农副产品中亚硝酸盐的测定.docx

XXX实验室检测中心管理体系文件作业指导书（第A版 第0次修改）文件编号：编写：审核：批准：批准日期：受控状态： 受控 非受控正副版本： 正本 副本持有者：发布日期： 实施日期：作业指导书文件编号：第1页 共3页标 题：农副产品中亚硝酸盐的测定第A版 第0次修改颁布日期：2014年 月 日1.目的使亚硝酸盐的测定处于受控状态，保证检测结果的准确性与一致性。规范所有参加本项目检测的工作人员操作规程。2.范围适用于农副产品中亚硝酸盐的测定。本方法检出限:1mg/kg3. 引用标准食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定-GB 5009.33-2010食品添加剂使用标准-GB 2760-20114. 概述亚硝酸盐是国家列入允许使用的食品添加剂，肉类制品中用的发色剂主要是亚硝酸盐和硝酸盐。火腿、香肠、腊肉等肉类食品在亚硝酸盐作用下，肉品能保持鲜艳的亮红色，同时还具有较强的抑菌作用。但研究表明，亚硝酸盐是一种潜在的致癌物质，它可诱发人体胃癌、肠癌、食道癌等疾病过量食用会对人的身体造成危害。而目前还没有亚硝酸盐类物质替代物，所以现在亚硝酸盐仍然在肉制品中应用。测定食品中亚硝酸盐含量有离子色谱法，分光光度法等方法，利用分光光度法测定食品中亚硝酸盐的含量，该方法简单、方便、快捷、实用。5. 定量测定5.1 原理本次实验采用盐酸萘乙二胺法测定，试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸性条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色染料，外标法测得亚硝酸盐的含量。5.2 仪器、设备5.2.1 百分之一天平5.2.2 万分之一天平5.2.3 组织捣碎机5.2.4 722N可见分光光度计5.2.5 数显鼓风干燥箱5.3 试剂、材料除非另外注明，本法所用试剂均为分析纯；水为GB/T 6682规定的三级水或去离子水。5.3.1 亚铁氰化钾（K4Fe(CN)63H2O）。5.3.2 乙酸锌 （Zn(CH3COO)22H2O。5.3.3 冰醋酸 （CH3COOH）。作业指导书文件编号：第2页 共3页标 题：农副产品中亚硝酸盐的测定第A版 第0次修改颁布日期：2014年 月 日5.3.4 硼酸钠 （Na2B4O710H2O）。5.3.5 盐酸 （1.19 g/mL）。5.3.6 对氨基苯磺酸 (C6H7NO3S）。5.3.7 盐酸奈乙二胺 (C6H7NO3S）。5.3.8 亚硝酸钠 （NaNO2）。5.3.9 20%（V/V）盐酸：量取一定量的浓盐酸，按照【浓盐酸：水体】积比1:4稀释，混匀备用（配制体积原则上跟对氨基苯磺酸所配体积一样）5.3.10 亚铁氰化钾（106g/L）：称取10.6g亚铁氰化钾（5.3.1），用水溶解，并稀释至100ml置于棕色瓶备用5.2.11 乙酸锌溶液（220g/L）：称取22.0g乙酸锌（5.3.2），先加5ml冰醋酸（5.3.3）溶解，用水稀释至100，置于棕色瓶备用5.3.12 饱和硼砂溶液(50g/L)：称取12.50g硼酸钠（5.2.4），溶于250ml热水中，冷却后备用（放置一段时间后会有结晶析出，属正常现象，用时可稍水浴溶解）5.3.13 对氨基苯磺酸溶液（4g/L）：称取0.4g对氨基苯磺酸（5.3.6），溶于100ml 20%（V/V）盐酸（5.3.9）中，置棕色瓶中混匀，避光保持5.3.14 盐酸萘乙二胺溶液（2g/L）：称取0.2g盐酸萘乙二胺（5.3.7），溶于100ml水中，混匀后，置棕色瓶中避光保存。5.3.15 亚硝酸钠标准溶液（200ug/ml）：准确称取0.1000g（于110120干燥恒重的亚硝酸钠）的亚硝酸钠，加水溶解移入500ml容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀备用5.4 样品处理5.4.1 肉类、水产及其制品：用四分法取适量或取全部，用组织捣碎机捣碎备用。5.5 操作方法5.5.1提取称取5（精确至0.01 g）制成匀浆的试样（如制备过程中加水，应按加水量折算），置于50ml烧杯中，加入12.5ml饱和硼砂溶液，搅拌均匀，以70左右的水约300ml将试样洗入500ml容量瓶中，于沸水浴中加热15min，取出置于冷水浴中冷却，并放置至室温。5.5.2 提取液净化在振荡上述提取液时加入5 mL亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入5 mL乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质。加水至刻度，摇匀，放置30min，除去上层脂肪, 上清液用滤纸过滤，弃去初滤液30 mL，滤液备用。5.6 亚硝酸盐的测定吸取40.0 mL上述滤液于50 mL带塞比色管中，另吸取0.00 mL、0.20 mL、0.40 mL、0.60 mL、0.80 mL、1.00 mL、1.50 mL、2.00 mL、2.50 mL亚硝酸钠标准使用液（相当于0.0 、1.0 、2.0 、3.0 、4.0 、5.0 、7.5 、10.0 、12.5 亚硝酸钠），分别置于50 mL带塞比色管中。于标准管与试样管中分别加入2 mL对氨基苯磺酸溶液，混匀，静置3 min5 min后各加入1 mL盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混匀，静置15 min，用2 cm 比色杯，以零管调节零点，于波长538 nm处测吸光度，绘制标准曲线比较。同时做试剂空白。作业指导书文件编号：第3页 共3页标 题：农副产品中亚硝酸盐的测定第A版 第0次修改颁布日期：2014年 月 日5.7 结果计算与分析亚硝酸盐（以亚硝酸钠计）的含量按式（3）进行计算。式中：X1试样中亚硝酸钠的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；A1测定用样液中亚硝酸钠的质量，单位为微克（g）；m试样质量，单位为克（）；V1测定用样液体积，单位为毫升（mL）；V0试样处理液总体积，单位为毫升（mL）。5.8 精密度该法亚硝酸盐的检出限为1mg/kg；以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留两位有效数字，测定结果的绝对值不得超过算术平均值的10%。6. 相关文件天平称量操作规程722N可见光分光光度计操作规程 数显鼓风干燥箱操作规程7. 注意事项a) 饱和硼砂：作为提取剂，分散剂溶入水中，同时，硼砂被水解为等量的硼酸与硼酸二氢钠，起缓冲溶液作用，放置一段时间后会有结晶析出，属正常现象，用时可稍水浴溶解。b) 对氨基苯磺