重组乙肝疫苗的研究课件

重组乙肝疫苗的研究,主讲人：陶长寿,组员：周庆科 兰榆坤 张娜 陶长寿 尹秀,指导老师：胡昌华,5,乙肝疫苗的未来发展,1,3,4,6,重组乙肝疫苗的种类及生产现状,重 组 乙 肝 疫 苗 的 工 艺 路 线,参 与 竞 争 的 主 要 公 司,现有乙肝疫苗存在的问题及优化改进的研究,2,乙 肝 以 及 乙 肝 疫 苗 的 研 究 历 史,成 员 安 排,7,目 录,乙 肝,乙型病毒性肝炎是由乙型肝炎病毒引起的一种疾病。发展中国家发病率高，据统计，全球约20亿人曾感染过HBV，每年约有100万人死于HBV感染所致肝肝衰竭、肝硬化和原发性肝癌（HCC），全世界无症状乙肝病毒携带者超过2.8亿,我国约占1.3亿。多数无症状，其中1/3出现肝损害的临床表现。目前我国有乙肝患者3000万。乙肝的特点为起病较缓，以亚临床型及慢性型较常见。本病主要通过血液、母婴和性接触进行传播。,什么是乙肝呢？,乙肝：乙型病毒性肝炎，简称乙肝，是一种由乙型肝炎病毒（HBV）感染机体后所引起的疾病，分急性和慢性两种。,HBV不仅能引起急性肺炎、慢性肺炎，更为严重的是它与肝硬化、肝癌的发生有密切关系。,临床主要表现为食欲减退、恶心、厌油、巩膜黄染、黄色尿、肝脏肿大、肝区痛等。,乙肝的防治,乙肝的治疗 最大限度地长期HBV，减轻肝细胞炎性坏死及肝纤维化，延缓和减少肝脏失代偿、肝硬化、HCC及其并发症的发生，从而改善生活质量和延长存活时间。,乙肝的预防 接种 乙肝疫苗 是预防乙肝病毒感染最有效的方法,乙肝疫苗的研究历史,血源性乙肝疫苗： 此疫苗是用无症状的 HBsAg携带者的血液 制成,基因重组乙肝疫苗： 应用基因工程技术把编 码HBSAg基因插入酵母 菌基因组制成,DNA 疫苗 联合疫苗 未来新型疫苗的发展方向 目前仅停留在动物实验 阶段,血缘性疫苗是采用无症状HBsAg携带者的血浆并提纯，然后采用胃酶、尿素、甲醛三步化学灭活制备而成。 重组疫苗是将编码诱导保护性免疫应答的结构抗原决定簇的病毒基因插入作为表达载体的DNA分子中，然后将载体导入细胞，使之表达编码病毒抗原的基因。其价廉、安全、制备容易且可大批量生产，且与血源性疫苗具有相同的免疫源性，至今已渐取代血源疫苗。 乙肝疫苗的发展为预防和治疗乙肝起到了巨大的作用，从传统的血源疫苗发展到目前普遍采用的重组乙肝疫苗,重组乙型肝炎疫苗的种类及现状,重组乙肝疫苗：由重组酵母或重组CHO工程细胞表达的乙型肝炎表面抗原，经纯化、灭活及加入佐剂吸附制成的疫苗。 目前重组乙肝疫苗主要分为酵母表达疫苗，（酿酒酵母和甲基营养型酵母）以及中国仓鼠卵巢细胞（CHO）表达疫苗。,重组酵母乙肝疫苗,重组酵母乙肝疫苗是借助基因工程技术，使酵母细胞表达重组的乙型肝炎病毒表面抗原(HbsAg)，经纯化并加佐剂吸附而制成，一种预防乙型肝炎的疫苗 。,优点：酵母为低等真核微生物，易于在营养成份简单的培养基中高密中发酵培养，利用工业化生产，表达量高，目前世界上大规模生产和上市的疫苗大多数由该表达系统制备而成。,缺点：酵母不能模拟蛋白在人体肝细胞中的翻译后修饰、蛋白折叠、大分子组装以及糖基化。,重组（CHO）乙肝疫苗是采用哺乳动物细胞表达系统建SFDA的技术路线，20世纪80年代国内外学者对其展开了研究，采用中国仓鼠卵巢细胞，用基因工程技术将乙型肝炎表面抗原基因片段重组到中国仓鼠卵巢细胞(CHO)内，通过一定工艺制成的，疫苗外观有轻微乳白色沉淀。 优点：CHO细胞表达的重组HepB是高等真核细胞表达产物，其天然结构较低等的真核细胞酵母表达的HBsAg蛋白更适合人体吸收，生产过程中不同于酵母使用硫氰酸盐处理，安全性好。,重组CHO乙肝疫苗,重组乙肝疫苗的工艺路线,重组酵母乙肝疫苗的工艺路线,（菌种制备以及发酵过程）,（分离纯化过程）,重组CHO乙肝疫苗的工艺路线,取细胞株,收集培养液,旋转培养至抗原分泌量达1.0mg/L,硫酸铵盐析,密度梯度离心,色谱纯化,浓缩,除菌过滤,甲醛灭活,AL(OH)3吸附,分装,注：选取的细胞株是国家批准的重组CHO乙型肝炎疫苗的细胞株,目前，全球约有20家企业被世界卫生组织认定为疫苗生产商，然而疫苗市场实际上被4家跨国企业所垄断，这4家公司掌握着全球约34的疫苗市场。,葛兰素史克公司,Engerix-B 由Biogen公司与英国的Edinburgh大学共同研发酵母菌制造乙肝疫苗技术，并授权史克必成公司销售其产品。,Fendrix,Engerix-B,葛兰素 史克公司 生产的疫苗,本品是葛兰素史克公司集乙肝疫苗Engerix-B 超过15年的经验的基础上研制而成的。本品的几何平均滴度(GMTs)更高，抗体存在的时间更长。,赛诺菲巴斯德公司,赛诺菲 巴斯德,HBvaxPRO,Procomvax,默克公司,由默克公司销售的乙肝疫苗技术来自Chiron公司，它是在美国推一能与EngerixB竞争的产品。 1992年的Recombivax销售额为09亿美元，1996年为44亿美元，其中重组酵母菌乙肝疫苗和血源乙肝疫苗各占50，1999年为3.1亿美元；在世界畅销的处方药中排字第147位，销售额比1998年增长69。,其它公司生产的CHO表达基因重组乙肝疫苗： 法国巴斯德研究所的Gen Hevac B 以色列 Bio-Technology General公司的Bio-Hep-B 瑞士的Hepreeombe等。,我国生产的基因乙肝疫苗有两种： 一种是从默克公司引进的酵母基因工程乙肝疫苗, 另一种是1991年中国预防医学科学院病毒学研究所联合长春生物技术研究所等单位研制成功哺乳动物（CHO）细胞表达的基因工程疫苗，,国内公司情况 :,前几年,重组乙型肝炎疫苗(酿酒酵母),北京天坛生物,深圳康泰,GKS,大连汉信,华兰生物,成都生物研究所,武汉生物研究所,华北制药,北京华尔盾,长春生物研究所,兰州生物研究所,重组乙型肝炎疫苗(汉逊酵母),重组乙型肝炎疫苗(CHO细胞),国内公司情况 :,治疗性乙肝疫苗上市公司：重庆啤酒、天坛生物、广州药业 从事乙型肝炎疫苗业务的上市公司主要有广州药业、重庆啤酒、通化东宝、华兰生物、天坛生物等。,天坛生物(600161),广州药业(600332),通化东宝(600867),重庆啤酒(600132),华兰生物(002007),DNA疫苗或于2015年上市,多肽疫苗吸引力强,Y型PEG类干扰素尚有不确定性,重组乙型肝炎疫苗通过GMP认证,重组酵母乙型肝炎疫苗,2010,2011,现有乙肝疫苗存在的问题及优化改进的研究,(一). 现有疫苗剂量和免疫策略函待改进 (二). 临床试验不规范 (三). 首针及时率和全程覆盖率急待提高 (四). 疫苗企业注册标准和说明书存在的问题 (五). 不良反应(SAE)无有效的报告、 鉴别、处理以及反馈 制度；(网络) (六). 加强科研,图.成人5g/剂国产酵母疫苗免疫效果(检定所), 应增加生产高剂量酵母乙肝疫苗以满足成人需要,成人乙肝疫苗免疫效果,应加强计划免疫外人群的疫苗接种,1 现有疫苗剂量和免疫策略函待改进,成人与儿童乙肝疫苗免疫持久性比较,中国公共卫生杂志,乙肝疫苗免疫后抗HBs阳转率与年龄的关系 免后 儿童 成人 时间 阳转率（%） 阳转率（%） 7 97.34 83.3 12 90.00 69.6 24 77.99 32.7 36 71.44 20.8 48 65.69,成人乙肝疫苗免疫效果,中华预防医学杂志,乙肝疫苗免疫后抗HBs阳转率与年龄的关系 免疫后 35岁 35岁 时间（月）人数 阳转数（%） 人数 阳转数（%） 3 63 23 36.5 57 19 33.3 7 61 54 88.5 53 41 77.4 12 62 52 83.9 54 28 51.9* 24 54 21 38.9 53 14 26.4 36 50 14 28.0 46 6 13.0,2 临床试验不规范,解决方法：疫苗临床试验指导原则 2004年10月执行,1.试验设计 2.试剂质量水平低,统计分析方法不规范 3.操作不规范 4.未进行真正意义上的IV期临床试验,3 计免疫苗首针及时率和全程覆盖率急待提高 管理、宣传、组织 新型减少针刺、缓释、控释疫苗及联合疫苗的研发和推广 4 疫苗企业注册标准和说明书存在的问题 目前的企业标准以国家标准为最高标准 使用说明书缺乏信息 5 不良反应管理制度亟待完善,6 加强科研,加强 科研,函待深入研究病毒与宿主的相互作用机制,病毒感染后的自然史,病毒变异和基因型与临床转归和疫苗效果的关系,. 影响现有乙肝疫苗效果因素分析; 病毒体液免疫; 细胞免疫位点变异的影响; 无应答人群的遗传背景研究；,研究新型佐剂和控释系统，开发研制新型减少针次的预防性疫苗和治疗性疫苗。,乙肝疫苗的未来发展,传统疫苗受制作工艺的限制，其保存、使用和接种副反应等方面都容易出现一些问题。其特点主要有三点：以完整的病原体作为抗原、在身上容易获得抗原、灭活不好会导致感染。,如何解决呢？,联合疫苗,治疗性疫苗,针对传统疫苗的不足，进一步研究，发展出联合疫苗及治疗性疫苗，它们克服传统疫苗的不足同时也有自身的优点。,联合疫苗是指由多种抗原混合制成的疫苗，包括两大类：一类是由多种病原的抗原组成的多联疫苗，可预防多种疾病，如“百白破疫苗”等；一类是由同一细菌或病毒的不同亚型或血清型组成的多价疫苗，如“价肺炎球菌疫苗”等。 优点：减少注射针次； 接种副反应少； 提高接种覆盖率 联合疫苗代表了未来疫苗的发展方向。通过对联合疫苗的生产技术、临床评价以及使用时的接种程序等方面问题的不断探索，相信越来越多的集便捷、舒适、安全、有效于一体的联合疫苗将用于免疫预防 。,联合疫苗 VS 传统疫苗,治疗性疫苗 VS 传统疫苗,治疗性疫苗是指在已感染病原微生物或已患有某些疾病的机体中，通过诱导特异性的免疫应答，