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实验三十三 菠菜叶中叶绿素的提取一、实验目的：了解柱层析法分离菠菜叶中色素的原理和方法。掌握柱层析操作技术。学习薄层色谱法鉴定化合物的原理和操作。学习萃取原理，掌握分液漏斗的使用方法。二、实验原理：绿色植物如菠菜中含有叶绿素（包括叶绿素a和叶绿素b）、叶黄素及胡萝卜素等天然色素。叶绿素a为蓝黑色固体，在乙醇溶液中呈蓝绿色；叶绿素b为暗绿色，其乙醇溶液呈黄绿色。它们是吡咯衍生物与镁的络合物，是植物进行光合作用必需的催化剂，易溶于石油醚等非极性溶剂中。通常植物中叶绿素a的含量是叶绿素b的三倍。其结构式如下：叶绿素a(R=CH3)和叶绿素b(R=CHO)胡萝卜素是一种橙色的天然色素，属于四萜，为一长链共轭多烯，有、三种异构体，其中异构体含量最多。-胡萝卜素(R=H)和叶黄素(R=OH)叶黄素是一种黄色色素，与叶绿素同存在于植物体内，是胡萝卜素的羟基衍生物，较易溶于乙醇，在石油醚中溶解度较小。秋天，高等植物的叶绿素被破坏后，叶黄素的颜色就显示出来。本实验从菠菜叶中提取上述各种色素，并用柱层析法进行分离。三、实验仪器与药品仪器研钵 分液漏斗 锥形瓶 酸式滴淀管 硅胶板 层析缸药品菠菜 石油醚 乙醇 无水硫酸钠 中性氧化铝 丙酮 正丁醇 蒸馏水四、实验操作：取5克新鲜的菠菜叶子于研钵中捣烂1，用30ml 2:1的石油醚乙醇分几次浸取。把浸取液过滤，滤液转移至分液漏斗中，加等体积的水洗一次，弃去下层的水-乙醇层。石油醚层再用等体积的水洗二次2，3，有机相用无水硫酸钠干燥后转移到另一锥形瓶中保存。取一半做柱层析分离，其余留作薄层分析。柱层析分离：用25ml酸式滴淀管，20g中性氧化铝装柱。先用9:1的石油醚丙酮洗脱，当第一个橙黄色色带流出时，换一接收瓶接收，它是胡萝卜素，约用洗脱剂50ml（若流速慢，可稍稍进行减压）。接着用7:3的石油醚丙酮洗脱，当第二个棕黄色色带流出时，换一接收瓶接收，它是叶黄素，约用洗脱剂200ml。再换用3:1:1的正丁醇乙醇水洗脱，分别接收叶绿素a（蓝绿色）和叶绿素b（黄绿色），约用洗脱剂30ml。鉴定：取一104cm2的硅胶板，在板的一端约11.5cm处用铅笔轻轻画一条直线作为起点。用分离后的叶绿素a和叶绿素b点样，用石油醚展开，当展开剂前沿上行到板另一端约1cm时，立即取出并作好记号。晾干后量下斑点所走的距离，计算Rf值。五、注释1研磨只可适当，不可研磨得太烂而成湖状，否则会造成分离困难。2洗涤时要轻轻振荡，以防止产生乳化现象。3水洗的目的是除去有机相中少量的乙醇和其它水溶性物质，六、思考题为什么极性大的组分要用极性大的溶剂洗脱？如果柱子填充不均匀或留有气泡，会对分离
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