植物组织培养论文.doc

植物组织培养技术 【摘要】植物的组织培养是根据植物细胞具有全能性这个理论，近几十年来发展起来的一项无性繁殖的新技术。我分別从植物组织的培养方法、植物组织培养步骤、植物组织培养的优点来学习植物组织培养技术。【关键词】植物组织培养、离体培养、试管苗、培养基植物的组织培养是根据植物细胞具有全能性这个理论，近几十年来发展起来的一项无性繁殖的新技术。植物的组织培养广义又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织.器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。一、植物组织的培养方法1、非试管微组织快繁 非试管微组织快繁技术是将外植体（一般要求带一叶一芽）放置在室内外普通沙子培养基上进行培养，利用植物腋芽自然倍增达到快速繁殖的目的。一般植物715天可以生长出根系。此技术投资低，操作环节少。 2、试管组织培养 试管组织培养是将外植体（即离体组织、器官或细胞）放置在试管等器皿中在无菌的条件下进行组织培养获得试管苗。 二、植物组织培养步骤1、培养材料的采集 要根据培养目的适当选取材料，选择原则：易于诱导、带菌少。要选取植物组织内部无菌的材料。这一方面要从健壮的植株上取材料，不要取有伤口的或有病虫的材料。另一方面要在晴天，最好是中午或下午取材料，决不要在雨天、阴天或露水未干时取材料。因为健壮的植株和晴天光合呼吸旺盛的组织，有自身消毒作用，这种组织一般是无菌的。培养材料的消毒 从外界或室内选取的植物材料，都不同程度地带有各种微生物。这些污染源一旦带人培养基，便会造成培养基污染。因此，植物材料必须经严格的表面灭菌处理，再经无菌操作手续接到培养基上。（一）试剂 ：乙醇、吲哚乙酸（ IAA） 或 2 ，4 D （生长素类似物）、氯化汞（升汞）或次氯酸钠、6- 苄基氨基腺嘌呤（ 6-BA ）MS 培养基、0.1 mol/L NaOH与 0.1 mol/L HCl（二）配制培养基 （ 1 ）愈伤组织诱导培养基： MS 培养基（蔗糖含量为 10 g/L ， 2,4 D 含量为 2 mg/L ，琼脂 10 g/L ）。 （ 2 ）试验培养基：在 MS 培养基中加入 IAA 和 6BA 。 吲哚乙酸（IAA)先用少量 0.1 mol/L NaOH 溶解， 6- 苄基氨基腺嘌呤先用少量 0.1 mol/L HCl 溶解，然后用蒸馏水稀释，再加入培养基中。 （三）仪器设备 培养室，高压灭菌锅，水浴锅，解剖刀，三角烧瓶（ 100mL ），烧杯，量筒，培养皿，棉线，接种箱或超净工作台，分析天平，长镊子，剪刀，容量瓶，移液管，牛皮纸。 （四）培养基灭菌 将配好的培养基加入琼脂加热溶解，调至 pH 5.8 ，趁热分装于 100 mL 三角烧瓶中，每瓶约 20 mL 。待培养基冷却凝固后，用一层称量纸和一层牛皮纸包扎瓶（管）口，并用棉线扎牢，然后在高压灭菌锅中 121 （ 1 kg/cm 2 ）下灭菌 20 min 。取出三角烧瓶放在台子上，冷却后备用。接种操作所需的一切用具（如长镊子、解剖刀、剪刀等）及灭菌水，需同时灭菌。 2、培养材料的消毒 （一）先将材料用流水冲洗干净，最后一遍用蒸馏水冲洗，再用无菌纱布或吸水纸将材料上的水分吸干，并用消毒刀片切成小块。 （二）在无菌坏境中将材料放入70酒精中浸泡3060秒。 （三）再将材料移入漂白粉的饱和液或0.01升汞水中消毒10分钟。（四）取出后用无菌水冲洗三、四次。 3、制备外植体将已消毒的材料，用无菌刀、剪、镊等，在无菌的环境下，剥去芽的鳞片、嫩枝的外皮和种皮胚乳等，叶片则不需剥皮。然后切成0.20.5厘米厚的小片，这就是外植体。在操作中严禁用手触动材料。4、接种和培养（一）接种在无菌坏境下，将切好的外植体立即接在培养基上，每瓶接种410个。 （二）封口接种后，瓶、管用无菌药棉或盖封口，培养皿用无菌胶带封口。 （三）温度培养基大多应保持在25左右，但要因花卉种类及材料部位的不同而区别对待。 （四）增殖外植体的增殖是组培的关键阶段，在新梢等形成后为了扩大繁殖系数，需要继代培养。把材料分株或切段转入增殖培养基中，增殖培养基一般在分化培养基上加以改良，以利于增殖率的提高。增殖1个月左右后，可视情况进行再增殖。 （五）根的诱导 继代培养形成的不定芽和侧芽等一般没有根，必须转到生根培养基上进行生根培养。1个月后即可获得键壮根系。5、组培苗的练苗移栽 试管苗从无菌到光、温、湿稳定的环境进入自然环境，必须进行炼苗。一般移植前，先将培养容器打开，于室内自然光照下放3天，然后取出小苗，用自来水把根系上的营养基冲洗干净，再栽入已准备好的基质中，基质使用前最好消毒。移栽前要适当遮荫，加强水分管理，保持较高的空气湿度（相对湿度98左右），但基质不宜过湿，以防烂苗。 三、植物组织培养的优点1、占用空间小，不受地区、季节限制。2、培养脱毒作物。3、培养周期短。4、可用组培中的愈伤组织制取特殊的生化制品。5、可短时间大量繁殖，用于拯救濒危植物。6、可诱导之分化成需要的器官，如根和芽。7、解决有些植物产种子少或无的难题。8、不存在变异，可保持原母本的一切遗传特征。9、投资少，经济效益高。10、繁殖方式多，试用品种多。近50年来，植物组织培养已渗透到生物学的各个领域，广泛应用于农业、医药业、林业和工业，并产生了巨大的经济效益和社会效益，成为生物学的重要研究技术和当代生物