课件：金黄色葡萄球菌检验技术.ppt

金黄色葡萄球菌检验技术,主要概况： 一、金黄色葡萄球菌的生物学特性 二、金黄色葡萄球菌的抗原构造及分型简介 三、金黄色葡萄球菌的致病性 四、金黄色葡萄球菌的流行病学 五、金黄色葡萄球菌的检验方法 六、金黄色葡萄球菌肠毒素的检测 七、金黄色葡萄球菌的快速检测方法 八、金黄色葡萄球菌污染的控制,金黄色葡萄球菌的生物学特性 1、形态与染色：(staphylococcus aureus) 典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8m左右，显微镜下排列成葡萄串状。 革兰氏染色阳性。,2、培养特性： 金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37C，最适生长pH 7.4。 平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1-2mm。血平板菌落周围形成透明的溶血环。,3、生化特性： 可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。 许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。 金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。,金黄色葡萄球菌的抗原构造及分型简介 对分型进行简单的了解 、血清学分型： 金葡水解，获得两种抗原成分：蛋白抗原和多糖抗原。 蛋白抗原是凝集抗原，无特异性。 多糖抗原有特异性。 绝大多数金葡含有A型抗原，B型抗原主要存在于凝固酶阴性菌株，C型抗原在致病性和非致病性菌株中都存在。 、噬菌体分型： 、根据肠毒素分型： 、根据血浆凝固酶分型：,金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。 葡萄球菌感染创口的革兰氏染色涂片,金黄色葡萄球菌的致病性,金黄色葡萄球菌引起的下颚感染,金黄色葡萄球菌引起的须疮感染,金黄色葡萄球菌对食品的侵蚀,多见于春夏季； 中毒食品以奶、肉、蛋、鱼及其制品常见。 此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒事件也有报道。,葡萄球菌感染创口的革兰氏染色涂片,金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶： a.溶血毒素：外毒素，分、四种，能损伤血小板，破坏溶酶体，引起肌体局部缺血和坏死； b.杀白细胞素：可破坏人的白细胞和巨噬细胞； c.血浆凝固酶：当金黄色葡萄球菌侵入人体时，该酶使血液或血浆中的纤维蛋白沉积于菌体表面或凝固，阻碍吞噬细胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感染易局部化与此酶有关； d.脱氧核糖核酸酶：金黄色葡萄球菌产生的脱氧核糖核酸酶能耐受高温，可用来作为依据鉴定金黄色葡萄球菌； e.肠毒素：金黄色葡萄球菌能产生数种引起急性胃肠炎的蛋白质性肠毒素，分为A、B、C、D、E及F五种血清型。,金黄色葡萄球菌的流行病学 金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。作为人和动物的常见病原菌，其主要存在于人和动物的鼻腔、咽喉、头发上，50%以上健康人的皮肤上都有金黄色葡萄球菌存在。因而，食品受其污染的机会很多。 近年来，美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。,媒体关于日本雪印牛奶金黄色葡萄球菌中毒事件的报道 新华社东京月日电（记者王大军）据大阪市政府日宣布的调查结果显示，因食用日本雪印乳业公司大阪工厂生产的乳制品而中毒者已逾万人。 据调查，在大阪府和京都府以及附近县，因食用雪印乳业公司大阪工厂生产的乳制品而中毒发病者已达人，其中有人被送往医院，目前还有人在医院接受治疗。 据化验，该工厂生产的一些乳制品中含有黄色葡萄球菌，这种细菌可产生使人出现腹泻、呕吐症状的型肠毒素。该厂乳制品染菌是生产设备没有按规定定期清洗而造成的。 目前，日本各地超市和食品店都已停止销售雪印牌乳制品，一些地方政府已下令禁止食用雪印牌食品。大阪雪印厂已被当地政府勒令无期限停产，并且大规模回收月下旬出厂的几种染菌食品。 总部设在北海道首府札幌市的雪印乳业公司是日本著名乳制食品厂家。该公司在全国共拥有家工厂，其中家工厂加工生产牛奶、牛奶饮料、酸奶等奶品。 新华社 2000年07月05日,金黄色葡萄球菌的检验方法 我们以SN标准中的最近似值(MPN)测定法来进行讲解： MPN方法简介 这种方法适用于检测认为带有大量竞争菌的食品及其原料和未经处理的食品中的少量金黄色 葡萄球菌。 1、样品制备： 固体或半固体食品: 以无菌操作称取25g样品,放入装有225mL灭菌生理盐水的灭菌均 质杯内,于8000r/min均质12min,制成1:10样品匀液。 液体食品: 用灭菌吸管吸取25mL样品,放入装有225mL灭菌生理盐水的灭菌玻璃瓶内 (瓶内预置适当数量的玻璃珠),经充分振摇制成1:10样品匀液。 供计数检验时,可按十进位递增稀释法将样品匀液再进行适当稀释。 2、选三个连续稀释度，从每个稀释度分别取1 mL稀释样品液，接种3管含10氯化钠胰蛋白胨大豆肉汤。样品的最高稀释度必须达到能获得阴性终点,置361培养48 h。,3、用3 mm接种环,从有细菌生长的各管中移取1 环,划线接种于表面干燥的Baird- Parker琼脂平板,置361培养4548h。 怎样在平板上进行细菌的划线分离。 1.斜线法 2.曲线法 3.方格法 4.放射法 5.四格法,4、从有细菌生长的每一平板上至少挑取1个可疑金黄色葡萄球菌菌落,移种到肉汤培养基中,置361培养2024 h。,金黄色葡萄球菌在BP平板上的菌落形态-2,金黄色葡萄球菌在BP平板上的菌落形态-1,5、取肉汤培养物0.3mL同0.5mL凝固酶试验兔血浆于8mm100mm试管内充分混合,置 361培养,定时观察是否有凝块形成,至少观察6 h,以内容物完全凝固,使试管倒置或 倾斜时不流动者为阳性。试验中需同时做巳知阳性和阴性对照。对可疑结果,应进行革兰氏染色、镜检和其他辅助试验如耐热核酸酶试验等 加以证实。 6、报告结果：根据凝固酶试验结果查最近似值(MPN)表,报告金黄色葡萄球菌 的MPN/g (mL)。,金黄色葡萄球菌肠毒素的检测 一、动物学试验：主要用幼猫和猴。 二、血清学试验： 肠毒素作为抗原，可以和特异性抗体发生结合性反应，产生可见沉淀。 用血清学反应检验金黄色葡萄球菌肠毒素，方法主要有： 免疫琼脂扩散法 反向间接血凝试验 免疫荧光法 酶联免役吸附法,金黄色葡萄球菌的快速检测方法 目前，随着研究的深入，一些快速和采用现代技术的检测方法不断出现，这些新的快速方法，一般都缩短了传统检测方法的时间，能够较快地得到检测结果，并且操作相对简单。 比如：法国梅里埃公司生产的RPF试剂盒、API检测系统等。梅里埃公司生产的miniVIDAS利用荧光免疫的方法检测葡萄球菌肠毒素，在仪器上45分钟可以得到结果。 比如：美国3M公司生产的金黄色葡萄球菌快速检测试片，可以直接计数产生耐热核酸酶的金黄色葡萄球菌，操作简单，缩短了时间。,金黄色葡萄球菌污染的控制 防止金黄色葡萄球菌污染食品 防止带菌人群对各种食物的污染：定期对生产加工人员进行健康检查，患局部化脓性感染（如疥疮、手指化脓等）、上呼吸道感染（如鼻窦炎、化脓性肺炎、口腔疾病等）的人员要暂时停止其工作或调换岗位。 防止金黄色葡萄球菌对奶及其制品的污染：如牛奶厂要定期检查奶牛的乳房，不能挤用患化脓性乳腺炎的牛奶；奶挤出后，要迅速冷至-10以下，以防毒素生成、细菌繁殖。奶制品要以消毒牛奶为原料，注意低温保存。 对肉制品加工厂，患局部化脓感染的禽、畜尸体应除去病变部位，经高温或其他适当方式处理后进行加工生产。,金黄色葡萄球菌的检验程序图,检 样 25g(ml)+灭菌生理盐水,直接计数方法,增菌培养方法,Baird-Parker平板 0.3ml、0.3ml、0.4ml,7.5%氯化钠肉汤或 胰酪胨大豆汤,血平板,血平板， Baird-Parker平板,涂片染色,观察溶液,血浆凝固酶试验,报告,从菌株中检测肠毒素,菌株,营养琼脂斜面(36),18-24h,用盐水洗下菌苔，放入产毒培养基 固体培养法：(36)培养48h 液体培养法(36)振荡培养48h,8000r/min离心20min，取上清液，加热 100 10min,8000r/min离心10min，浓缩,双向琼脂扩散；微玻片法或 玻片法检测肠毒素,报告,再见,后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用,主要经营：网络软件设计、图文设计制作、发布广告等 公司秉着以优质的服务对待每一位客户，做到让客户满意！,致力于数据挖掘，合同简历、