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文档简介

鸡红细胞的融合 实验报告 * 实验原理 主要内容 实验目的 实验用品 需要注意的问题 1 2 3 4实验步骤 5 6 7 数据记录及处理 结果分析及讨论 绘图 * 一、实验目的 （1）了解PEG诱导细胞融合的基本原理 （2）通过细胞融合实验，初步掌握细胞融合技 术 * 二、实验用品 （1）器材：生物显微镜、离心机、恒温水浴 箱、滴管、离心管、试管架、盖玻片、载 玻片、烧杯、吸水纸 （2）试剂：0.85%生理盐水、50%PEG、 GKN溶液、Alsever溶液 （3）实验材料：鸡红细胞 * 三、实验原理 同种或异种细胞在一定介质（如病毒、化学因子或电 场）的诱导下，可发生细胞间的的融合，形成较大的 双核或多核细胞。聚乙二醇（PEG)可与水分子借氢键 结合，在高浓度（50%）的PEG的溶液中，自由水消 失，导致细胞脱水而发生质膜结构的变化，引起细胞 融合，PEG融合技术的关键是要选择合适的相对分子 质量（10006000）、浓度（30%50%）以及作用 时间。 click * 四、实验步骤 （1）鸡血与Alsever溶液按1:4混匀，4冰箱中 保存 （2）取1ml细胞悬液，加Alsever溶液稀释2025 倍 （3）取上稀释悬液1ml，加5ml0.85%生理盐水混 匀 * （4）1000rpm离心上述溶液5min，去上清液，重 复操作3次 （5）第三次离心去上清液后，加GKN 0.5ml 制成10%悬液，放在37水浴箱预热23min （6）逐滴0.25ml的50%的PEG溶液，边加边 摇匀，37恒温静置15min （7）取上述液一滴，盖上盖玻片，镜检 * 五、数据记录及处理 观察四个视野中的细胞，记录鸡血细胞融合情况如下表所 示 视野细胞核 总数 视野内融合 细胞核数 2核细胞3核细胞所有细胞核 总数 所有融合细 胞核总数 130420 10512 226301 328210 431301 * 2、数据处理：由上表原始数据得视野内发生融合的 细胞核数为12个，视野内所有细胞核总数为105 个，由公式： 融合率=视野内发生融合的细胞核数/视野内所有细 胞核数 100% =12/105 100% =11.4% 3、实验结果：鸡红细胞的融合率为11.4% w
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