医学微生物学实验二-2011上半年.ppt

医学微生物学实验课件 南华大学病原学实验教学中心 Etiology Experimental Teaching Center of University of South China 一、微生物的分布及理化因素对微生物的影响 1、空气中微生物的检查（示教） 2、手指皮肤消毒前后微生物的检查（示教） 3、紫外线杀菌试验（自做，2人/组） 4、抗生素敏感试验（示教） 二、细菌的分解代谢产物和细菌的生化反应（示教） 实验内容： 实验名称：细菌的新陈代谢和消毒灭菌 一、微生物的分布 微生物分布非常广泛。 通过对外界微生物的检查，了解微生物在自然界 中的分布，从而树立“有菌观点”，认识“无菌 操作” 对于微生物学及医学实践的重要性。 实验操作步骤： 1取琼脂平板2个，一个启开皿盖，培养基面向上，放在实验 桌上，30min后盖好皿盖。另1个平板，不启开盖作为对照。 22个平板均置37培养1824h，观察结果。 空气中微生物的检查检查 1、消毒（disinfection）：杀灭物体上或环境中的病原微生 物、并不一定杀死细菌芽胞或非病原微生物的方法。 消毒剂（disinfectant）：用以消毒的药品 2、灭菌（sterilization） ：杀灭物体上所有微生物的方 法，包括杀灭细菌芽胞、病毒和霉菌在内的全部病原微 生物和非病原微生物。 （一）消毒灭菌的常用术语: 二、理化因素对微生物的影响 3、防腐（antisepsis） 防止或抑制皮肤表面细菌生长繁殖的方法。 防腐剂（antiseptic）：用以防腐的药物。 4、无菌（asepsis）： 不存在活菌的意思，多是灭菌的结果。 5、无菌操作(aseptic technique)： 防止细菌及其他微生物进入人体或其他物品的操作技术。 （二） 消毒灭菌的方法 物理方法 化学方法 辐射杀菌法 滤过除菌法 干燥和低温抑菌法等 热力灭菌法 干热灭菌法 湿热灭菌法 紫外线 电离辐射 微波 常用的化学消毒剂：乙醇、含碘消毒剂、过氧乙酸、过氧化氢、高 锰酸钾、新洁尔灭等。 1、高压蒸汽灭菌法 103.4kPa（1.05kg/cm2) （121.3 ，维维持1520min ） 灭菌效果最好，可杀灭包括细菌芽胞 在内的所用微生物。 常用于一般培养基、生理盐水、手术敷 料等耐高温、耐湿物品的灭菌。 高压蒸汽灭菌器 2、手指皮肤消毒前后微生物的检查 络合碘对细菌的作用（示教） （1）取琼脂平板1个，将底面分成两等份，注明A/B。 （2）用无菌棉签蘸生理盐水，在左手食指头上涂擦。用该指 头在平板A处琼脂表面涂抹，作为消毒前的对照。 （3）用棉签蘸络合碘消毒左手食指。待络合碘干后，依上法 在平板B处琼脂表面涂抹。 （4）置平板于37培养1824h。 平板A处琼脂表面有细菌生长，B处不长细菌或出现 极少的菌落。说明一定浓度的络合碘能杀灭细菌。 【结果】 3、抗生素敏感试验（示教） 一种抗生素只对一定种类的生物细胞有拮抗作用，这种作用范 围称抗菌谱。 抗生素的抗菌机制 影响细胞壁的合成； 损伤或破坏细胞膜的结构； 干扰细胞碳水化合物的代谢； 抑制核酸或蛋白质的合成，这些作用都有一定的选择性。 观察纸片周围有无抑菌圈，并量出抑菌圈直径大小，得 出待测菌对所试抗生素的敏感性。 纸片琼脂扩散法试验程序 （a）挑取菌落 （b）转种肉汤 （c）比浊 （d）涂布平板上 （e）放置药敏纸片 （f）量取抑菌圈大小 4、紫外线杀菌实验 紫外线DNA T - T二聚体 波长240 300nm，265 266nm最强 干扰DNA复制与转录 变异或死亡 （1）原理： （2）特 点 穿透力较弱； 仅能杀死细菌的繁殖体，不能杀死细菌的芽胞。 （3）临床应用 仅用于实验室、传染病房、手术室的空气或不耐热物品的表面 消毒。 注意事项： 紫外线可损伤皮肤、眼睛，使用时应注意防护。 三、细菌的分解代谢产物和细菌的生化反应 细菌的新陈代谢 分解代谢 合成代谢热原质 毒素与侵袭性酶 色素 抗生素 细菌素 维生素 合成代谢产物 细菌的分解代谢产物和生化反应（示教） 细菌对糖、蛋白质的分解能力的不同，因而代 谢产物各异，利用生物化学方法鉴别不同细菌称为 细菌的生化反应。 糖发酵试验： 乳糖乳酸 乳糖酶 葡萄糖发酵试验： 细 菌 葡萄糖丙酮酸各种酸类 甲 酸H2 + CO2 脱氢酶 吲哚试验（Indole test): 色氨酸 色氨酸酶 氨基苯甲醛玫瑰吲哚 甲基红试验(Methy red test): 葡萄糖 细菌 丙酮酸 脱羧 乙酰甲基甲醇 （中性） pH5.4 桔黄色:阴性 pH4.5 红色:阳性 VP试验： 葡萄糖 细菌 丙酮酸 脱羧 乙酰甲基甲醇 氧化 二乙酰 含胍基化合物 红色的化合物( VP试验阳性) 枸橼酸盐利用试验（Citrate utilizatio)： 枸橼酸盐碳酸盐 铵 盐氨 溴麝香草酚蓝(淡绿) 深蓝 碱性 IMViC试验 大肠杆菌：+ - - 产气杆菌：- + + 第1页：实验内容 一、微生物的分布及理化因素对微生物的影响 1、空气中微生物的检查（示教） 2、手指皮肤消毒前