物质鉴定实验及改进.doc

【实验】生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定（附实验改进）斐林试剂鉴定可溶性还原糖斐林试剂由质量浓度为0.1 g/mL的氢氧化钠溶液和质量浓度为0.05 g/mL的硫酸铜溶液配制而成,二者混合后,立即生成淡蓝色的Cu(OH)2沉淀。Cu(OH)2与加入的葡萄糖在加热的条件下,能够生成砖红色的Cu2O沉淀,而葡萄糖本身氧化成葡萄糖酸。本实验中，用斐林试剂只能检验生物组织中还原糖存在与否，而不能鉴定非还原性糖。现象：溶液的颜色变化过程为:浅蓝色 棕色 砖红色(沉淀)。本实验最理想的实验材料是含糖量较高的生物组织(或器官),而且组织的颜色较浅,或近于白色的,如苹果和梨的果实。斐林试剂的配制：甲液质量浓度为0.1 g/mL的氢氧化钠溶液；乙液质量浓度为0.05 g/mL的硫酸铜溶液使用时临时配制,将45滴乙液滴入2 mL甲液中,配完后立即使用用于鉴定脂肪的实验材料准备：实验材料最好选择富含脂肪的种子,如花生种子(取其子叶)。供实验用的花生种子,必须提前浸泡34 h。浸泡时间短了,不容易切成片浸泡时间过长,则组织太软,切下的薄片不易成形。现象：苏丹染液遇脂肪的颜色反应为橘黄色,苏丹染液遇脂肪的颜色反应为红色。因苏丹染液与脂肪的亲和力比较强,所以,染色的时间应比较短,一般为1 min左右。蛋白质的鉴定原理：鉴定生物组织中是否含有蛋白质时,常用双缩脲法,使用的是双缩脲试剂。双缩脲试剂的成分是质量浓度为0.1 g/mL的氢氧化钠溶液和质量浓度为0.01 g/mL的硫酸铜溶液。蛋白质可与双缩脲试剂发生紫色反应。用于鉴定蛋白质的实验材料准备：实验材料最好选用富含蛋白质的生物组织(或器官),如大豆,鸡蛋清。如用大豆,必须提前浸泡12 d,这样容易研磨成浆（也可用现成的豆浆）。如用鸡蛋清，要先稀释。双缩脲试剂的配制：取10 g氢氧化钠放入量筒中,加水至100 mL,待充分溶解后倒入试剂瓶中,配成质量浓度为0.1 g/mL的氢氧化钠溶液,瓶口塞上胶塞,贴上标签,写上试剂A。取1 g硫酸铜放入量筒中,加水至100 mL,待充分溶解后倒入试剂瓶中,配成质量浓度为0.01 g/mL的硫酸铜溶液(蓝色)。瓶口塞上胶塞,贴上标签,写上试剂B。注意：（1）关于鉴定还原糖的实验，在加热试管中的溶液时，应该用试管夹夹住试管上部，并放入盛开水的大烧杯中加热。注意试管底部不要接触烧杯底部，同时试管口不要朝向实验者，以免试管内溶液沸腾时冲出试管，造成烫伤。如果试管内溶液过于沸腾，可以上提试管夹，使试管底部离开大烧杯中的开水。（2）做鉴定还原糖和蛋白质的实验时，在鉴定之前，可以留出一部分样液，以便与鉴定后的样液的颜色变化作对比，这样可以增强说服力。（3）斐林试剂的甲液和乙液混合均匀后方可使用，切勿将甲液和乙液分别加入组织样液中检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质的实验的改进长沙市第十六中学 王扬利检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质的实验，是高中老教材中的第一个实验，也是新教材中的第二个实验。初中实验以形态解剖学实验为主，高中实验以生物化学实验为主，这个实验实现了这种内容的转变。由于是第一个生化实验，学生的期望值和积极性极高。一、原实验的不足1、需要水浴加热2分钟。如果教师不提前准备好热水加温过程更长。2、没有对照实验，没有对照怎么能证明水浴加热后的砖红色沉淀就是还原糖还原而成，为什么不可能是Cu(OH)2自身分解产生的呢？ 3、脂肪鉴定实验中，显微镜的操作、子叶切片都需要很长时间。特别是对于才进高中的学生而言，要求所有的学生都能熟练运用徒手切片技术也不现实。4、在学生对生物染色剂的染色特性了解不深的情况下，很难指出显微镜下哪些黄色或红色的东西就是脂肪。二、实验的改进之处1、选生活中常见且操作起来很方便的液态状的牛奶，替换书上的苹果、花生和鸡蛋三类实验材料，节省实验时间与消耗，2、减少实验器材的使用，从而简化实验过程。如：不使用水浴加热、不使用显微镜等。3、改进实验方法，节省时间与试剂。如：糖的鉴定中，使用两只试管同时直接加热法，实验只需几滴斐林试剂，且反应也只有约30秒，这样既节省了时间与试剂，而且起到了很明显的对照作用。4、改验证实验为探究实验。如：给予食用油与水，用苏丹染色观察现象。三、教学过程1、 给予实验任务 现有一瓶“牛奶”，请学生用实验来探究牛奶中是否含有说明书中所说的糖、蛋白质、脂肪三类成份。 2、还原性糖实验21实验原理：牛奶中的乳糖是一种醛糖（由葡萄糖+半乳糖构成），能还原斐林试剂（0.1% NaOH,5% CuSO4）中的Cu2+产生砖红色Cu20沉淀。22实验过程取2块试管，编号水、牛奶；滴加4滴斐林试剂A液，再滴加4滴斐林试剂B液，摇匀；再分滴加7滴水、牛奶摇匀；同时用两个试管夹夹着在酒精灯上均匀加热30秒；观察并记录现象（牛奶显现砖红色）。3、蛋白质实验31实验原理：牛奶中富含酶、磷蛋白等蛋白质，其中肽链中的-CO-NH-能在NaOH溶液中与CuS04稀溶液（1%）产生紫色，因而证明蛋白质存在。32实验过程取2支试管，编号。分别注入约1/8试管水、牛奶；再分别注入1/8试管双缩脲试剂A，摇匀；再分别向试管中加入34滴双缩脲试剂B液，摇匀；观察并记录现象。（牛奶显现紫色）4、脂肪实验41实验原理：牛奶中的奶油和维生素D等是含量丰富的脂类物质，它们可被苏丹染液染成橘红色颗粒。42实验过程取过滤纸一片，等距编号：水、食用油、牛奶；分别滴加2滴水、食用油、牛奶于相应处；分别滴加1滴苏丹于3处，染色3分钟；观察并记录现象（水显红色；