丹参的多糖种类研究.docx

分类 药植与鉴定 年级（专业） 2009级药学（专） 成 都 中 医 药 大 学药学院专科毕业专题论文 姓 名： 赵旭亮 学 号： 200930310039 论 文 题 目： 丹参的多糖研究 指 导 教 师： 严铸云 职 称： 教授 实 习 单 位： 成都中医药大学 论文提交时间： 2012 年 05 月 成都中医药大学药学院2012 年 05 月成都中医药大学药学院2012年6月目录摘 要.0 1前 言.0 2实验设计0 2 1.实验原理0 2 2.实验材料0 2 3.实验方法0 3实验内容0 3 1.样品制备.0 3 2.制备活性炭柱.0 3 3.上样洗脱.0 4 4.纸层析检测.0 4实验结果及结论.0 5实验讨论0 5参考文献0 6丹参的多糖研究实验员：赵旭亮 指导教师：严铸云摘要目的：研究丹参多糖的种类，以便于分析丹参的药理作用。方法：通过对丹参药材的煎煮得到丹参药液，对药液进行醇沉除去里面的鞣质和其他杂质。再对药液进行浓缩，浓缩至浸膏状，加入甲醇使其溶解，取出部分用蒸馏水进行稀释并上样。（事先做好的活性炭柱子）用不同浓度的乙醇进行梯度浓度洗脱，最后进行纸层析检测。结果：丹参中含有多种多糖成分，在纸层析检测中可看到两处浅黄色的带和多层次分布的不同色泽的带谱，根据纸层析检测的原理可知，不同带谱代表不同的多糖，纸层上呈现出八条不同的带谱。结论：丹参中含有多种多糖成分，关键词:丹参 多糖前言多糖是中药中一类天然高分子化合物,是维持生命正常运转的基本物质之一，具有调节免疫功能，抗氧化以及抗衰老等作用，具有巨大的开发潜力。丹参（Salvia miltiorrhiza Bunge）为唇形科鼠尾草属植物，以其根及根茎入药，为我国传统的名贵中药材。国内主要分布在河北，山西，陕西，山东，河南，江苏，浙江，安徽，江西及湖南等地；生于山坡、林下草丛或溪谷旁，海拔1201300米。本论文通过该实验进一步了解丹参的多糖成分，以便于更好的分析丹参的药理作用。实验方法为纸层析检测法。预期目标：通过此实验得到丹参多糖的种类。实验设计1. 实验原理1.1中药材通过煎煮一些成分可进入煎煮液中形成药液。1.2药液中的一些物质可与乙醇作用形成沉淀，称为醇沉。1.3活性炭具有较强的吸附作用。可吸附药液中的一些成分。1.4用乙醇的梯度浓度洗脱可得到不同的丹参多糖成分。1.5纸层析法又称纸色谱法。以纸为载体的色谱法。固定相一般为纸纤维上吸附的水分，流动相为不与水相溶的有机溶剂；也可使纸吸留其他物质作为固定相，如缓冲液，甲酰胺等。将试样点在纸条的一端，然后在密闭的槽中用适宜溶剂进行展开。当组分移动一定距离后，各组分移动距离不同，最后形成互相分离的斑点。将纸取出，待溶剂挥发后，用显色剂或其他适宜方法确定斑点位置。根据组分移动距离（Rf值）与已知样比较，进行定性。纸层析检测法可得到丹参多糖各成分的含量情况。 2.实验材料丹参药材，蒸馏水，活性炭，盐酸，乙醇，甲醇，四氯化碳，电子天平，电磁炉，磁盆，烧杯，烧瓶，玻璃棒，水浴锅，试管，减压抽滤机，5号药筛，研钵，胶头滴管，量筒，三角漏斗，棉花，滤纸，铁架台，试管夹，装柱管。滤纸纤维。毛细吸管等。3.实验方法通过对丹参药材的煎煮得到丹参药液，对药液进行醇沉除去里面的鞣质和其他杂质。过滤得到滤液，再对药液进行浓缩，浓缩至浸膏状，加入甲醇溶液使其溶解，取出部分药物浸膏用蒸馏水进行稀释并上样。（事先做好的活性炭柱子，按要求将活性炭进行处理，使其符合实验标准，再将其洗至中性。）用不同浓度的乙醇进行梯度浓度洗脱，得到相应的洗脱液，最后对洗脱液进行纸层析检测。实验内容1.样品制备1.1称取丹参药材10千克，置于磁盆中加蒸馏水煎煮三次，每次加水30升，第一次煎煮时间为药液沸腾后再煎煮三十分，第二，三次煎煮时间为药液沸腾后再煎煮十五分钟。滤出药液，并将三次煎煮得到的药液混合后存于容器中备用。 1.2将得到的药液放入盆中，置于电磁炉上进行加热浓缩，期间用玻璃棒进行搅拌，将药液浓缩至3升，冷却备用。 1.3向冷却后的浓缩药液按比例1：1加入95%的乙醇3升，进行醇沉，并将其放置二十四小时备用。 1.4对经过醇沉处理的药液进行减压抽滤，在事先准备好的滤纸上铺上一层薄薄的硅胶粉，将药液进行减压抽滤。（由于经乙醇处理后的药液沉淀较多，故需要不断的更换滤纸，以便于药液能顺利通过）将得到的滤液密封备用。1.5将滤液置于烧瓶中放入水浴锅中进行减压浓缩，水浴温度为5565度，回收乙醇，并将滤液浓缩至流浸膏状，用甲醇清洗出烧瓶，放入小烧杯中，用保鲜膜密封，备用。 2.制备活性炭柱2.1酸煮；用电子天平称取活性炭三百克置于大烧杯中，另用量筒量取900毫升的蒸馏水和300毫升10摩尔/升的盐酸，混合加入烧杯中，将烧杯置于电磁炉上加热，进行酸煮，酸煮三次，每次30分钟。冷却后向烧杯中加入蒸馏水洗至中性备用。2.2将烧杯中的活性炭过滤，将活性炭置于盘中，放入恒温箱，进行烘干处理，时间为12小时，温度为85度。2.3将恒温箱中的活性炭取出，用石研钵将活性炭研细，将经研细的活性炭粉过五号药筛。再将活性炭细粉放入恒温箱烘干备用。2.4安装洗脱装置：取一根适当的柱管，加入少量蒸馏水检漏，看柱管是否是好的，检漏后向柱管理放入少量棉花，置于柱管底部，并将柱管固定于事先准备好的铁架台上，调至与水平地面垂直。2.5装柱：湿法 将活性炭与蒸馏水混合，搅拌除去空气泡，徐徐倾入色谱柱中，然后加入蒸馏水将附着管壁的吸活性炭洗下，使色谱柱面平整。 等到填装活性炭所用蒸馏水从色谱柱自然流下，液面和柱表面相平时，即可。 3.上样洗脱3.1上样：取50毫升事先制备好的样品，加入50毫升蒸馏水使其溶解稀释，将稀释药液用胶头滴管沿色谱柱管壁缓缓加入。直至加完。3.2制备洗脱剂（1）配制不同浓度的乙醇液，用95%的乙醇的作为母液，用蒸馏水分别配制5%，10%，15%，25%，50%，75%，95%的乙醇液各50毫升，备用。（2）用量筒量取50毫升蒸馏水备用。3.3洗脱：（1）用50毫升蒸馏水进行洗脱，用小烧瓶在色谱柱下方接取洗脱液1.（2）用50毫升5%的乙醇进行洗脱，用小烧瓶在色谱柱下方接取洗脱液2.（3）用50毫升10%的乙醇进行洗脱，用小烧瓶在色谱柱下方接取洗脱液3.（4）用50毫升15%的乙醇进行洗脱，用小烧瓶在色谱柱下方接取洗脱液4.（5）用50毫升25%乙醇进行洗脱，用小烧瓶在色谱柱下方接取洗脱液5.（6）用50毫升50%的乙醇进行洗脱，用小烧瓶在色谱柱下方接取洗脱液6.（7）用50毫升75%的乙醇进行洗脱，用小烧瓶在色谱柱下方接取洗脱液7.（8）用50毫升95%的乙醇进行洗脱，用小烧瓶在色谱柱下方接取洗脱液8.将各洗脱液密封保存备用。 4.纸层析检测4.1取准备好的滤纸条（220cm），将其一端剪去两侧，中间留一长约1.5cm，宽约0.5cm的窄条，并在滤纸剪口上方折叠出一条直线，作为画滤液细线的基准线。4.2将丹参各洗脱液试样点在纸条的一端，然后在密闭的槽中用适宜溶剂进行展开。一段时间后，当组分移动一定距离后，各组分移动距离不同，最后形成互相分离的斑点。将纸取出，待溶剂挥发后，用显色剂或其他适宜方法确定斑点位置。根据组分移动距离（Rf值）与已知样比较，进行定性。 4.3分析并得出实验结果。实验结果及结论1.结果通过上述实验，得到实验结果如下丹参中含有多种多糖成分，在纸层析检测中可看到两处浅黄色的带和多层次分布的不同色泽的带谱，根据纸层析检测的原理可知，不同带谱代表不同的多糖，纸层上呈现出八条不同的带谱。 2.结论丹参中存在多种多糖成分。各类成分还需进一步实验测试才能得出准确的数据。 实验讨论1.1.丹参多糖的药理作用。（1）.抗肿瘤作用：丹参多糖通过增强机体免疫能力，可以与手术，放疗及化疗药物配合使用，从而更有效的预防和治疗癌症，此外在抗肿瘤方面，丹参多糖还可通过直接抑制肿瘤细胞的生长，抑制肿瘤细胞的蛋白质和核酸的合成，诱导肿瘤成本凋亡，影响基因表达，改变肿瘤细胞膜的生物特性等作用起到抗肿瘤的作用。（2）.免疫调节作用，丹参多糖可通过增加免疫细胞活性，诱导激活细胞因子的分泌，增加抗体的生成，激活补体系统等作用起到免疫田杰作用。此外丹参多糖还具有抗衰老作用，抗病毒作用，降血糖作用，降血脂作用，抗凝血作用等。1.2.纸层析检测丹参多糖的好处。纸层析法的最大特点是分离效率高，它能分离各种性质极相类似的物质。而且它既可以用于少量物质的分析鉴定，又可用于大量物质的分离纯化制备。此外纸层析法操作简单，实验仪器便宜等优点。1.3.纸层析法的注意事项：纸层析法中所用的有机溶剂如丙酮等，一般有挥发性、并有一定毒性，使用时要注意密封层析，避免吸入过多有害挥发物。1.4.实验心得，在学校实验室里的这段时间，通过做实验，我学到了很多，也领悟了很多做事的原则，比如 做实验必须一步一步的做，有很强的逻辑性。生活中做任何事都是一样，需要遵循一定的原则，需要有一定的章程，不能朝三暮四。做任何事不能一步到位，要有耐心，遇到困难很正常，只要以积极的心态去面对，再大的困难也会得到解决。参考文献1刘斌，倪键等中药有效部位及成分提取工艺和检测方法，北京，中国中医药出版社，2007；111-1172罗集鹏等，生药学，北京，中国医药科技出版社，2006，178-1823肖培根，杨世林，宋经元等，药用动植物种养加工技术丹参