复方当归提取物对皮肤抗氧化作用实验研究.docx

西安源森生物实验室：复方当归提取物对D-半乳糖衰老模型小鼠皮肤的抗氧化作用最新调查结果显示，在具有抗氧化作用的化妆品中，含复方当归提取物的产品明显更受女性消费者的欢迎，其原因在于，当归本身所具有的除皱、祛斑和美白功效在传统中医药领域已深受认同。然而，复方当归提取物可用作皮肤抗氧化的具体原理是什么呢？本次实验，西安源森生物实验室将针对此疑问，选用优质的含复方当归提取物乳、面膜等多种类型护肤品，共同作用于D-半乳糖衰老模型小鼠皮肤，测定其对小鼠皮肤的超氧化物和含水量的影响。一、实验目的、材料和方法【实验目的】：含复方当归提取物的护肤品对皮肤的抗氧化作用。【实验方法】：测试含复方当归提取物护肤品对 D- 半乳糖衰老模型小鼠皮肤羟脯氨酸（ Hyp）、超氧化物歧化酶（ SOD）以及皮肤含水量的影响。【实验对象】：ICR 3 月龄小鼠 30 只。【实验仪器】：FA/JA型电子天平，DY89-1 型电动玻璃匀浆机，752N 型紫外分光光度计。【实验用试剂】：超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒，羟脯氨酸（ Hyp）试剂盒，考马斯亮蓝蛋白测试盒，D- 半乳糖。【受试药物】：复方当归提取物由西安源森生物制剂中心制备。DGCC为清洁乳、按摩霜、成型面膜及滋润霜，由西安源森广州产品研究中心监制。【实验步骤】：1. 动物分组、造模及给药：将30只小鼠随即分为三组，每组10只。正常对照组：每天小鼠颈背部皮下注射等容量生理盐水；D-半乳糖组：每天给小鼠颈背部皮下注射12.5% D- 半乳糖（1 000mg/kg）； DGCC 组：每天小鼠颈背部皮下注射12.5%的 D- 半乳糖（1000mg/kg），并用剃毛器剃去背部被毛，暴露大小约2cm3cm 的皮肤，用 DGCC 清洁乳涂抹和清水清洗，再用DGCC面膜敷贴于暴露部位 30min，然后用DGCC 按摩膏按摩 1min，最后外涂 DGCC 滋润霜。2. 衰老小鼠皮肤 SOD 活力和皮肤总羟脯氨酸含量测定：42天后，将各组小鼠同时处死，取背部脱毛部位的皮肤组织块，经预冷生理盐水漂洗，除去皮下脂肪及结缔组织，用滤纸拭干，取0.5g置10ml 烧杯，加预冷生理盐水，眼科剪剪碎组织块后，倒入匀浆管中，加预冷生理盐水至 5ml，用电动玻璃匀浆机制成10%组织匀浆（ 在冰水中进行），然后反复冻融 3 次，其完全破碎，细胞内容物完全游离液相中。制备组织匀浆采用 SOD 试剂盒和羟脯氨酸试剂盒，并按说明书方法测定。3. 衰老小鼠皮肤含水量测定：用打孔器取下脱毛后皮肤组织 0.5g，精密称皮肤湿重。放置 80干燥箱中 48h，称皮肤干重。并按下列公式测量含水百分率：【统计学方法】：本研究中所有资料均采用 Spssfor window10.0 统计软件进行分析，行方差分析及2检验。二、实验结果1. DGCC 对衰老小鼠皮肤 SOD 活力和总羟脯氨酸含量的影响：见表 1。以上实验结果显示：DGCC 组小鼠皮肤SOD活力和总羟脯氨酸含量明显增高，与正常组相比没有明显差别；而D-半乳糖组小鼠皮肤SOD活力和总羟脯氨酸含量较之正常组与DGCC组小鼠都明显降低。2. DGCC 对衰老小鼠皮肤含水量的影响：见表 2。以上实验结果显示：与正常组比较，DGCC 组小鼠皮肤含水量与 D- 半乳糖组对比没有统计学意义，但有升高趋势；而D- 半乳糖组小鼠皮肤含水量则明显降低。3. 西安源森生物实验室的本次实验结果与讨论：3.1西安源森生物本次实验结果：- 半乳糖衰老模型小鼠皮肤Hyp、SOD 明显低于正常组。（1）皮肤水含量降低表明，D-半乳糖衰老模型小鼠皮肤呈现渐进性老化，角质层变薄，皮肤水合能力降低，水分丧失增加。（2）DGCC 共同使用 42 天后，与 - 半乳糖组相比，DGCC 组Hyp含量和SOD 活性具有显著性差异。DGCC可显著增高D-半乳糖衰老模型小鼠皮肤 Hyp 含量(P0 05)，这表明其可通过刺激衰老皮肤成纤维细胞活性，增强胶原蛋白合成能力；而对 D- 半乳糖衰老模型小鼠皮肤含水量有增高趋势，但没有统计学意义，表明 DGCC对皮肤抗氧化作用优于提高皮肤含水量；同时能够显著增强D- 半乳糖衰老模型小鼠皮肤SOD活性(P0 05)，这表明其可有效防止自由基反应的连续发生和有害代谢产物的积累，对提高皮肤细胞自身防御能力，改善皮肤细胞营养状况，有效拮抗具有积极意义。综上，DGCC 共同使用可通过刺激成纤维细胞活力、增强胶原蛋白合成能力、提高抗氧化酶的活性等，延缓皮肤衰老过程，发挥其抗氧化作用。DGCC对衰老动物某些指标具有很好的改善作用，同中医美容中所强调的容貌肌肤与气血盛衰的密切关系相一致。3.2西安源森生物实验室对本次实验结果的讨论： 目前的研究普遍认为，皮肤衰老损伤的重要原因是自由基的积累： 自由基积累会使生物膜中的不饱和脂类发生过氧化，形成过氧化脂质，其最终产物MDA是强交联剂，可与核酸、蛋白质或脂类结成难溶性物质，导致生物膜硬化从而降低通透性，影响细胞物质交换，继而使其破裂、死亡。 在正常生理条件下，机体抗氧化防护机制与SOD能有效清除自由基，对抗自由基对皮肤的损害。 随着年龄的增长，体内抗氧化酶类不断减少，机体抗氧化防护功能逐渐减退，因此测定皮肤抗氧化剂活性可以作为判定受试动物皮肤衰老程度的指标。羟脯氨酸为胶原蛋白特有的氨基酸，而胶原蛋白是动物皮肤组织的组成成分，因而测定皮肤羟脯氨酸含量可反映皮肤中胶原蛋白含量。在机体老化的过程中：成纤维细胞氧气供应不足直接影响脯氨酸羟化产生羟脯氨酸胶原蛋白合成减少胶原纤维形成不良出现皮肤弹性降低和皱纹增加。故，测定皮肤羟脯氨酸含量可作为判定受试动物衰老程度的指标。由于老龄动物饲养周期较长，个体差异大，不易获得。因此，本次试验，西安源森生物实验室采用D-半乳糖所致的小鼠衰老模型。- 半乳糖拟衰老模型原理：- 半乳糖在体内引发非酶糖基化反应，损伤生物大分子正常生理功能，同时由反应产物晚期糖基化终产物(AGEs)诱导自由基损伤，进