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文档简介

目录,一实验目的,了解荧光分光光度法测定多维葡萄糖粉中维生素B2的原理和方法； 掌握荧光分光光度计的使用。,二、实验原理,物质发出的荧光强度If与物质为激发荧光而吸收紫外光强度Ia的关系式为： If=YqIa 式中：Yq为荧光量子效率；Ia为吸收强度，与物质浓度成正比：Ia=kc，则If=kc. 维生素B2（又叫核黄素，VB2）是橘黄色无臭的针状结晶，其结构式为：,维生素B2易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。维生素B2溶液在430440 nm蓝光的照射下，发出绿色荧光，荧光峰在535nm。维生素B2在pH=67的溶液中荧光强度最大，在pH=11的碱性溶液中荧光消失，所以可以用荧光光度法测维生素B2的含量。,多维葡萄糖中含有维生素B1、B2、C、D2及葡萄糖，其中维生素C和葡萄糖在水溶液中不发荧光，维生素B1本身无荧光，在碱性溶液中用铁氰化钾氧化后才产生荧光，维生素D2用二氯乙酸处理后才有荧光，他们都不干扰维生素B2的测定。 维生素B2在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为光黄素，光黄素的荧光比核黄素的荧光强的多，故测维生素B2的荧光时溶液要控制在酸性范围内，且在避光条件下进行。,三、实验仪器与试剂,LS-45型荧光光度计，10mL移液管（有刻度）1支，5mL移液管（有刻度）2支，50 mL容量瓶7只，0.01g/L维生素B2标准溶液，冰乙酸，多维葡萄糖粉试样。,四、实验步骤,1、LS-45型荧光分光光度计的使用： 开机，开仪器电源，预热约10min后开计算机电源； 仪器初始化完毕后，在工作界面上选择测量项目，设置适当的仪器参数：设置激发波长为440nm，发射波长为540 nm，灵敏度=2，入射缝宽和出射缝宽均为10nm，点击“测本底值”，测得本底值为1.41。,2、样品测定： （1）标准系列溶液的配制及标准溶液荧光强度的测定： 在6个干净的50 mL容量瓶中，分别吸取0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL维生素B2标准溶液，各加入2.0ml冰乙酸，稀释至刻度，摇匀。得到不同浓度的溶液分别是：0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0ug/mL的维生素B2溶液，从稀到浓测量系列标准溶液的荧光强度。,（2） 未知试样的测定： 称取约0.10g多维葡萄糖粉试样,用少量水溶解后转入50 mL容量瓶中，加2.00 mL冰乙酸，稀释至刻度，摇匀。用测定标准系列时相同的条件，平行测量其荧光强度3次。,使用时，直接删除本页！,精品课件，你值得拥有！,精品课件，你值得拥有！
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