血栓与止血试验.ppt

,血栓与止血检验,临床血液学和血液检验,【学习目的和要求】,1掌握血栓止血的筛选试验、血小板检验、凝血因子检验和纤溶活性检验。 2了解血液流变学检验。.了解纤维蛋白溶解系统及血液流变学。,第一节 血栓与止血筛选检验,一期止血筛选检验,二期止血缺陷的筛选检验,共同途径筛选检验,纤溶活性增强筛选检验,一期止血,出血时间（bt） 血小板计数（plt）,检验,一期止血筛选检验出血时间,【原理】 是指刺伤毛细血管后自然出血到自然止血所需的时间。 主要用于检测毛细血管结构和功能、血小板数量和质量以及两者之间相互作用的影响。,出血时间（bleeding time, bt）,一期止血筛选检验出血时间,【方法】 血压40mmhg，刀片长6mm，刺入皮肤深度1mm，肘前窝下5cm尺侧皮肤。,一期止血筛选检验出血时间,【参考值】6.882.08min,【临床意义】 bt延长见于血管性血友病； 血管壁结构异常； 血小板明显减少或增多症； 血小板功能异常；严重缺乏血浆某些凝血因子、dic等；纤溶亢进症；药物干扰，如乙酰水杨酸、潘生丁等。 bt缩短见于血栓前状态和血栓性疾病；药物如促红细胞增多症等。,一期止血筛选检验出血时间,【原理】 计数单位容积内血小板的含量 【方法】 普通光镜直接计数法 相差显微镜直接计数法 参考方法 血分析仪法,血小板计数（platelet count,plt 或blood platelet count,bpc ）,一期止血筛选检验血小板计数,【参考值】 100300g/l 【临床意义】 减低见于血小板生成减少；血小板破坏过多；血小板消耗过多。 增多见于慢性粒细胞性白血病、真性红细胞增多症、急性化脓性感染、急性出血后及脾切除手术后等。,一期止血筛选检验血小板计数,一期止血的筛检试验临床意义 bt plt 原因 延长 减少 血小板减少 延长 增多 血小板增多 延长 正常 血小板功能缺陷 延长 正常 血管异常 正常 正常 血管脆性增加,一期止血筛选检验临床意义,二期止血,一期止血,二期止血筛选检验, tf +ca2+ + tf +ca2+ +pf3 +ca2+ +pf3 ,aptt,内源性凝血途径,共同途径,二期止血筛选检验,二期止血缺陷的筛选检验,全血凝固时间 活化部分凝血活酶时间 凝血酶原时间,离体静脉血发生凝固所需要的时间反映内源凝血途径功能。 活化凝血时间（activated clotting time,act）（最敏感） 硅管法（较敏感） 普通试管法,二期止血筛选检验全血凝固时间,全血凝固时间（coagulation time,ct),【原理】 向血浆中加入足量激活剂（白陶土）和部分凝血活酶（脑磷脂）和ca2+，从加入到血浆凝固所需的时间。,二期止血筛选检验活化部分凝血活酶时间,活化部分凝血活酶时间 （activated partial thromboplastin time, aptt）,【方法】 手工法参考方法 仪器法：光学法（比浊法）、电流法、磁珠法,二期止血筛选检验活化部分凝血活酶时间,【质量控制】 标本采集和处理 患者准备停药1周以上;抗凝剂：0.109m枸椽酸钠，1:9;采血：止血带、容器、一针见血;立即分离血浆、室温f 易失活，2h内完成。 激活剂：白陶土（此时aptt又称kaolin partial thromboplastin time, kptt ）,硅藻土、鞣花酸。 部分凝血活酶（脑磷脂）,二期止血筛选检验活化部分凝血活酶时间,【参考值】2535s 【临床意义】 aptt结果超过正常对照10s以上的即为延长。 是目前推荐应用的内源性凝血系统的筛选试验。是监测肝素的首选指标。治疗时aptt维持在正常对照1.53。 0 延长：内源性凝血途径和共同途径因子减少或缺乏；血中含有抗凝物质；纤溶亢进等。 缩短：见于高凝状态，如dic的高凝血期等；血栓性疾病。,二期止血筛选检验活化部分凝血活酶时间,【原理】 向血浆中加入足量的组织凝血活酶（tf）和ca2+，从加入到血浆凝固所需的时间。,二期止血筛选检验凝血酶原时间,凝血酶原时间 （prothrombin time,pt）,ptr=,病人pt值（秒）,平均正常pt值（秒）,isi,inr= ptr,【方法】 手工法参考方法 仪器法：光学法（比浊法）、电流法、磁珠法,二期止血筛选检验凝血酶原时间,【质量控制】 1、标本采集和处理 患者准备：停药1周以上; 抗凝剂：0.109m枸椽酸钠，1:9; 采血：止血带、容器、一针见血; 立即分离血浆、室温f 易失活，2h内完成。,二期止血筛选检验凝血酶原时间,【质量控制】 2、组织凝血活酶试剂质量 3、国际敏感指数（isi）：表示标准品组织凝血活酶与每批组织凝血活酶pt校正曲线的斜率。 4、报告方式 病人pt（s）及正常对照pt（s） ptr；inr,二期止血筛选检验凝血酶原时间,【参考值】 pt：1115s ；ptr：0.851.15，超过正常对照3s以上的即为延长。 【临床意义】 是外源性凝血因子缺陷的筛选试验。 pt延长或ptr增大：外源性凝血途径和共同途径因子减少或缺乏；血中含有抗凝物质；纤溶亢进等。 pt缩短或ptr降低：见于先天性因子增多症、口服避孕药和血栓前状态或血栓性疾病、dic早期。 inr是监测口服抗凝剂的首选指标，国人以23为宜。,二期止血筛选检验凝血酶原时间,二期止血缺陷的筛检试验 原 因 pt aptt 外源途径缺陷 a n 内源途径缺陷 n a 共同途径缺陷 a a 血中有抗凝物质 a a,二期止血筛选检验临床意义,fg,fm,fb,x、y、d、e, b1-42， a、b、c、h,x,、y, 、d、e, b15-42， a、b、c、h,x、y、d、e,dd,pl,pl,pl,fa,fpa/b,fa,纤溶活性增强筛选检验,纤维蛋白溶解机制及产物,【原理】 胶乳凝集试验：,纤溶活性增强筛选检验fdp,纤维蛋白（原）降解产物f（g）dp检测,fdp,抗fdp,【参考值】 血清fdp5mg/l；尿fdp2817g/l 【临床意义】 血液中fdp增高：原、继发纤溶亢进，溶栓治疗等。 尿中fdp增高：见于急性肾炎、慢性肾炎、尿毒症、肾移植术后排斥反应、妊娠毒血症以及dic等。,纤溶活性增强筛选检验fdp,【原理】 胶乳凝集试验：,纤溶活性增强筛选检验dd,2、 d-二聚体（d-dimer,dd）,dd,抗dd,【参考值】 阴性或0.5mg/l 【临床意义】 dd在继发性纤溶症时升高，而在原发性纤溶症时正常，这是鉴别两者的重要依据。高凝状态、血栓性疾病和dic时、血浆dd体明显升高，是诊断dic的重要依据。,纤溶活性增强筛选检验dd,原发性纤溶与继发性纤溶的鉴别 原 因 fdp d-dimer 原发性纤溶 增高 阴性 继发性纤溶 增高 阳性 溶栓治疗 增高 阳性,纤溶活性增强筛选检验,第二节 血管壁（内皮）检验,血管性血友病因子抗原检测,血浆内皮素-1检测,血浆血栓调节蛋白抗原检测,【原理】 elisa或其它免疫学方法 【参考值】 94.1%32.5% 【临床意义】 减低血管性血友病，是诊断vwd及其分型的重要指标。增高：见于血栓性疾病如心肌梗死、脑血栓等。,血管壁检验血管性血友病因子,血管性血友病因子抗原（vwf:ag )检测,【原理】 在瑞斯托霉素存在的条件下， vwf通过与血小板gpb/相互作用，使血小板发生凝集。凝集强度与受检血浆中的vwf量和（或）质有关。 【参考值】 50%150% 【临床意义】 血小板对瑞斯托霉素的诱导不产生聚集，是vwd的特异性诊断试验之一，是诊断vwd及其分型的重要指标。,血管壁检验血管性血友病因子,瑞斯托霉素因子( vwf:rcof ) 活性检测,【原理】 elisa或其它免疫学方法 【参考值】5ng/l 【临床意义】 可了解血管内皮损伤程度，进行血栓性疾病流行病学研究的指标。 增高：见于心肌梗死、心绞痛、缺血性脑卒中、肾功能衰竭、醛固酮增多症、支气管哮喘、妊高征等。,血管壁检验内皮素-1,血浆内皮素-1（et-1）检测,【原理】 elisa或其它免疫学方法 【参考值】 tm:ag 2552g/l 【临床意义】 是了解血管内皮损伤的最好指标。增高：见于糖尿病、dic、血栓性血小板减少性紫癜、sle、血栓性疾病如心肌梗死、脑血栓等。,血管壁检验tm,血浆血栓调节蛋白抗原(tm:ag)检测,第三节 血小板检验,血小板相关抗体检测 血小板粘附试验 血小板聚集试验 血小板膜糖蛋白检测 -血小板球蛋白和血小板第4因子检测 血小板p选择素检测,【原理】elisa 【参考值】 paigg 078.8ng/107血小板， paigm 07.0 ng/107血小板， paiga 02 ng/107血小板 【临床意义】 急性和慢性原发性血小板减少性紫癜，显著增高。,血小板检验血小板抗体,血小板相关抗体检测,【原理】,血小板检验粘附试验,血小板粘附试验 (platelet adhension test, padt）,【参考值】 玻璃柱法53.9%70.1% 【临床意义】 增高：见于血栓前状态和血栓性疾病。 减低：见于vdw、巨大血小板综合征、血小板无力症、肝硬化、尿毒症、mds、抗血小板药物等。,血小板检验粘附试验,【原理】 在富血小板血浆中加入致敏剂，血小板发生聚集，浊度减低，透光度增加。记录变化曲线，了解血小板聚集程度和速度。,血小板检验聚集试验,血小板聚集试验 （platelet aggrregation test,pagt）,【参考值】 因方法和致聚剂而异。 【临床意义】 增高：血小板聚集功能增强，见于高凝状态和（或）血栓前状态和血栓性疾病。 减低：见于巨大血小板综合征、血小板无力症、肝硬化、尿毒症、mds、抗血小板药物等。,血小板检验聚集试验,【参考值】 gpia:（1.540.49）104分子数/血小板; gpiib/a:（5.451.19）104分子数/血小板 【临床意义】 增高：反应血小板被活化，见于血栓前状态和/或血栓性疾病。 gpi缺乏见于巨大血小板综合征; gpiib/a缺乏见于血小板无力症。,血小板检验膜糖蛋白,血小板膜糖蛋白（gp）检测,【参考值】 -tg：6.626.2g/l pf4：0.95.5g/l 【临床意义】 两者临床意义相同。 增高：反应血小板被激活及其释放反应亢进，见于血栓前状态和（或）血栓性疾病。 减低：见于先天性或获得性贮存池病（颗粒缺陷症）。,血小板检验-tg、 pf4,-血小板球蛋白（-tg） 和血小板第4因子（pf4）检测,【参考值】 （90001100）分子数/血小板 【临床意义】 增高：反应血小板被激活及其释放反应亢进，见于血栓前状态和（或）血栓性疾病。,血小板检验p选择素,血小板p选择素检测,第四节 凝血因子检验,纤维蛋白原含量检测 血浆因子、促凝活性测定 血浆因子、促凝活性测定 血浆因子定性试验,【原理】 clouse法：在受检血浆中加入凝血酶，血浆凝固所需的时间与fg含量多少呈负相关。 【方法】 clouse法：参考方法 其它：免疫法、比浊法、化学法 【质量控制】 同pt,凝血因子检验纤维蛋白原,纤维蛋白原(fibrinogen,fg)含量检测,【参考值】 clouse法：24g/l 【临床意义】 增高：组织坏死和炎症：ami发作期、急性感染、急性肾炎和尿毒症、结缔组织病、大手术后、妊娠晚期和妊高症；糖尿病、恶性肿瘤等。 减少：dic和原发性纤溶症、重症肝炎和肝硬化等。,凝血因子检验纤维蛋白原,凝血因子检验、促凝活性,血浆因子、促凝活性测定,【原理】 于缺乏因子、的血浆中，加入正常血浆或病人的受检血浆，再加入组织凝血活酶（tf）和ca2+，分别作pt测定。从各自的标准曲线中计算出结果。,凝血因子检验、促凝活性,血浆因子、促凝活性测定,【参考值】 f:c 81.0%114.4%；f:c 71.5%133.3%； f:c 85.7%120.3%；f:c 84.0%122.0% 【临床意义】 增高主要见于血栓前状态和血栓性疾病。 减低主要见于减低：主要见于先天性因子、缺乏症；获得性主要见于肝病、vitk缺乏、dic、口服抗凝药等。,凝血因子检验、促凝活性,血浆因子、促凝活性测定,【原理】 于缺乏因子、或的血浆中，加入正常血浆或病人的受检血浆，再加入白陶土脑磷脂悬液和ca2+，分别作aptt测定。从各自的标准曲线中计算出结果。,凝血因子检验、促凝活性,血浆因子、促凝活性测定,【参考值】 f:c 77.3%128.7%；f:c 67.6%128.5%；f:c 81.6%118.4%；f:c 71.7%113.1% 【临床意义】 增高主要见于血栓前状态和血栓性疾病。 减低：f:c、f:c、f:c减低分别见于血友病a、血友病b和f缺乏症。肝病、vitk缺乏、dic、口服抗凝药等。,凝血因子检验定性,血浆因子定性试验,【原理】 于受检血浆中加入ca2+，将形成的纤维蛋白凝块置于5mol/l的尿素溶液中，若24h内纤维蛋白凝块溶解，表示缺乏。 【参考值】 24h内纤维蛋白凝块不溶解 【临床意义】 若24h内纤维蛋白凝块溶解，表示缺乏。,生理性抗凝蛋白检测,生理性抗凝蛋白检测,生理性抗凝蛋白检测,生理性抗凝蛋白检测,生理性抗凝蛋白检测,生理性抗凝蛋白检测,生理性抗凝蛋白检测,生理性抗凝蛋白检测,第五节 生理性抗凝蛋白检测,抗凝血酶活性检测 蛋白c活性检测 组织因子途径抑制物检测,生理性抗凝蛋白检测抗凝血酶,抗凝血酶活性（at:a）检测,【原理】 受检血浆中加入过量凝血酶，使at与凝血酶形成1:1复合物，剩余的凝血酶作用于发色底物s-2238，释出发色基团对硝基苯胺（pna），显色深浅与剩余的凝血酶成正相关，与at呈负相关；根据a值从标准曲线计算出at:a。,生理性抗凝蛋白检测抗凝血酶,【参考值】 at:a ：103.2%113.8% 【临床意义】 增高见于血友病、白血病和再生障碍性贫血等的急性出血期及口服抗凝药。 减低见于先天性或获得性at缺乏症，后者见于血栓前状态、血栓性疾病、dic和肝脏疾病等。,抗凝血酶活性（at:a）检测,生理性抗凝蛋白检测蛋白c活性,【原理】 发色底物法：受检血浆中加入pc激活剂，pc被激活为apc，作用于发色底物pca，释出发色基团pna，显色深浅与pc成正相关，根据a值从标准曲线计算出pc:a。,蛋白c活性（pc:a）检测,生理性抗凝蛋白检测蛋白c活性,【参考值】 发色底物法：87.02%113.38% 【临床意义】 减低：先天性或获得性pc缺乏症，后者见于dic、肝病、手术后、口服抗凝剂、急性呼吸窘迫综合征等。,蛋白c活性（pc:a）检测,生理性抗凝蛋白检测tfpt,【参考值】 elisa70.9124.1g /l 【临床意义】 减低：严重创伤、广泛手术、脓毒血症、休克、dic、血栓性疾病。 增高：老年人、妊娠、肾衰竭等。,组织因子途径抑制物（tfpt）检 测,第六节 病理性抗凝物质检验,复钙交叉试验 凝血酶时间 凝血酶时间纠正试验,病理性抗凝物质检验复钙交叉试验,复钙时间（rt）延长的血浆能被1/10正常血浆纠正，则说明凝血因子异常，复钙时间不在正常范围之内（2.23.8min），则认为受检血浆中存在异常抗凝物质。后者见于反复输血的血友病患者、严重肝脏病、sle、类风湿关节炎等。,复钙交叉试验 （cross recalcification test, crt）,【原理】 在受检血浆中加入凝血酶，从加入到血浆凝固所需的时间。 【方法】 同pt 【质量控制】 同pt,病理性抗凝物质检验凝血酶时间,凝血酶时间(thrombin time, tt),【参考值】 透射比浊法1618s，超过正常对照3s以上为延长。 【临床意义】 反映共同途径是否异常。 延长：低(无)纤维蛋白原血症、纤溶亢进、抗凝物质存在等。见于dic、fdp增多等；肝素或类肝素物质增多。,病理性抗凝物质检验凝血酶时间,病理性抗凝物质检验凝血酶时间纠正试验,tt延长的血浆中加入甲苯胺蓝后，tt缩短5秒以上，提示受检血浆中有肝素类或肝素类物质增多；若不缩短，表示受检血浆中存在其它抗凝血酶类物质或纤维蛋白原缺陷。 在过敏性休克、应用氮芥、放疗后、严重肝脏病、肝叶切除术后、肝移植后患者血浆中有肝素或类肝素增多，肝素治疗的患者，其延长的tt也可被纠正。,凝血酶时间纠正试验 (甲苯胺蓝纠正试验),第七节 纤溶活性检验,血浆鱼精蛋白副凝集试验 组织型纤溶酶原激活物 测定 纤溶酶原活化抑制物活性测定 血浆纤溶酶原活性 测定 2-抗纤溶酶活性 测定,sct-pa,tcu-pa,scu-pa,tct-pa,plg,pl,pk,k,fa hmwk,pai-1,pai-2,c1-抑制物,2抗纤酶 2巨球蛋白,t-pa sk uk,内激活途径（继发）,外激活途径（原发）,外源激活途径,fb,纤溶活性检验纤溶机制,纤维蛋白溶解产物,fg,fm,fb,x、y、d、e, b1-42， a、b、c、h,x,、y, 、d、e, b15-42， a、b、c、h,x、y、d、e,dd,pl,pl,pl,fa,fpa/b,fa,纤溶活性检验,纤溶活性检验3p,血浆鱼精蛋白副凝集试验(3p),【原理】 fm+fdp fm fm自行聚合呈肉眼可见的纤维网状、胶状或胶冻状，此为阳性结果 【参考值】阴性 【临床意义】 阳性：见于继发性纤溶，如dic的早期或中期。,鱼精蛋白,纤溶活性检验t-pa,组织型纤溶酶原激活物 (t-pa) 测定,【原理】 发色底物法 【参考值】 0.30.6 u/ml 【临床意义】 增高见于原发性或继发性纤溶症。 减低见于高凝状态和血栓性疾病。,纤溶活性检验pai:a,纤溶酶原活化物抑制物活性（pai:a）测定,【参考值】 发色底物法：0.11.0抑制单位/毫升 【临床意义】 增高见于血栓前状态、血栓栓塞时。 减低见于原发性或继发性纤溶症。,纤溶活性检验plg:a,血浆纤溶酶原活性 (plg:a) 测定,【参考值】 发色底物法： 75%140% 【临床意义】 增高见于血栓前状态、血栓栓塞性