农药残留速测卡蔬菜、水果中农药残留速测技术.doc

蔬菜、水果中农药残留速测技术 果蔬农残速测卡 果蔬农残检测卡 农药残留速测卡对蔬菜、水果中农药残留速测技术的发展具有重要意义。一、蔬菜、水果中农药残留速测原理及特点（一）蔬菜、水果中用于快速检测的农药有两类一是有机磷类农药，有甲拌磷（3911）、对硫磷（1605）、甲胺磷等；二是氨基甲酸脂类农药，有呋喃丹、抗蚜威、西维因等。有机磷类农药和氨基甲酸脂类农药在我国使用比较广泛，这类农药中有不少为高残留、高毒农药。有机磷和氨基甲酸酯类农药的快速检测方法，不受时间、地点、场合等条件限制，甚至普通消费者也能够操作使用，有利于及时发现问题、采取措施，控制高残留农药蔬菜的摄入，降低农药中毒发生率，保障消费者食菜安全。（二）蔬菜、水果中农药残留速测原理有机磷和氨基甲酸酯类农药残留可以和人体内神经传导物质胆碱脂酶相结合，即抑制酶的生理活性，引起神经传导过程受到阻碍，出现中毒症状，轻则引起慢性头疼、记忆力减退等症状，重则导致呼吸困难，甚至死亡。蔬菜中农药残留快速检测是基于“在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度呈正相关”这一原理，提取制备了胆碱脂酶作为检测试剂，根据酶的活性变化程度来测定蔬菜中残留的农药。正常情况下，胆碱酯酶（酶）催化乙酰胆碱（底物）水解，其水解产物（胆碱）与显色剂反应，产生黄色物质，用分光光度计在412nm处测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率，通过抑制率可以判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。基本的化学反应式：酶(胆碱酯酶）+ 底物（乙酰胆碱） 中间产物（胆碱）中间产物（胆碱）+显色试剂 黄色物质基本检验机理抑制率50%，没有或少部分活性被抑制，合格显色剂溶液呈黄色大量中间产物显色剂抑制率50%，大部分活性部分被抑制，不合格酶+样本+底物溶液呈淡黄色少量中间产物显色剂抑制率100%，无活性或严重超标，不合格溶液呈无色无中间产物抑制率的概念抑制率指的是农药对酶抑制程度的指标。其计算公式为： I=（A0 - At）/ A0*100% I 为抑制率 A0为3分钟对照溶液吸光度的变化 At为3分钟样品溶液吸光度的变化二、速测仪检测原理、结构前面介绍过，农药残留速测是在412nm处测定反应产物吸光度随时间的变化值，因此农残速测仪即是分光光度计的一种新的形式。（一）农残速测仪基本原理光源发出的光经过单色器时被变成平行的单色光，当单色光通过均匀的溶液时，光的一部分被溶液吸收，在吸收层厚度（比色皿）一定时，光的吸收于溶液的浓度成正比。仪器检测器将光的变化信号转化为电信号变化，经过仪器测量系统处理，检测结果显示在屏幕上。（二）农残速测仪结构可见吸光光度计是利用物质本身对可见光的选择性吸收进行测定的。分光光度计的基本部件有：光源、单色器、吸收池（比色皿）、检测器和显示装置 。吸收池单色器光源检测器测量装置A、光源 分光光度计常用钨灯作为光源，波长为320-2500nm。B、单色器 单色器是将光源发射的复合光分解为单色光的光学装置。C、吸收池 也叫比色皿，是盛放样品溶液的容器，一般为1厘米厚。 D、检测器 是一种光电转换设备，它将光强度转变为电信号显示出来。E、测量系统 包括放大器和结果显示装置，它可以将结果进行处理，并显示在屏幕上，或者打印出来。三、速测仪的使用方法及注意事项（一）试剂的配制1、提取液：将提取液粉剂置于500ml瓶中,加入510 ml蒸馏水摇匀溶解备用。可在常温下保存。2、酶液：每瓶酶粉剂加入3.1 ml提取液，摇匀后 4冰箱中保存备用。配制好的酶液在4可保存6天。3、底物：每瓶底物粉剂加入3.1 ml蒸馏水，摇匀后 4冰箱中保存备用。配制好 的底物在4可保存6天。4、显色剂：将显色剂粉剂倒入棕色瓶中，加入32ml提取液摇匀后4冰箱中保存（二）试剂保存的注意事项1、酶的保存：粉状的酶应储藏在冷冻室（约0-8），使用时用提取试剂溶解，溶解后的酶液分成小瓶。暂时不用的储存在冷冻室内，用时解冻；用后的酶液储存在冷藏室（05）内，在1周内用完。酶液反复解冻最多不超过两次，否则会影响酶活性。2、底物和显色剂保存：固体保存在冷冻室（约0-8），溶解后的底物和显色剂应保存在冰箱的冷藏室内（05）。3、提取试剂的保存：固体及溶解后的提取试剂只需在常温下保存。（三） 仪器使用步骤 仪器调零开机预热仪器调100做对照样品检测（四）仪器调零、调100A、仪器调零 打开仪器后，进入仪器调零界面，将仪器所配的挡光黑块放入检测通道，盖好盖板，按下仪器调零确认键，待出现0.00后，即可完成调零。B、仪器调100 取出挡光黑块，确认各光路中没有挡光物质后，盖好盖板，按下仪器调100确认键，待出现99.9后，即可完成调100。注意：一般应先调零，后调100。（五）样品处理及检测1、样品采集后，后应尽快进行检测，选取表面干净的的蔬菜或水果样品，叶菜类蔬菜用剪刀随机取样品的不同植株叶片；瓜果类蔬菜用削皮刀沿果菜表面处取约1厘米厚的样本，然后剪成1cm左右见方碎片，备用。2、用天平准确称取1g放入小烧杯中。3、用移液管吸取5ml提取液浸泡，在常温下放置10分钟，每3分钟晃动一下烧杯，使蔬菜中的农药充分溶入液体中。若用震荡器，震荡2分钟即可。4、吸取上清液2.5ml于小试管内，加入0.1ml酶、0.1ml显色剂，30水浴15分钟。6、加入0.1ml底物，混匀，倒入比色皿中，放入通道盖好盖板，按“启动”键，开始检测。葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中，含有对酶有影响的植物次生物质，容易产生假阳性。处理这类样品时，可采取整株（体）蔬菜浸提。（六）样品检测流程样品 对照取样品可食用部分剪碎（1cm见方），称取1g于小烧杯中加入5ml提取液，放置10分钟，吸取2.5ml于试管中吸取2.5ml提取液于试管中各加入100微升酶液和100微升显色剂摇匀后30水浴15分钟各加入100微升底物混匀，立即转移到比色皿中立即将比色皿放入仪器3分钟后自动计算抑制率结果判定抑制率50%抑制率50%合格不合格根据市场管理规定处理，用其他方法进一步分析检测过程中应注意事项（1）检测所用的蒸馏水为两次以上蒸馏水。（2）检测时操作步骤要按程序进行，前后顺序不要颠倒，动作要迅速，加完试剂不能停留太长时间。（3）电子天平使用前要调水平，使电子天平上的气泡处于圆圈内。然后调零，称量。（4）样品、样品提取液、酶、显色剂、底物等取样量要准确。（5）每次使用移液枪量取液体过程中，取液时移液枪按到第一停位点，排液时按到第二停位点，尽量排尽溶液，以免引起误差。（6）操作时间要按照标准控制好。振荡时间12分钟；样品提取时间1015分钟；水浴抑制时间15分钟。（7）水浴温度设置。乙酰胆碱脂酶抑制温度30，丁酰胆碱脂酶抑制温度3738。（七）结果判别被测样品酶抑制率低于50%为安全果蔬，酶抑制率高于50%为农药残留超标，建议重复一次，确定之后送农产品质检中心做进一步检测。结果判别应注意事项（1）空白值，3分钟前后吸光值控制在0.40.8之间为好。如果空白值低于0.4，可适当加大酶底物等试剂的使用量。3分钟前后吸光值变化率应大于30%，如果低于30%，可适当提高水浴温度及时间。（2）如果抑制率出现负值较大，造成主要原因是操作中出现的系统误差，例如操作人员操作不熟练，若蒸馏水的纯度不够，也可能造成抑制率负值。另外，同一种蔬菜由于不同次重复取样部位不同，较小的负值误差（-10%以下）是在允许范围内，这种情况下，样本无农药检出。（3）乙酰胆碱脂酶50%，丁酰胆碱脂酶70%时超标，说明蔬菜中含有某种有机磷或氨基甲酸脂类农药残留。此时样本要有2次以上的重复检测。（八）检测注意事项1、每次检测前仪器预热20分钟，要进行仪器调零、调100。2、每次检测样品前应先做对照，