LCMSMS农药一齐分析法(Ⅱ).doc

1. 适用范围适用于LC/MS/MS农药的一齐分析法（）中农药的检测。2. 编制依据依据日本厚生劳动省LCMS农药一齐分析法编制。3. 方法原理水果、蔬菜、加工产品中的农药残留经乙腈提取，提取溶液经净化、浓缩用50%的甲醇定容后，LC/MS/MS测定，用外标法定量。 4. 试剂4.1 乙腈：色谱级 4.2 丙酮：色谱级4.3 正己烷：色谱级4.4 乙酸乙酯：色谱级4.5 无水硫酸钠：分析纯4.6 甲苯：色谱级4.7甲醇：色谱级4.8 氯化钠：分析纯4.9 0.01M 盐酸：8.29ml浓盐酸定容至1000ml5. 仪器设备5.1 Waters UPLC TQD5.2 食品加工器 5.3菜刀，案板5.4电子天平5.5均质机5.6布氏漏斗，分液漏斗，普通漏斗，滤纸5.7梨形瓶（250ml，100ml）5.8 锥形瓶（200ml，100ml）5.9 C18固相萃取柱 （1G 6ml）5.10氨基复合柱 （Carbon/NH2 500mg 6ml）5.11硅胶柱 Silica （500mg 6ml）5.12旋转蒸发仪5.13 氮吹仪5.14 玻璃离心管（10mL）5.15 分液漏斗振荡器5.16 真空泵5.17 移液枪（1mL，200L）6. 分析步骤6.1 试料的制备：（除不加样品外，试剂空白与样品同步处理）将送交实验室的不少于500克的样品于食品加工器搅细（对于大块状的样品可先用水果刀切成小块，再放于食品加工器中搅细）。粉碎后的样品装于一次性的塑料袋中备用。6.2 提取6.2.1 准确称取10.0g（精确到0.1g）搅细的样品（原料称取20.0g）于均质杯中，加入70ml乙腈，在高速组织捣碎机中均质5min。6.2.2 将样品减压抽滤，用30ml乙腈冲洗均质杯，也过滤，合并滤液。6.2.3 将滤液倒入装有7gNaCl的300ml分液漏斗中，用20mL0.01M 盐酸冲洗三角瓶，也倒入分液漏斗中，在分液漏斗震荡器上剧烈震荡10min，静置10min，使乙腈相和水相分层。6.3浓缩准确移取全部上层清液于茄形瓶中。在40水浴锅中旋蒸至大约20ml。6.4净化6.4.1 用乙腈10mL活化固相萃取柱（BE-C18）；将约20ml样品液过萃取柱后，用3mL 乙腈冲洗容器，并作为溶出液过柱子，溶出液约23ml用三角瓶接收；6.4.2 加无水硫酸钠3-4勺干燥，静置（约15min）；过滤，用40mL乙酸乙酯（1020ml23回）洗涤三角瓶，过滤，合并滤液 ；6.4.3 将滤液在40C下减压条件下浓缩，至近干；用3mL 丙酮：正己烷：三乙胺（20：80：0.5）溶解。6.4.4 将ENVI-Carb LC-NH2和Sep-pak Vac Silica 固相萃取小柱串联依次用5ml甲醇、5ml丙酮、10ml正己烷润洗，倒入样品的丙酮：正己烷：三乙胺（20：80：0.5）溶解液，再用10mL丙酮：正己烷：三乙胺（20：80：0.5）冲洗茄形瓶，亦倒入。用2mL丙酮：甲醇（1：1）冲洗样品瓶，倒入萃取柱，收集，再将18 mL丙酮：甲醇（1：1）倒入萃取柱，收集。6.4.5 将滤液在40C下减压条件下浓缩，至近干；用5mL50%的甲醇水溶液溶解，超声溶解，取1.5ml于1.5mL EP管中10000rpm，10min，离心，取上清液过0.22m尼龙滤膜，过滤，移入样品瓶中待测。7.分析条件7.1 UPLC条件 Waters ACQUITY UPLCl 移动相A 5mM 醋酸铵（AcNH4）水溶液B 5mM 醋酸铵（AcNH4）甲醇溶液l 色谱柱ACQUITY UPLC BEH C18 1.7m （2.1mm*100mm）l 温度色谱柱温度40l 样品柜温度 温度5l 泵（LC梯度程序）流速 0.3mL minTime(min) A(%) B(%)0.0 90 1011.5 35 6513.0 5 9514.5 5 9514.6 90 10Run Time 17.5l 进样量 注入量5L（部分环针溢出进样）7. 2 MS条件l LC/MS/MS仪器条件TQ Detectorn Capillary 0.50kVn Cone -n Extractor 3Vn RF Lens 0.1Vn Source Temp 150n Desolvation Temp 400n Desolvation Gas Flow 900L/hrn Cone Gas Flow 50L/hrn LM Resolution 1 11.0n HM Resolution 1 11.0n Collision Gas Flow 0.15mL/min震荡10分钟，静置分层，取乙腈层（上层）3mL 丙酮：正己烷：三乙胺（20：80：0.5）溶解过柱，再用10mL冲洗容器过柱，过柱液不收集超声溶解，过萃取柱依次用5ml甲醇、5ml丙酮、10ml正己烷润洗固相萃取柱ENVI-Carb LC-NH2和Silica小柱净化滤液在40C下减压条件下浓缩至近干三角瓶中加无水硫酸钠3-4勺干燥约15min后过滤溶出液约23ml用三角瓶接收3mL 乙腈冲洗容器作为溶出液过柱约20ml样品液过萃取柱固相萃取柱（BE-C18）净化乙腈层40C下减压浓缩至约20mL20mL0.01M 盐酸冲洗锥形瓶后倒入分液漏斗合并滤液到含有7gNaCl 的分液漏斗中过滤至200ml锥形瓶中5000-10000转/min，5min8. 操作流程图：称取样品10.0g乙腈70ml残渣中加入30ml乙腈过滤乙腈10mL活化40mL乙酸乙酯（1020ml23回）洗涤三角瓶，过滤，合并滤液20mL丙酮：甲醇（1：1）溶出（分两次），收集溶出液。溶出液在减压条件下浓缩至近干5mL 50%的甲醇水超声溶解，取1.5ml于1.5mLEP管中10000rpm，10min离心，取上清液过0.22m尼龙滤膜过滤至样品瓶中待测附表 LC/MS/MS农药的一齐分析法（）检测明细序号項目名（中国語）項目名（英語）ESI母离子cone（V）子离子collision（V)方法检出限（mg/kg）11-萘基乙酸1-Naphthylacetic acid184.916141120.01184.952(2,4-二氯苯氧基)乙酸丁酯2,4-D（2,4-PA)218.822160.8140.01124.91834-氯苯氧基乙酸4-Chlorophenoxyacetic acid184.924126.9160.01184.9542-甲基-4-氯苯氧乙酸MCPA198.926140.9140.01198.9552-甲-4-氯丁酸MCPB226.916140.9120.01226.956碘苯腈Ioxynil369.748126.8360.01214.832O7三氟羧草醚Acifluorfen359.818315.9100.01194.9308 四唑嘧磺隆Azimsulfuron+42535182200.01139.1409甲基碘磺隆Iodosulfuron methyl+508.140167.1250.01141.12510灭草喹Imazaquin+312.24086.1250.01267.220O11咪唑磺隆Imazosulfuron+41326155.9180.01152.81212胺苯磺隆Ethametsulfuron-methyl+411.240168.1300.01196.11513乙氧嘧磺隆Ethoxysulfuron+399.240261.1150.0121825O14炔草酸Clodinafop acid+31236265.8160.01238.22415调果酸Cloprop198.924126.8140.0170.912O16氯酯磺草胺Cloransulam-methyl+430.140153400.01398.11517氯嘧磺隆Chlorimuron ethyl+415.140186150.01834018氯磺隆Chlorsulfuron+358.230140.9200.011672019环丙酰胺酸Cyclanilide272.130160250.01228.110序号項目名（中国語）項目名（英語）ESI母离子cone（V）子离子collision（V)方法检出限（mg/kg）20双氯磺草胺Diclosulam+406.150161300.013781521环丙嘧磺隆Cyclosulfamuron+422.240261.1150.01218.130222, 4-滴丙酸Dchlorprop racemate232.822160.8140.01124.828O23醚磺隆Cinosulfuron+414.240183150.01833524赤霉酸Gibberellic acid34544239140.011433025甲磺草胺Sulfentrazone+38746307200.01145.84626磺酰磺隆Sulfosulfuron+471.126210.9140.01260.81827噻吩磺隆Thifensulfuron methyl+38840167150.015640O28醚苯磺隆Triasulfuron+402.140167.1150.01141.12029氟胺磺隆Triflusulfuron methyl+493.240264.1200.019640O30三氟啶黄隆钠盐Trifloxysulfuron-Na+438.240182.1240.012572031苯磺隆Tribenuron methyl+396.126154.9140.01180.92232萘草胺Naptalam+292.130144.1100.01149.120O33氟吡甲禾灵Haloxyfop+36240315.8180.019130O34氯吡嘧磺隆Halosulfuron methyl+435.140182.1200.018341O35吡嘧黄隆Pyrazosulfuron-ethyl+415.240182.1150.01139.14036环酰菌胺Fenhexamid+302.16097.1200.0155.135O37啶嘧磺隆Flazasulfuron+408.130181.9200.01138.944O38氟嘧磺隆Primisulfuron methyl46720226.1150.01126.140O39吡氟禾草灵Fluazifop+328.150282.1200.01255.125序号項目名（中国語）項目名（英語）ESI母离子cone（V）子离子collision（V)方法检出限（mg/kg）O40唑嘧磺草胺Flumetsulam+326.150129250.011095041氟草烟Fluroxypyr+254.928208.8160.01180.822O42氟磺隆Prosulfuron+420.240141.1200.01167.12043丙苯磺隆钠Propoxycarbazone Na+399.128115.9320.01198.916O44溴苯腈Bromoxynil275.74480.8260.01275.7545嘧螨酯Florasuram+360.150129250.01108.960O46五氟磺草胺Penoxsulam+484.260195.1300.01164.14047苄嘧磺隆Bensulfuron methyl+411.132148.9220.01181.920O48氟磺胺草醚Fomesafen436.948194.9420.01221.93249甲酰胺磺隆Foramsulfuron+413.230182.1250.01834050高2甲4氯丙酸Mecoprop212.926140.9160.0170.91051甲基二磺隆Mesosulfuron-methyl+504.250182.1200.018340O52磺草唑胺Metosulam+41844174.8280.011404053甲磺隆M