水稻根系活力测定.doc

一、水稻根系活力测定 1. 水稻根系流液的测定（1） 测定意义 水稻根伤流液的多少与根系活力有密切的关系，在一定时间内测定伤流液的重量，是衡量根系活力的一个较为简便的方法。（2） 测定方法 选用一端封闭，一端开口的很薄的塑料套管，管内放进少时脱脂棉（在天平上称得重W2），两次重的差数，代表一定时间内（t）的伤流量，并按下式计算：伤流量（g/小时）=（W1-W2）/t（3） 注意事项 如果没有合适的塑料套管，可以自己制作，直径大小出切口直径稍大一点，使能自由套昆为度。水稻伤流量较少，套管的长度一般2-3cm即可。用塑料薄膜根据所需大小栽成小片，在需要合缝的地方折迭起来上面紧贴上玻璃纸，而后将烧燃的烙铁在纸上前后左右移动，检查套管不漏气即可使用。 收集伤流液在一天当中的最适时间随植物种类和环境条件而异，一般最好在上午进行。 套管理与地上部切口套管理接之处，一般不须密封。一则可省去手续上的麻烦，二是水分从套接的地方蒸发的机会微不足道，不影响测定结果。2. 水稻根系氧化的测定（a-萘胺法）（1） 测定意义：水稻根系的氧化力除了叶部吸收的氧转入根部外，根部还有一条乙醇酸氧化途径，这条途径可产生过氧化验氢，以后在过氧化酶的作用下产生氧，是水稻根产生氧化力的一条特殊代谢途径，由于水稻根有氧化力，可氧化土壤中有害的还原物质，从而保证了根的正常代谢。据试验报道，当根氧化力增大时，根的有氧呼吸较旺盛，吸收养料也较多。根的a蔡胺氧化力可作为水稻根系活力的一个重要指标。（2） 原理与方法 a-蔡胺吸附在水稻根表面时，能被根系氧化，生成红色羟基蔡胺，故可从根表面染争的深浅，粗略地估计根的氧化力。定时测定则是对a-蔡胺氧化前后浓度的变化进行测量。一般用对氨基苯磺酸和硝酸作显色剂，使与a-蔡胺起显争反应，生成对一碘酸-a蔡胺偶氮苯。其化学肥应如下：（3） 试剂配制 100g/ml a蔡胺标准浓液。精确称了取分析纯a-蔡胺1. 0000g，溶于1000ml蒸馏水中。充分溶解后从中吸取100ml稀释至1000ml即成100g/ml a-蔡胺溶液，保存在棕我瓶中，置于低温黑暗处。使用前稀释至40g/ml。 1%对氨基苯硫酸溶液。称1g对氨基苯磺酸，深于100ml30%的乙醇溶液中。 100ppm亚硝酸钠溶液。称0.1g亚硝酸钠于1L蒸馏水中。 0.1M磷酸盐缓冲液。同0.1M磷酸二氢 钾、0.1M氢氧化钠溶液按6. 32:3. 77的窖混合而成。此缓冲液的ph应为7. 0。 标准曲线的绘制：用吸管分别注入40g/ml a-蔡溶液于6只25ml的容量瓶中，使含量分别为0（空白）、12. 20、30、40、50、60g。加入等量的磷酸缓冲液，显色。并分别测定各溶液的光密度，绘制曲线。（4）测定方法 取具有代表性水稻植株若干，尽量避免伤根，洗去根部泥土后，再用蒸馏水淋洗，最后用吸水纸将根部水分吸干。将距根尖2cm长的一段取下，混合均交，称1g重（或沿根的基部将根部切下取混合根1g），置于100ml三角瓶中，加40g/ml a-蔡胺所引起的。把此时作为零值。为了测定这一浓度值，在根系浸入a-蔡10分钟后，立即从此平衡液中准确地吸取2ml入入25ml容量瓶中，这是第一次取样。紧接着塞好瓶塞，置于振荡器上，于25振荡3-6小时。再次从平衡液中准确地吸取2ml，放入另一25ml容量瓶中，这为第二次取样。无论哪一次取样；如溶液混浊，均须过滤。由于a-蔡胺在空气中振荡时会自动氧化，故须作空白试验。在两次取样的容量瓶中，各加入蒸馏10ml，1%对氨 基苯磺溶液和100g/ml亚硝酸钠溶液各1ml。充分摇动5分钟，使之显色，然后加蒸馏水定容，摇匀。在20-60分钟内用1cm比色杯于510nm波长或50号滤光片分别测定前后两次样品中a-蔡含量。并求得根的净a-蔡胺氧化值。一般用鲜根1g，振荡3小时，二室温下进行，但须注明温度，以便比较。（5） 结果计算 以1g鲜根，振荡3小时为例，第一次取样是根上吸附的氧化铁氧化a-萘受浓度（A）。它是酶促反应前a-萘胺的起始浓度。第二次取样是在根的酶促反应3小时后剩余的a-萘胺浓度（B）。所以（A-B）则是根的氧化量和自动氧化量之和。空白试验是a-萘胺在振荡3小时的自身氧化量（C）。溶液是等体积的40g/mla-萘胺溶液和磷酸缓冲共50ml，所以每毫升a-萘胺含量为20g/ml。X为稀释倍数。因为取样为2ml，酶促反应是在48ml的a-萘胺溶液中进行的，所以X为24。 Y=a-萘胺氧化量（微克/克鲜根/小时）3. 用根系总吸收面积和活踽吸收面积来测定根系活力（1） 原理沙比宁理论，认为植物对溶质的最初吸收具 只附的特性，并假定这时要根系表面均匀的覆盖了一层吸附物质的单分子层。因些能根据根生活费对某种物质的吸附量来测定根的吸收面积。常用甲稀兰作为被吸附物质，它的被吸附量可以根据供试液浓度的变化用比色法准确的测出。已知1mg甲烯兰单分子层占用1. 1M2的面积，据此即可求出根系的总吸收面积。当根系在甲烯兰在甲烯兰溶液中已达到吸附饱和而仍留在溶液中时，根系的活踽部分能把原来吸附的物质吸收到细胞中去，因而继续吸附甲烯兰。从后一吸附时法语出活踽吸收面积，可作为根系活力的指标。（2）材料与设备1. 250毫升量杯或量筒 2. 小瓷杯或烧杯 3. 吸水纸 4. 甲烯兰 5. 移液管（2毫升） 6. 小试管（3）实验步骤 取待测植物根系用排水法在量杯或量筒中测定根系体积 把0.0002N甲烯兰溶液（每毫升溶液中含有 0.064mg甲烯兰）分别在三个编号的小瓷杯里，每杯中溶液量约10倍于根的体积。准确记下每杯的溶液用量。 取出根系，吸水纸小心吸干根上的水分（切勿伤根），然后依次浸入盛有甲烯兰溶液的瓷杯里，在每杯中浸1分钟，迅整取出。注意每次了出根系时务必要杯沿停一下，使甲烯兰溶液从根上流回到原瓷杯中。 从三个瓷杯中名取1毫升溶液加入试管，分别稀释至10倍，再与每毫升含甲烯兰0.01,0.02,0.03,0.004,0.005,0.006mg的标准比色管进行比色，记录比色所得浓度。或在分光光度计下650nm处比色，读出光密度。然后在标准曲线上查得第毫升溶液中甲烯兰的毫克数。据些求得每杯浸入根系后溶液中剩下的甲烯兰