董河自体输血与少白细胞异体输血对肿瘤手术病人免疫功能的影响课件

自体输血与少白细胞异体输血对 肿瘤手术病人免疫功能的影响 作 者： 董 河 指 导： 王世端 教授,前言,1945年Mekawar就观察到输血可能改变受者的免疫状态，下调免疫功能。这种作用使肾移植存活率提高20%。 1981年Gantt认为异体输血对肿瘤病人有负面影响:促进肿瘤生长、转移和复发。 我们前期研究结果也证实：异体全血对免疫抑制严重。 异体血中的白细胞可能是引起免疫抑制的原因之一。,材料与方法,1. 仪 器、试 剂 滤除白细胞血袋 2U 南京生物医学工程研究所 流式细胞仪 EPICS-XL Coulter-Beckman公司 单克隆莹光抗体 CD4-FITC Coulter-Beckman公司 CD8-PE Coulter-Beckman公司 CD3-FITC Coulter-Beckman公司 CD16+CD56-PE Coulter-Beckman公司,材料与方法,2. 病 例 选 择 30例胃或结肠癌病人，全麻下行肿瘤根治术。严格筛选：无放疗、化疗、免疫抑制剂的使用，无输血史等。两组病人的平衡： 3. 实验方法及步骤 结肠癌或胃癌根治术ASA I-II级病人30例，男21例，女9例，年龄29-65岁；随机分为两组，每组15例病人；组为少白细胞异体输血组，组为急性等容血液稀释（ANH）自体输血组。,材料与方法,3.1 麻 醉 方 法 两组病人均采用统一的麻醉药物和麻醉方法以排除麻醉技术的不同对免疫功能的影响。 3.2 ANH的方法 套管针行桡动脉穿刺置管后与ACD血袋相连，采血400ml，在采血的同时，经静脉输入同量的6%羟乙基淀粉，术中回输自体血。,材料与方法,3.3 少白细胞异体血的制备 与中心血站和输血科合作。 3.4 监测指标、标本采集 (1）监测指标：CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、自然杀伤（NK）细胞。 (2) 标本采集：麻醉前、手术结束即刻、术后第1天和术后第5天。,材料与方法,3.5 流式细胞术 标本加荧光抗体、温育、溶血固定等后上流式细胞仪检测。 4.统 计 学 处 理 所有数据均以均数标准差（XS）表示。组内比较采用双因素方差分析，组间比较采用配对t检验。P0.05为差异有显著性。,结果,表1 两组病人CD3+T细胞（%）的变化（XS，n=15） 组别 麻醉前 手术结束 术后1天 术后5天 组I 70.213.1 64.015.5 57.916.5* 72.710.7 组II 72.08.5 66.110.1 63.918.7* 75.715.1 *与术前比P0.05,图1 两组病人CD3+T细胞（%）的变化（XS，n=15）,结果,表2 两组病人CD4+T细胞（%）的变化（XS，n=15） 组别 麻醉前 手术结束 术后1天 术后5天 组I 35.14.7 31.410.0 25.38.5* 39.44.9 组 II 38.56.1 33.37.5 28.24.2* 43.43.8 *与术前比，P0.05,图2 两组病人CD4+T细胞（%）的变化（XS，n=15）,结果,表3 两组病人CD8+T细胞（%）的变化（XS，n=15） 组别 麻醉前 手术结束 术后1天 术后5天 组 I 35.515.1 30.08.0 29.08.4* 32.010.5 组 II 33.613.6 31.23.5 29.66.2* 30.814.6 *与术前比，P0.05,图3 两组病人CD8+T细胞（%）的变化（XS，n=15）,结果,表4 两组病人NK细胞（%）的变化（XS，n=15） 组别 麻醉前 手术结束 术后1天 术后5天 组I 17.010.7 20.112.1 11.25.3* 15.58.6 组II 15.39.5 18.812.4 9.74.7* 13.15.6 *与术前比，P0.05,图4两组病人NK细胞（%）的变化（XS，n=15）,讨论,1. 免 疫 功 能 的 监 测 指 标 1.1 T淋巴细胞：在人体免疫系统中特别是细胞免疫中，承担着重要的功能。在机体抗感染、抗肿瘤及免疫损伤方面起着重要作用，主要亚群: CD3+T细胞、 CD4+T细胞、CD8+T细胞。,讨论,1.2 自然杀伤（NK） 细胞：是原始杀伤淋巴细胞，无抗原识别受体，无MHC限制性，不依赖抗体，能直接杀伤肿瘤细胞和病毒感染细胞。已证实NK细胞在防止肿瘤细胞扩散方面具有重要的作用。,讨论,2 . 流式细胞术(FCM) 传统技术：采用固定标本，在荧光显微镜下肉眼观察。（主观性大） FCM技术：采用流动的单细胞悬液定量分析，同时借鉴激光技术，荧光显微镜技术、单克隆抗体技术，计算机技术。,讨论,3. 异体输血对免疫功能的影响 异体血引起免疫抑制的机理还不十分清楚，一般认为与异体血中的白细胞及血浆成分有关。并可能通过主要组织相溶性复合体、T细胞及自然杀伤细胞数目、细胞因子、转化生长因子、 等途径导致免疫抑制。所以祛除异体血中的白细胞是免疫保护的一条重要途径。,讨论,4 自体输血(Autotransfusion) 自体输血是指采集病人的血液或经过保存，以备围手术期使用。应用自体输血技术，可减少手术中的实际失血量，相应减少异体血的输入或者不输入异体血，从而降低因输入异体血而发生的各种不良反应及血源性疾病传播的机会，同时可以缓解血源紧张并降低医疗费用。自体输血分为预贮式、回收式、及稀释式三种形式。,讨论,目前多采用稀释式自体输血，优点：术中流失的是稀释的血液，相当于减少了出血，同时还能降低血液粘稠度，改善微循环。