激光共聚焦显微术在中药与天然药诱导肿瘤细胞凋亡研究中的应用.pdf

7 0 环球 中医药 2 0 1 1 年 1月第 4卷第 1期g l o b a l t r a d i t i o n al c h i n e s e me d i c i n e ， j a n u a r y 2 0 1 1 ， v o 1 4 ，n o 1 激光共 聚焦显微术在 中药与天然药 诱导肿瘤细胞凋亡研究 中的应用 李钻 芳 陈文列 陈荣 【 摘要】 激光扫描共聚焦显微术因其具有成像分辨率高， 可实现对活性细胞动态定量测量及 三维重建等优势 ， 用 于中药与天然药诱导肿瘤细胞凋亡 的研究 中， 包 括以下几个方 面 ： 肿 瘤细胞细 胞核变化观察； 细胞内钙离子浓度测定； 线粒体膜电位测量； 凋亡相关基因表达等。 【 关键词】 激光扫描共聚焦显微术； 中药； 天然药； 肿瘤细胞； 凋亡 【 中图分类号】 q 2 3 3 【 文献标识码】 a d o i ： 1 0 3 9 6 9 j i s s n 1 6 7 4 1 7 4 9 2 0 1 1 0 1 0 2 3 app l i c a t i on o f l a s e r s c an ni ng c o nf o c a l mi c r os c opy on r e s e a r c h o f t umor c e l l a po pt o s i s i nduc t e d by t r a d i t i o n a l c h i n e s e me d i c i n e s a n d n a t u r a l me d i c i n e s l z u a n -f a n g ， c h e n w e n l i e ， c h e n舶n g l e c t r o n mi c r o s c o p i c l a b o r a t o r y，f u fi a n a c a d e m y o f i n t e g r a t i v e me d i c i n e ，f u j i a n u n i v e r s i t y of t r a d i t i o n a l ch i nes e me d i c i n e，fu z h o u 3 50 1 0 8，c hi na c o r r e s p o n d i n g a u t h o r ： c he n we n l i e ， e ma i f ：c e 几 wl 1 6 3 c o m 【 a b s t r a c t 】 i s e r s c a n n i n g c o n f o c a l m i c r o s c o p y i s c h a r a c t e ri z e d f o r h i g h i m n g r e s o l u t i o n ， n o n i n v a s i v e d y na mi c me a s u r e me n t a n d 3 d i ma g i n g f u nc t i o n a n a l y s i s i t i s t h e p r e f e r r e d t e c h n o l o g y i n a nt i t u mo r me c h a n i s m r e s e a r c h o f tr a di t i o n a l chi n e s e me di c i ne s a nd n a t u r a l me di c i n e s the a p pl i c a t i o n s o f ls cm i n c l u d e s e v e r a l a s p e c t s ，s u c h a s mo r p h o l o g i c o b s e r v a t i o n o f t u mo r c e l l n u c l e u s ，d e t e r mi n a t i o n o f i n t r a c e l l u l a r ca “ d e n s i t y，mi t o c h o n d r i a me mb r a n e p o t e n t i a l a n d e x p r e s s i o n s o f a p o p t o s i s a s s o c i a t e d g e n e 【 ke y w o r d s 】 l a s e r s c a n n i n g c o n f o c a l m i c r o s c o p y ( l s c m) ； t r a d i t i o n a l c h i n e s e m e d i c i n e ； n a t u r al me d i c i n e s ；t u ln o r c e l l ； a p o p t o s i s 激光扫描共聚焦显微术( 1 a s e r s c a n n i n g c o n f o c a l m i c r o s c o p y ， l s c m) 是先进的细胞和分子生物研究技 术 ， 是在荧光显微镜 的基础上配置激光光源， 扫描 装置， 共聚焦装置和检测系统加以数据化的图像处 理技术而形成的新型显微镜技术 ， 因其独特 的激光 扫描装置 ， 具有不损伤细胞、 共焦成像分辨率高、 能 层析扫描、 实现多重荧光共定位 以及能观察样品的 三维 图像等优点， 已被广泛应用 于形态学 、 细胞生 物学、 分子生物学 、 发育生物学 、 神经科学、 药理学、 遗传学和环境科学以及抗肿瘤药物研究等领域 。 综 述 1 l s c m 在肿瘤细胞凋亡检测中的优势 促进肿瘤 细胞凋亡是许多中药杀伤肿瘤细胞 的重要途径 ， 中药诱导细胞凋亡成为中医药抗肿瘤 机制的研究热点之一。细胞凋亡时伴 随染色质 的 降解及凋亡相关信号的传递 ， 中药可对细胞凋亡过 程的不同环节进行 调节 ， 进 而促进细胞凋亡， 维持 机体内平衡 ， 延缓或阻止组织病理过程的恶化。 细胞凋亡的常用检测有形态学的光学显微镜、 电 子显微镜观察 ， 生物化学的 d n a凝胶电泳法， 流式细 基金项 目： 陈可冀中西医结合发展基金( c k j 2 0 0 7 0 0 5 ) 作者单位 ： 3 5 0 1 0 8福州 ， 福建 中医药大学 ， 福建中西 医结合研究 院电镜实验中心 ， 国家中医药三级科研实验室 中药药理 ( 细胞结构 与功 能) 实验室 ( 李钻芳 ， 陈文列) ； 3 5 0 0 0 7福建师范大学， 教育部医学光电科学与技术重点实验室 ( 陈荣 ) 作者 简介 ： 李钻芳 ( 1 9 8 4 一) ， 研究实习员， 生物 医学光学硕士。研究方 向： 中西医结合 基础 ( 激光 扫描共聚焦显微 术 ) 。e m a i l ： l i z u a n f a n g 1 6 3 c o b 通讯作者 ： 陈文列( 1 9 5 9 - )， 研究员 ， 硕士生导师 ， 国家 中医药三级科研实验室一中药药理 ( 细胞结构与功能) 实验室主任 ， 中国电镜学会理 事与医学电镜专委会委员、 福建电镜学会理事长。研究方向： 中西医结合基础 、 中药细胞药理与毒理 。 e m a i l ： c h e n w l 1 6 3 c o m 环球 中医药 2 0 1 1 年 1月第 4卷第 1期g l o b a l t r a d i t i o n a l c h i n e s e me d i c i n e ， j a n u a r y 2 0 1 1 ， v 0 j 4 ，n 0 j 1 71 胞术等方法， 但各 自都有一定的局限性， 如 电镜观察 制样程序费时、 不易定量， 流式细胞术检测 的是群体 细胞或某一类细胞的各凋亡指标， 无法对单个细胞进 行定位分析， 无法确定凋亡位点。而激光扫描共聚焦 显微术 ， 通过结合各种特异性荧光探针， 不仅能实现 核酸、 蛋白质、 抗体 、 受体等大分子的定位、 定性、 定时 及定量检测 ， 还能从分子水平检测到单细胞在活性状 态下的各指标信号 ， 在观察细胞形态、 检测凋亡进程 及测定活细胞凋亡过程 中钙离子 、 线粒体膜 电位 、 活 性氧 自由基变化等方面得到广泛应用。 2 l s c m在中药与天然药诱导肿瘤细胞凋亡研究中 的应用 2 1 观察细胞核变化与凋亡小体 经特异性的 d n a、 r n a荧光探针( 如吖啶橙 a o、 碘化丙啶 p i ) 或 d n a荧光探针( 如 h o e c h s t 3 3 2 5 8 、 h o 。 e c h s t 3 3 3 4 2 、 d a p i ) 等标记后 的细胞 ， 用 i s c m能获得 其细胞核 清晰 的图像 ， 能直 观地显示 细胞 受损 后 d n a和 r n a的变化 ， 在凋亡细胞 的 l s c m图像上可 见细胞核染色质浓缩、 d n a凝结而成的凋亡小体等 ； 而 a o或 p i 还可显 出细胞轮廓、 凋亡细胞 出芽等。 不同于电镜下观察 ， l s c m能够在保持细胞活性及完 整性的前提下 ， 对细胞进行观察和测量， 其图像质量 好、 分辨率高 ， 可以实现多重荧光信号共同观察 ， 甚至 可以获得细胞三维重建图像。此外 ， 通过结合显示凋 亡早期细胞膜变化的灵敏指标 a n n e x i n v， 可准确定 位与定量观察细胞膜与细胞核的凋亡位点。 王学习 j 、 季宇彬 、 高世勇 、 周炳 刚 等 分别应用 l s c m结合 a o荧光探针单标法或 a o e b 双染法 ， 研究扶正抑瘤颗粒含药血清 、 龙葵碱、 甘草 黄酮、 苦参碱对荷瘤小 鼠 h： ： 肝癌细胞及 s 1 8 o 肿瘤细 胞或肝癌细胞 h e p g 2 、 人乳腺 癌 mc f - 7 a d r细胞 的 d n a 、 r n a含量或细胞核的变化 ， 以及三维 d n a 荧光强度分布 ， 结果 表明这些 中药 、 天然药及其 提取物可破坏肿瘤细胞核酸 ， 降低 d n a r n a比值 ， 抑制核酸复制与合成而抑制细胞 的生长 ， 甚至出现 凋亡小体等典型的凋亡形态学特征。 韩健等 、 焦鹏等 用 i _ 5 c m结合 a n n e x i n v f i t c或 a n n e x i n v p i 双染法 ， 观察临床抗癌中药冬 凌草 甲素、 白花丹参根制剂对人 胃癌细胞 b g c 一 8 2 3 的抑制增殖或诱 导凋亡 的作用。杨洋等 观察 p i 荧光标记细胞核变化 ， 研究槲皮素联合顺铂对宫颈 癌 h e l a细胞增殖及凋亡影响 ， 结果见细胞核收缩 、 凝集、 碎裂等凋亡现象。周欣 阳等_ 9 应 用 f i t c荧 光素标记天花粉蛋 白( t c s ) ， 在 l s c m下直接观察 t c s进入黑色素瘤 b 1 6细胞动态过程 ， 发现 t c s能 抑制黑色素瘤细胞活性 、 抑制分裂增殖 ， 且诱 导细 胞凋亡 ， 出现凋亡小体 。 柯文娟 等 利 用 l s c m结 合 h o e c h s t 3 3 2 5 8染 色， 研究甘草次酸对髓系白血病细胞系 k 5 6 2的抗癌 机制 ， 观察到甘草次酸能诱导细胞凋亡、 产生凋亡小 体而抑制其增殖。张春阳等_ l 、 周欣阳_ 9 应用 l s c m 包括双光子激发激光扫描显微术结合 h o e c h s t 3 3 2 5 8 染色， 观察到 t c s作用人绒癌细胞( j a r) 、 h 肝癌细 胞后， 核染色质浓缩 ， 出现凋亡小体等。 2 2 观测细胞 内 c a “浓度 。 细胞质 中游离的 c a 作为第二信使在凋亡信 号传递过程中起关键作用 ， 细胞核 内 c a 浓度的持 续升高是导致细胞凋亡的主要原因。在 l c s m出现 之前 ， 对 c a “的研究大都是通过死细胞进行的 ， 无 法对细胞 内的 c a 信 号进行动态观测 ， 而 c a 的 动态变化是反映细胞生理过程及生理变化的重要 信息。结合特异性 c a 荧光探针 f l u o 一 3 a m、 r h o d 一 1 、 i n d o 一 1 、 f u r a 一 2等 ， l s c m 不仅能够精确测 定其浓 度 ， 还可以在亚细胞水平上对细胞内外 c a 的活动 进行精确的时间和空间上分布， 提供其动态变化的 图像 ， 实时观测药物作用下细胞 内外 c a 浓度 的变 化， 从而判断药物的抗癌活性 、 治疗效果等。 季宇彬等n 、 邹翔等 引、 朱丽丽等 h 、 孙 纪元 等 、 高世 勇 等 、 张 长城 等 刮应 用 l s c m 结合 f l u o 一 3 a m探针分别观察 中西药复方抗癌制剂海嘧 啶、 西兰花中的抗癌活性成分葡萄糖异硫氰酸盐 c s 、 重楼皂苷、 苦马豆素、 龙葵碱、 青蒿琥酯等对人 胃腺癌 s g c - 7 9 0 1细胞 、 人前列腺癌 p c 一 3细胞增殖的抑制作 用 ， 及经各 中药、 天然药处理的细胞内 c a n浓度的动 态变化， 表明上述 中药、 天然药均能升高 c a 浓度 ， 影响细胞周期， 其凋亡作用机制与细胞 内钙超载有 关 ， 而海嘧啶则可通过开放细胞膜钙通道和引起细胞 内钙释放两条途径诱导肿瘤细胞凋亡。 2 3 观测线粒体膜电位变化 细胞线粒体膜电位( mm p ) 是细胞能量产生的先 决条件， 其变化是细胞凋亡的一个早期特征， 是细胞 凋亡不可逆转的标志。在细胞凋亡过程中， 细胞膜双 分子层中的磷脂不平衡分布会被破坏， 发生磷脂外酰 丝氨酸由内层向外层的翻转 ， 暴露在外面的磷脂酰丝 氨酸可以被周围的吞噬细胞识别 、 吞噬 ， 从而使凋亡 7 2 环球 中医药 2 0 1 1 年 1月第 4卷第 1期g l o b a l t r a d i t i o n a l c h i n e s e me d i c i n e ， j a n u a r y 2 0 1 1 ， v o 1 4 ，n o 1 的细胞得 以被清除 。在各种药物刺激 下， 通过 l s c m测量线粒体特异性探针 j c 一 1 、 r h o d a m i n e 1 2 3 、 a n n e x i n v、 t m r e等的荧光强度变化 ， 就能反应 m mp 的变化及线粒体功能状态 ， 不仅可以定量分析， 还可 对其进行实时动态扫描 ， 获得药物刺激下 mm p瞬时 动态变化， 及时反应药物对细胞凋亡的影响。 代志 军 等 、 王 学 习 等 1 、 高 世 勇 等 用 l s c m结合 r h o d a m i n e 1 2 3或 t mr e荧 光探针研究 中药半枝莲提取物( e s b )含药血清、 糙 叶败酱提取 物、 龙葵碱分别作用于肝癌 h e p g 2、 h ： 细胞及 s 。 细胞后 mm p的变化， 结果均显示各中药或天然药 均可不同程度降低 mm p， 诱导肿瘤细胞凋亡。 2 4 观测活性氧自由基含量 活性氧 自由基 ( r o s ) 是诱导细胞 凋亡 和影响 细胞衰老的主要因素之一， 正常情况下， 它的产生 和消除处于平衡状态， 过量的 r o s会引起细胞内核 酸、 蛋白质等生物 大分子损伤 ， 引起蛋 白质 氧化， d n a链断裂 ， 细胞膜起泡、 脂质氧化等细胞凋亡特 征， 从而引发炎症、 癌症等疾病。结合特异性荧光 探针如 d c f h d a， 利用荧光强度与活性氧浓度的线 性关系， 通过 l s c m就能灵敏高效地检测到细胞 内 r o s含量的变化。 王学习等 | 】 利用 l s c m结合 d 3 9 9探针观察 扶正抑瘤 颗粒 含药血清、 糙叶败酱提取物作用于 s 1 8 0细胞后 r o s的变化 ， 结果显示提取物持续作 用细胞 4 8小时后 ， 高剂量组细胞 r o s增加 ， 可能使 d n a链断裂， 导致细胞凋亡。 2 5 观测细胞凋亡相关基因表达 细胞凋亡的调控涉及许多基因， 包括一些与细 胞增殖有关 的原癌基因和抑癌基因。其中研究较 多的 有 b c l - 2基 因家 族 、 c a s p a s e家 族 等。采 用 l s c m结合荧光抗体技术观察相关基因表达 ， 不仅 可定位细胞内各相关基 因表达位点 ， 还可同时定量 每个细胞 的荧光强度 ， 间接反映 目标蛋 白含量， 以 检测药物对 各基 因表 达的影 响。 季宇彬等 u采用 l s c m结合 f i t c染色 ， 进 行肝癌 h e p g 2细胞内 c a s p a s e 一 3及 b c l - 2的定位 ， 并 显示龙葵碱能显著升高细胞内 c a s p a s e 一 3含量 ， 降 低 b c l - 2含量， 诱导细胞凋亡。 邓刚等 用 l s c m结合免疫荧光细胞化学 ， 研 究姜黄素对前列腺癌 p c 3细胞 n o t c h l 蛋 白表达和 亚细胞定位 ， 显示 n o t c h 1 定位于胞膜 、 胞质 ， 且胞核 表达增加 ， 呈浓度依赖性 ， 表明姜黄素诱导凋亡可 能与 n o t c h 1表达和核易位激活有关。 李祺福等 用 i s c m结合免疫荧光抗体 ， 分 别观察到人参皂甙 r g l 、 肉桂酸、 丹参酮组合( r c t) 诱导人成 骨 肉瘤 m g - 6 3细胞 分化过程 中， n u c l e o - p h o s m i n ( n p m) 及 p r o h i b i t i n在 m g 一 6 3细 胞 中， 与 c f o s 、 c m y c 、 r b、 p 5 3等基因产物具有共定位关系， 并 在 r c t处理后细胞核内其共定位区域发生了变化。 2 6 观测细胞 通讯 某些细胞癌变时， 缝隙连接会减少甚至消失， 丧 失细胞间通讯能力， 阻碍细胞间传递控制正常生长的 有关信息， 这提示肿瘤细胞的快速分裂 、 增殖和转移， 与缝隙连接的消失有关。通过测量细胞缝隙连接分 子的转移， 可以研究肿瘤启动因子和生长因子对缝隙 连接介导的胞间通讯的抑制作用。i s c m可采用荧 光光漂白恢复( f r a p ) 技术检测细胞缝隙连接， 通过 观察已发生荧光漂白细胞其荧光恢复过程的变化量， 来判断细胞缝隙连接的通讯功能。 王学习等 应用 l s c m结合 c f d a a m荧光探 针 ， 按 f r a p分析程序 ， 测定荷瘤小 鼠 h： ： 细胞 问通 讯状况， 结果显示不同剂量组扶正抑瘤颗粒含药血 清作用于 h 2 ： 细胞 ， 细胞 问荧光恢复速率 即细胞 问 通讯状况均有不同程度的提高。 2 7 其它 l s c m不仅能够对所测对 象进行实 时显微成 像 ， 还能检测样品的 自发荧光光谱或新荧光探针 的 发射光谱 ， 以及在标记过程中造成的荧光探针光谱 转移等。利用此光谱扫描功能， 可以进一步确定抗 肿瘤药物在肿瘤细胞内的分布情况及作用机制。 陈同生等 采用 l s c m成像及荧光共振能量 转移(f r e t ) 技术 ， 通过检测细胞形态及活细胞中 s c a t 3质粒的荧光光谱， 分别研究中药蟾酥、 消癌平 诱导人肺腺癌( a s t c a 1 ) 细胞凋亡过程中 c a s p a s e 一 3 的活化特性 ， 结果表明蟾酥能诱导癌细胞凋亡， 出现 凋亡小体 ， 且 c a s p a s e 3参与调控蟾酥诱导 的细胞凋 亡过程， 消癌平有效抑制细胞的增殖活性 ， 并于作用 7 2小时时诱导细胞 内 c a s p a s e - 3的活化 。 3展望 随着激光扫描共聚焦显微镜技术的普及 ， 有关中 药抗肿瘤作用机制的研究 日渐增多 ， 检测手段也 日益 先进。在观察细胞凋亡时细胞形态变化、 测定细胞内 钙离子浓度、 活性氧 自由基、 细胞膜电位等信号的变 化以及 d n a r n a 、 基因蛋 白表达、 细胞周期等研究 环球中医药 2 0 1 1年 1月第 4卷第 1 期g l o b a l t r a d i t i o n a l c h i n e s e me d i c i n e ， j a n u a r y 2 0 1 1 ， vo 1 4 ，n o 1 中， 激光扫描共聚焦显微技术显示 出很强的优越性。 它不仅可以动态观察药物在细胞中的分布及其干预 细胞的变化情况 ， 还可以通过观察不同时问段药物与 靶点的结合情况 ， 了解其在细胞 内代谢过程 ， 以判断 服药的最佳时间， 以进一步提高药效。 根据现代药理学研究 ， 抗肿瘤中药主要有两大 类 ， 一类是细胞毒药物 ， 一类是具有免疫增强作用 、 生物反应调节剂样 作用的药物。中药抗肿瘤具 有 多靶点 、 多效应 、 不 良反应 小、 不 易产 生耐药性、 安 全有效等优点 。研究表明， 中药是通过多个环节 起到抑制恶性肿瘤的作用 ， 目前 l s c m技术在抗 肿瘤药物作用机制研究 中， 大部分仅局 限于诱导 细 胞凋亡研究 ， 对 中药活性物质在体内变化及作用特 点 、 细胞毒作用 、 增强机体免疫功能 、 分子水平上抗 肿瘤血管生成 、 抑制 多药耐药 、 抑制肿瘤细胞侵袭 转移等机制研究中还 比较少 。中药现代化过程 中， 随着各学科问的发展和相互渗透 ， 激光扫描共聚焦 显微技术有着广 阔的应用前景， 特别是在中药抗肿 瘤作用机理的基 础研究 以及抗肿瘤新药药效研究 上 ， 将发挥越来越重要的作用。 2 3 4 5 6 7 8 9 1 o 参考文献 王学习 ， 赵健 雄 ， 陈茹 ，等 荷瘤小 鼠扶正 抑瘤颗粒 含药 血 清对 h 2 细胞的 凋亡 、 自由基 含 量和 线粒 体膜 电位 的影 响 j 中国 中西医结合 杂志 ， 2 0 0 7 ， 2 7 ( 4) ： 3 4 3 - 3 4 6 季宇彬 ， 王宏亮 ， 高世勇 龙葵碱对荷瘤小鼠肿瘤细胞 d n a 和 r n a的影响 j 中草药 ， 2 0 0 5， 3 6 ( 8 ) ： 1 2 0 0 1 2 0 2 季宇彬 ， 姜薇 ，尚明，等 甘草 黄酮对 s 和 h2 2 荷 瘤小 鼠 肿瘤细胞 d na和 r n a的影响 j 中草 药 ， 2 0 0 5， 3 6 ( 1 0 ) ： l 51 8 一 l 5 2 0 g a o s y， wa n g q j ， j i yb e f f e c t o f s o l a n i n e o n t h e me mb r a n e p o t e n t i a l 0 f m i to c h o n d r i a i n h e p g 2 c e l l s a n d c a 2 i i n t h e c e l l s j 1 wo r l d j g a s t r o e n t e r o l ， 2 0 0 6， 1 2 ( 2 1 ) ： 3 3 5 9 - 3 3 6 7 周炳刚 ， 孙靖中 ， 苏 刚， 等 苦参碱诱 导人乳腺癌细胞 mc f 一 7 a d r的 凋亡 研 究 中华 实验 外 科 杂 志，2 0 0 3 ，2 0( 6 ) ： 5 1 5 5 l 6 h a n j ，y e m，qi a o x e t a 1 i n d u c t i o n o f a p o p t o s i s a n d g 2 m c e l l c y c l e a r r e s t b y o r i d o n i n i n h u ma n g a s t ri c c a n c e r bgc一 8 2 3 c e l l s j 1 j c h i n e s e p h a r ma c e u t i c al s c i e n c e s 2 0 0 7， 1 6( 4) ： 3 0 7 3 1 4 焦鹏 ， 常起 ， 杨 明峰 ， 等 白花丹参根制剂对 胃癌细胞增殖和 凋亡的影 响 j 世界华人消化杂志 ， 2 0 0 7， 1 5 ( 8 ) ： 8 2 0 2 3 杨洋 ，张蔚 ， 黄丽琼 ，等 槲皮 素联合顺 铂对宫 颈癌 h e l a 细胞增 殖及 凋 亡 的 影 响 j 武 汉 大 学学 报 ( 医 学 版 ) ， 2 0 0 9 ， 3 0 ( 3 ) ： 3 3 4 - 3 3 6 周欣 阳，张天一 ， 顾君一 异硫氰酸荧 光素标记动态观察天 花粉蛋 白对黑色素瘤 b 1 6细胞 的损伤 j 中国组织 工程研 究与临床康复 ， 2 0 0 7 ， 1 1 ( 2 9 ) ： 5 7 9 2 - 5 7 9 6 柯 文娟 ，刘新月 ， 陈燕 ，等 甘草次 酸对 k 5 6 2细胞 增殖抑 制作用及其机制研究 j 中草药 ， 2 0 0 8， 3 9 ( 5 ) ： 7 1 4 - 7 1 7 1 2 1 3 1 4 1 5 1 6 1 7 1 8 1 9 2 0 2 1 2 2 2 3 2 4 2 5 2 6 2 7 2 8 2 9 7 3 张春阳 ， 贡宜萱 ，马辉 ，等 双光子及共聚焦激光扫描显微 术研究 天花粉蛋 白对人绒癌细胞的作 用机制 j 生物化学 与生物物理进展 ， 2 0 0 1 ， 2 8 ( 5 ) ： 7 1 7 - 7 2 1 季宇彬 ， 高世勇 海嘧啶体 内外抗肿 瘤作用研究 j 中国 药学杂志，2 0 0 5， 4 0 ( 2 3 ) ： 1 7 8 8 1 7 9 3 邹翔 ， 郎朗 ， 武 晓丹 ，等 西兰花 中葡萄糖异硫 氰酸盐诱导 人胃腺癌 s g c - 7 9 0 1细 胞 凋 亡 的初 步 研究 j 中草 药 2 0 0 7 ， 3 8 ( 2 ) ： 2 2 8 3 1 朱丽丽 ，李惠芬 重楼皂苷对 s g c - 7 9 0 1 细胞增 殖抑制及诱 导凋亡 的实 验 研 究 j 时 珍 国 医 国药 ，2 0 0 9， 2 0( 6) ： 1 5 0 1 1 5 0 2 s u n j y，wa n g s w ，zh u mz re s e a r c h o f me c h an i s ms o f s wa i n s o n i n e i n d u c e d a p o p t o s i s in h u ma n g a s t r i c c a r c i n o ma c e l l l i n e s g c - 7 9 0 1 j c h i n j c l i n p h a r m a c o l t h e r ，2 0 0 5，1 0 ( 9)：9 7 8 - 9 8 3 张长城 ，张小鹏 青蒿琥酯对人前列腺癌 p c - 3细胞 内游 离 c a “ 的影响 j 中国药房 ， 2 0 0 9 ， 2 0 ( 6 ) ： 1 4 8 - 4 1 9 杨军 军 ，高申孟 ，陈慧 苦参碱诱 导多发性 骨髓瘤细胞株 r p mi 8 2 2 6凋亡 的 实 验研 究 j 中 国实 验 血 液 学 杂 志 ， 2 0 0 7，1 5 ( 3 )： 5 1 5 - 5 1 8 代志军 ，王西京 ，薛茜 ，等 半枝莲含 药血清对肝癌 h 2 2 细 胞凋亡及线粒 体膜 电位 的影响 j 中西医结合学报 ， 2 0 0 8 ， 6( 8 ) ： 8 2 1 - 8 2 6 白德成 ， 王学习 ， 赵健雄 ，等 糙 叶败酱提取 物抗肿瘤作用