生命的象征，就是在于血液对于维持人体生 命所具有的十分重要的功能。主要有以下几点。 运输功能。 调节功能。 防御功能。 维持酸碱平衡和渗透压的功能。 血液由哪些成分组成 血液的组成成分，主要分为以下两部分： 一部分为无形成分，称为血浆，也就是血液中 呈黄色液体的部分，约占血液总量55-60%。 另一部分为有形成分，称为血细胞，这部分约 占血液总容积40-45%。 人体内血液除红细胞外，其它血细胞数量很少，常忽略不 计。红细胞平均寿命为120天，白细胞寿命为9-13天，血 小板寿命为8-9天。正常情况下，每人每天有40毫升的红 细胞衰老死亡，同时，也有相应数量的细胞新生。 血液中主要成分的正常参考值 红细胞数 男： 4.29-5.3810/L 女： 3.5-5.010/L 血红蛋白 男： 120-160g/L 女： 110-150g/L 血比重 男： 1.054-1.062 女： 1.048-1.059 血细胞压积 男： 41.0-52.0% 女： 38.0-46.0% 红细胞沉降率(cluter法) 男: 0-8mm/lh 女: 0-10mm/lh 白细胞数 0.4-1.01010/L 白细胞分类计数 嗜中性粒细胞50-70% 嗜中性粒细胞1-4% 嗜中性粒细胞0-1% 淋巴细胞25-40 单核细胞4-8% 血小板数 10-301010/L 出血时间 1-3min 凝血时间 玻片法（室温）2-8min 试管法（室温）4-12min 总蛋白 60-80g/L 白蛋白 40-55g/L 球蛋白 20-25g/L 胆固醇总量 2.83-6.0mmol/L 造血需要哪些原料 蛋白质： 碳水化合物 铁： 铜 叶酸： 维生素C 维生素B12 以及多种微量元素和激素等物质。 成人每天需要蛋白质约75克。 成年人每天需要铁量为12毫克。 成人每天需要量为200微克。 血 型 血型是人类血液型别的一种标志。 奥地利维也纳大学助教兰德斯坦纳（Landsteiner）于1901年正式宣布：人类有 三种血型（A、B、C（O）。兰德斯坦纳以他划时代的发现，获得了1930年诺 贝尔医学生理学奖。兰德斯坦纳1868年6月14日出生于维也纳，1943年6月25日 在纽约去世。在他的一生中，发现了ABO、MN、P、Rh等许多血型，对人类血 型研究作出了重大贡献，赢得了“血型之父”的誉称。 1902年，狄卡斯德罗（Decastell ）医生研究发现第四种血型D型（即现在的AB 型）。 1921年世界卫生组织把血型系统的血型正式向全世界统一命名为、 、四种血型。 Rh血型在我国99以上是Rh阳性，在我国汉族人群中Rh血型阴性的仅占 0.3%左右。白种人Rh阴性约占15，黑种人约占4。 我国汉族人口总的血型比例顺序为： O(34.11%) B(28.98%) A(28.29%) AB(8.69%)。 血型系统是如何定型的？ 在人类的血液里含有凝集原（又称抗原）A、B和凝集素（又称抗体）A 、B。 凝集原附着在红细胞表面，凝集素存在于血浆（或血清）中，同名的凝 集原和凝集素相遇（如凝集原A和凝集素A）会发生红细胞凝集现象（溶 血反应）。 通常所说的ABO血型系统，是指人体血液中红细胞的血型，是根据红细 胞表面的抗原与血清中的抗体的特异性来确定的。 人体的血液中，所含的凝集原（抗原）和凝集素（抗体）是不同名的。 根据所含抗原和抗体的类型不同，可分为A、B、AB、O四种血型。凡红 细胞上含有抗原，而血清中含有抗抗体的称为型；红细胞上含有 抗原，而血清中含有抗抗体的称为型；红细胞上含有和抗原 ，而血清中无抗、抗抗体的称为型；红细胞上不含有、抗 原，而血清中含有抗和抗抗体称为型。 血型是遗传决定的，亲代与子代的血型关系 取决于遗传因素。 双亲都是O型，子代也是O型； 亲代是O型或AB型，则子代为A型或B型。 子代与母亲血型不合可引起新生儿溶血病。 父母的血型与子女的血型关系 父母血型子女可能有的血型子女不可能有的血型 O+OOA、B、AB A+OA、OB、AB A+AA、OB、AB B+OB、OA、AB B+BB、OA、AB A+BA、B、AB、O- AB+OA、BO、AB AB+BA、B、ABO AB+AA、B、ABO AB+ABA、B、ABO 人类血型有数十亿种之多。人类除同卵双生子女外， 再也找不到两个血型完全相同的人。 输血概况 目前公认的是英国妇产科医生Blundell（布伦德尔 ）。他在 18171818年作了大量实验，并于 1818年12月22日在伦 敦举行的内科学会上作了输血报告，引起了医学界的轰动 。还首创了重力输血器，利用重力来作输血时的推动力， 这种输血方法一直沿用了100年左右。 目前临床输血的进展情况 谁是第一个把人血输给人的？ 从输全血发展到成分输血。目前世界上医疗水平先进的国 家，成份输血占输血治疗中的95以上，成份输血比例已 列为衡量一个国家或地区输血技术是否先进的重要标志。 替补输血发展到治疗性输血； 人的血源性制品发展到生物技术制品； 异体输血发展到自体输血。 输血注意事项 输血、献血前要进行严格的血型检验和配型，保证输 用同一血型的血液，否则会引起不良反应，甚至危及 生命。输血原则要求血型相同，但在找不到相同血型 的紧急情况下可用O型血代替。 对于在生育年龄的妇女和需要反复输血的病人，还必 须使供血者与受血者的Rh血型相合，以避免受血者在 被致敏后产生抗Rh的抗体。 献血前应注意休息，使身体和情绪逐步稳定；不要饱 食或空腹献血；不要吸烟饮酒；不要大量进食油腻食 物；禁服任何药物；否则会破坏血液质量造成不良后 果。 O型血可以输给任何血型的人吗？ 从血型抗原和抗体的免疫学理论看，O型血是不可以输给A型、B型 、和AB型人的。但是，由于O型血的红细胞上既没有A抗原又没有B 抗原，输给A、B、AB型人后，O型红细胞不被受血者血清中的相对 的抗A或抗B抗体结合，因而输入的O型红细胞不受破坏，而发挥其 良好的携带氧气和排除二氧化碳的功能，称O型血的人为“万能输 血者”只是从这一点来说的。 在O型血的血清中，含有抗A和抗B两种抗体，输入其他血型的人的 体内后，它可以与受血者血液中的红细胞发生凝集继而产生溶血 。由于输入的血量少，受血者体内的血液量大，通过血液循环的 稀释，和受血者血浆中存在的一些A型或B型的血型物质对O型血清 中的部分抗A和抗B抗体的中和，可以把结合的红细胞的溶血机会 降低。但是如果输入的O型血量较大，而且血清中所含抗A抗B抗体 浓度很高，同样可以发生严重的输血反应，所以“万能输血者”并 非万能，它同样潜伏着严重的危险性。 除非特殊情况下（当受血者血型鉴定困难、抢救生命的紧 急关头、同型血不足或缺乏时，才可输配血相合的型洗涤红细 胞，亦可输少量型血以解燃眉之急。 ），O型血是不可以输给 其他血型的人。应坚持同型血相输的原则。 血型是由特定的遗传物质决定的，这就象 种瓜得瓜、种豆得豆一样，因此血型一经 确定就不会自行改变。 人的性格是人的一种行为表现，性格属于 精神范畴而不属于物质范畴。由于性格不 是遗传基因物质，因此不存在遗传性。人 的性格只是在人出生以后，受环境等诸多 因素潜移默化的影响而逐步形成的。同时 它又随人的年龄和环境的改变而有所变化 ，并非“本性难移”，而是具有可塑性的。 因此无论从理论上或是事实上，都说明血 型与性格之间不存在任何必然性的联系。 取干净载玻片滴加定型剂消毒 取血消毒取血消毒 观察记录结果 实验步骤实验步骤 抗抗AA抗抗BB 用7075的酒精消毒取血部位 消毒取血部位消毒取血部位 用针扎一下消毒部位，使血冒出， 立即滴一滴血液在抗A或B上。 抗抗AA 抗抗BB 再用7075的酒精擦洗消毒刚用针扎的 部位，然后再取一滴血液于抗B或A上。 抗抗AA 抗抗BB 观察有无凝集，并按下表判定结果。 血型抗A试剂抗B试剂 A B O AB + - - + - + - + 呈现均匀的淡红色时，表明不凝集，用“一”号表示。 在试剂里凝结成絮团状，形成鲜明的对比，表明凝集，用“ 十”号表示。 红细胞计数 1采血与稀释 20ul血液3.98ml稀释液 2血细胞计数板 中央大方格四角的和中央的中方格 及其内部的小方格用作红细胞的计数 3. 将盖玻片放入计数板中央，用洁净玻璃棒蘸取少量已 稀释混匀的血细胞悬浮液，于盖玻片边缘一次性滴入计数 室内，使之灌满，静置23min后再进行计数。 4. 计数方法 红细胞数/mm3=5个中方格的红细胞总和104 注意事项 （1）血液加入试管后必须充分摇匀，但动作要轻。 （2）计数室内细胞分布要均匀，每中格的红细胞数目相 差20个以上，表示分布不均匀，必须摇匀后重新计数。 （3）混悬液滴入计数室时，液量要适当，计数室内正好 充满或稍多于，将两侧深槽内多余溶液用滤