高效液相色谱仪操作规程-岛津.doc

东莞市食品药品检验所作业指导书文件编号版本/修订号第6版/第0次修订 岛津LC-20AT高效液相色谱仪 操作维护规程页 数第5页 共 5 页1 技术参数LC-20AT低压梯度泵梯度方式：低压混合 混合溶剂数：4液 混合浓度准确度：1%以下SIL-20AC自动进样器：进样量：0.1L100L进样量准确度：1%以下进样量精密度：RSD：0.3%以下（10mL 进样时指定条件下）2 适用范围 适用于药物的分离、定性、定量分析3 操作步骤3.1 仪器组成：由DGU-20A5脱气机、LC-20AT低压梯度泵、SIL-20AC自动进样器、CTO-20A柱温箱、SPD-20A紫外-可见检测器、RF-20A荧光检测器、CBM-20A系统控制器、LC Solution工作站等组成。3.2 开机 在开机之前，根据所做样品的方法要求，准备好所用流动相，标样及样品。流动相抽滤后超声脱气15分钟，标样和样品0.45um膜过滤。接通电源，依次开启A泵、B泵、柱温箱、自动进样器、检测器、系统控制器，待泵和检测器自检结束后，打开电脑显示器、主机，启动工作站软件。泵排空操作：打开LC-20AT泵排空阀（逆时针90度以上），按Purge键，泵开始排空运行。检查流动相入口Teflon管路没有气泡后，再按Purge键停止排空。自动进样器排气操作：按Purge键，自动进样器开始排气，系统默认排气时间为25min，且自动进样器排气过程中可同时进行其他操作。（除进样外）压力调零：按LC-20ATvp泵Func键选择CONTROL 项，按FUNC键直至屏幕显示 *ml ZERO ADJ项，按Enter键，再按CE键，即完成调零。然后关紧排空阀（顺时针旋紧）。再双击OperationAnalysis 14进入实时分析窗口：（根据不同的检测器选择）在开机画面中，User ID选中Admin，不需输入Password，点击OK（可听到峰鸣一声） 在下面操作中AB表示在A菜单下选择B，以此类推。选中表示在中打号。3.3参数设置在左侧助手栏给出了引导顺序操作的图标，自上而下顺序执行即可：（可以跳过执行）System configuration系统配置（第一次安装或更换检测器时配置，通常跳过不操作）System Check编辑仪器检查参数：并且RUN运行检查。通常不操作（跳过）点击Data acquisition进入采集数据编辑方法界面点击Instrument Parameter进入仪器参数设置界面：选中Normal（通用简单）或Advanced（高级详细）项，分别设定Pumps泵参数，Oven柱箱参数，Detecter检测器参数，Controller系统控制器参数，Time Program时间程序参数等。仪器配置不同，控制单元项的数目多少不同。Pumps泵参数：Mode控制方式，Flow流速，B，C，D Conc各项浓度，P Max最大压力Oven柱箱参数：Oven设定温度，T Max最大保护温度Detecter检测器参数：Cell设定池温。Wavelength设定波长。Controller系统控制器参数：Data acquisition选中Acquisition Time后，设置分析时间，等等LC Time Prog时间程序参数：编辑泵梯度洗脱程序，也可以控制柱箱，检测器，等等。点击MethodData Analysis Parameter编辑积分参数：设置 Width峰宽，Slope斜率，Min Area最小峰面积等等。新建方法推荐使缺省值，待分析完样品后再设置此项参数，得到优化的色谱数据结果后，将参数保存在当前方法中。保存方法：点击FileSave Method as起文件名*保存后，该方法即作为当前运行的方法。下载方法：点击Down Load 键，向仪器传送参数。3.4运行方法：点击图标（Instrument On/Off 系统 开/关）系统开始运行，检查各单元参数应与方法设定一致。等待系统平衡。一般情况下，由于流动相不同，交换平衡时间不定。可以观察Detecter检测器吸收变化,如果吸收值稳定不变，即认为接近平衡，可以调零等待，确认不变后，准备进样分析。可以通过改变衰减或予览基线观察基线变化，待基线平稳，准备进样操作。3.5进样分析：单针进样分析：点击Single Start图标：编辑样品参数：Sample ID样品信息，Method Name 方法文件名，Data Path 数据存储路径，Data Name 数据文件名，Vial样品瓶号(无)，Tray#架号(无)，Injection进样量等。点击OK后，开始进样操作。（重复单针进样，重复执行此步骤即可）每个样到时间分析结束，根据方法中的积分参数，所有色谱数据会自动进行积分处理。批量分析：点击批处理图标 Batch Processing，点击New新建批处理文件，点击向导Wizard，设定新建、文件方法、试样开始位置、进样量，点击下一步；设定试样名、试样瓶数、进样次数，并选择是否打印报告后，点击完成。待系统平衡，基线稳定后，点击批处理开始图标Batch start即可。需变更在执行中的分析时间时，点击分析时间变更图标，设定数值。需分析中止时，点击中止图标。需批处理分析暂停时点击暂停/重开图标，可对批处理表进行变更，点击暂停/重开图标（批处理实时分析重新开始）。3.6报告预览和打印：点击Top 返回上级引导操作栏。点击Post Run Analysis 进入数据后处理界面：点击report 进入报告界面：点击report format 进入格式界面：调入报告格式文件，也可以自己编辑报告格式然后点击Data打开数据文件，将左侧数据文件拖入右侧报告栏即可。关于报告格式，可以通过内容选择图标，在报告中确定位置后，添加即可。右键功能很强大，用户可以参考说明书灵活使用。选择快捷图标的预览或打印图标执行报告预览或打印。3.7关机步骤：更换洗液清洗流路系统（如用缓冲液，先用水清洗1小时，再用有机溶剂清洗30分钟以上），最后用有机溶剂封存。清洗结束后，停止系统运行，在LC SOLUTION工作站中，按Instrument on/off键即停止所有单元工作。退出LC SOLUTION（可听到峰鸣一声），再完全退出。关系统控制器CBM-20A电源开关关主机SPD-20A（或RF-20A）检测器，LC-20AT泵，CTO-20A柱箱电源开关。 清洗流路系统要求：如果使用缓冲液，先用水更换缓冲液，清洗1小时，然后更换甲醇清洗40分钟，如果使用有机溶剂（水），直接更换甲醇清洗40分钟即可。4 注意事项4.1如果使用前色谱柱中保存的流动相为纯甲醇或纯乙腈，而新流动相中含有缓冲盐时，应先用纯水冲洗色谱柱十分钟左右再使用流动相，以免盐析出损坏系统。4.2流动相的pH值应在2.39.5之间。如系统为正相和反相交换使用，应先将所有管路用异丙醇清洗后再更换新流动相使用。四氢呋喃和氯仿等不可长期停留在塑料管道内。4.3流动相应过滤，不要使用存放超过两天的水相。液相本身的溶剂过滤头不能超声。4.4注意不同厂家接头问题，防止漏液和损坏柱子或接头。4.5检测器的灯应节约使用时间，但不要频繁开关灯。必要时进行波长校准，废液管不可以剪短。5 仪器维护5.1 每三个月至少清洗一次溶剂过滤头（35%硝酸浸泡1小时后用水冲洗至中性）5.2 根据情况更换purge阀内的滤芯（纯水5ml/min排液时，压力超过10Bar应更换）5.3 经常使用盐溶液时，定期用水冲洗所有通道。5.4 保持自动进样器的传动杆、针座的清洁，平时关门防尘。5.5 定期进行仪器的诊断程序，检查仪器状态。6 期间核查6.1 在两次检定之间，如较长时间不用，或使用过程中发现有可疑现象时，应对本仪器进行期间核查。6.2 采用与本所另外的液