课件：甲胎蛋白异质体.ppt

新一代肝癌标志物 - 甲胎蛋白异质体（AFP-L3）,北京热景生物,2,目 录,原发性肝癌及现行诊断 甲胎蛋白异质体AFP-L3,3,1、原发性肝癌及现行诊断,4,原发性肝癌（Primary carcinoma of the liver）,肝恶性肿瘤,来源于肝脏上皮的肝部恶性肿瘤，分为肝细胞癌（HCC，90%）、胆管细胞癌(5%)、混合细胞癌(5%)。 病因包括：病毒性肝炎和肝硬化；黄曲霉素；其他化学致癌物；饮水污染等。 被称为“癌中之王”,5,临床表现,原发性肝癌早期多无典型症状，临床就诊者多为中晚期病人 右上腹疼痛 right upper quadrant pain 消化道症状 digestive tract symptom 出血倾向 hemorrhagic tendency 黄疸、发热 jaundice and febrile 肝脏肿大 liver tumefaction 转移与旁癌综合征 metastasis and paracarcinoma Syndrome,6,肝癌所处阶段与预后之间的关系,强调肝癌的早期发现，早诊早治,7,8,现行诊断1：定位诊断,A、超声检查 B、放射性核素肝扫描 C、CT检查 D、选择性腹腔动脉或肝动脉造影检查 E、X线检查 F、磁共振成像（MRI） G、肝穿刺行针吸细胞学检查 H、剖腹探查,A,C,B,D,E,9,现行诊断2：实验室辅助诊断,实验室辅助诊断：包括肝癌标志物、肝功能检测、病毒性肝炎（乙型与丙型）有关指标、免疫指标、其他细胞因子等。 肝癌标志物： 甲胎蛋白（AFP）测定 血清酶等其他肿瘤标记物检查 由于缺乏特异性，只作辅助诊断，如碱性磷酸酶、-谷胺酰转肽酶、乳酸脱氢酶的某些同工异构酶 谷氨酰转肽酶（GGT）及其同工酶、-L-岩藻苷酶(AFU)、异常凝血酶原（DCP）、高尔基体蛋白 73(GP73)，5核苷酸磷酸二酯酶(5NPD)同工酶、醛缩酶同工酶 A（ALD-A）和胎盘型谷胱甘肽S-转移酶（GST）等，还有异常凝血酶原（DCP）、铁蛋白(FT)和酸性铁蛋白(AIF)等。部分 HCC 患者，可有癌胚抗原（CEA）和糖类抗原CA19-9等异常增高。,10,甲胎蛋白（AFP）,AFP: 一种糖蛋白。正常情况下，来自胚胎的肝细胞和卵黄囊，胎儿出生约两周后甲胎蛋白从血液中消失。正常人血清中甲胎蛋白的含量尚不到20ug/L。 1956年发现，60年代末应用于临床，70年代用于自然人群与肝癌高危人群普查。至今被公认为优秀的肝癌诊断标记物而广泛使用。 一般认为，AFP是HCC相对特异的肿瘤标志物，AFP持续升高是发生HCC的危险因素。 AFP临床价值：a、目前较好的早期诊断方法，可在症状出现前6个月以上作出诊断，可与影像相互补充。b、为反映病情动态变化和评估疗效的敏感指标。c、可检查出根治切除术后亚临床期复发与转移,11,通过AFP诊断HCC的临床标准,原发性肝癌诊疗规范（2011版）：对于AFP400g/L超过1个月，或200g/L持续2个月，排除妊娠、生殖腺胚胎癌和活动性肝病，应该高度怀疑肝癌 中国抗癌协会肝癌专委会：2001 年提出了原发性肝癌的临床与分期标准，AFP 对原发性肝癌的诊断值定为400g/ L。,12,AFP的不足,近年来有报道指出,以上述标准诊断原发性肝癌,敏感性为39-64%, 特异性为76-91%, 对早期肝癌具有9-32%阳性预测值 有近1/3的HCC患者AFP为阴性（敏感性不足），同时20-50%的慢性肝炎、肝硬化也合成AFP（特异性不足）, 这给HCC的诊断带来了困难。,特异性不足,20-50%的慢性肝炎、肝硬化也合成AFP,2010 版美国肝病研究学会(AASLD)指南已不再将AFP作为筛查指标 但我国的HCC大多与HBV感染相关，与西方国家HCC致病因素不同（多为HCV、酒精和代谢性因素），结合国内随机研究(RCT) 结果和实际情况，目前对HCC的常规监测筛查指标中继续保留AFP。,13,2、甲胎蛋白异质体AFP-L3,14,甲胎蛋白异质体：AFP-L3,AFP是糖蛋白，其蛋白上含有不同糖链 依据不同糖链与小扁豆凝集素LCA亲和力，可将总AFP分为 AFP-L1、AFP-L2、AFP-L3，其中： AFP-L1来源于良性肝病细胞（LCA非结合型） AFP-L2来源于孕妇（LCA弱结合型） AFP-L3来源于癌变肝细胞（LCA强结合型）,15,如何使用这一指标？,a.分别测定样本中总AFP浓度及其异质体AFP-L3的浓度 b.计算AFP-L3占总AFP比率（AFP-L3/AFP） 以下简写成AFP-L3%，简称异质体比率) c.以 10% 为Cutoff确认结果,阳性： AFP-L3%10% 阴性： AFP-L3%10%,16,美国：AFP-L3已获得FDA批准,特异性不同的各类HCC诊断标志物,文献:Recent Developments in the First Detection of Hepatocellular Carcinoma Joseph B. Lopez Clin Biochem Rev Vol 26, August 2005 I 65,17,中国:AFP-L3列入肝癌诊断标准,AFP-L3已在1999年第四届全国肝癌学术会议上获得通过，确定为原发性肝癌临床诊断标准的肝癌标记物之一。 认为是比单纯的AFP更为特异的原发性肝癌指标。,18,中国： AFP-L3进入原发性肝癌诊疗规范（2011版）,血清AFP 及其异质体是诊断肝癌的重要指标和特异性最强的肿瘤标记物，国内常用于肝癌的普查、早期诊断、术后监测和随访。,19,AFP-L3的临床意义,鉴别良恶性肝病 更好的肝癌早期预警指标 肝癌预后的评价指标 肿瘤恶性程度指标,20,一、鉴别良恶性肝病,国内外研究结果都一致表明：慢性肝病血清 AFP-L3百分比很低, 而原发性肝癌很高, 表明AFP-L3测定非常有助于良、恶性肝病的鉴别诊断。,应用AFP-L3鉴别良、恶性肝病应注意以下题: (1) AFP-L3上升与血清 AFP 值无关, 只要AFP 阳性, AFP-L3就可能高； (2) 大量研究表明血清 AFP 为 2050ng/ml , 而AFP-L3呈阳性，从而使肝癌得到及早诊断。因此, AFP-L3也非常适用于AFP低浓度阳性良、恶性肝病的鉴别诊断； (3) 约有35% 45% 小肝癌 (直径 2 cm ) 病人已显示AFP-L3显著升高。因此, AFP-L3对肝癌早期诊断很有价值。,21,鉴别良恶性肝病,AFP-L3%对HCC检测的特异性高达95%以上。,日本医师会雄志2004年第131卷第5期,研究一：HCC与良性肝病,22,AFP-L3%，AFP 对肝病鉴别诊断的对比 （检验科常规应用数据统计）,AFP ROC曲线,AFP-L3% ROC曲线,数据来源：福建省福州传染病医院,研究三：综合性能对比,23,二、AFP-L3：更优秀的早期预警指标,AFP-L3随肝细胞癌变在血中升高。研究发现AFP-L3升高较影像学检查阳性早出现 328个月, AFP-L3阳性预测肝癌发生的正确率为 94%1。 AFP-L3升高的肝硬化病人大多数在 3 18 个月内被诊断为肝癌2； 另外，在影像学检查尚未发现肝癌特征性占位性病变时, 对 AFP 低浓度阳性病例进行AFP-L3检测可以早期预警肝癌发生3。,1Chin Med SciJ , 1992, 7 ( 4) : 191- 195 2N Engl J Med, 1993, 328( 25) : 1802-1806 3Hepatology,1995, 22 ( 3 ) :802- 807.,24,研究一：半年及三年随访各1例,哈尔滨铁路中心医院,25,解放军第302医院,该研究揭示AFP-L3与AFP值无相关性，可以作为一个独立肝细胞癌诊断因素。 AFP-L3%对于AFP阳性时良、恶性肝病的鉴别及肝癌的早期预警诊断具有重要意义,研究三：临床随访实例,26,三、AFP-L3：肝癌预后评价指标,肝癌术后AFP-L3阳性组平均生存期显著低于阴性组,术后 AFP-L3仍很高的患者其肝癌多灶性复发或门静脉瘤栓发生率明显高于AFP-L3正常者； AFP-L3正常的患者存活率高于AFP-L3升高的患者； 大量的研究报道认为AFP-L3是恶性生物学的良好指标, 可作为一个独立的肝癌预后标志物指标。,27,总生存率比较图,术后AFP-L3%阴性32例HCC患者,术后AFP-L3%阳性23例HCC患者,P=0.0006,28,上海东方肝胆医院Ann Surg Oncol (2011),AFP-L3/总AFP高比值，是病理侵犯性的一个指标。 与那些术前阴性患者相比，术前AFP-L3阳性患者复发时间显著较早 复发时间中位数为22.02.4个月vs 45.06.9个月,29,手术后，与AFP-L3持续阴性结果的患者相比，AFP-L3持续阳性或阴性转阳性结果患者中，复发人数显著较多，尤其是远处转移。,如果术前AFP-L3阳性和术后AFP-L3持续阳性或阴性转阳性，那么我们可以预测肿瘤行为更加具有侵犯性的，肿瘤复发率较高，以及临床结果较差。HCC患者的AFP-L3/总AFP比值越高，就越需要积极的治疗及密切随访。,31,四、AFP-L3 是肿瘤的恶性程度指标,影像学研究发现AFP-L3%阳性的HCC通常有丰富的肝动脉血液供给，肿瘤的倍增时间较短。,32,AFP-L3%的检测决定于AFP-L3的分离水平,传统异质体测定方法对于技术的要求较高、操作繁琐、试剂昂贵。主要采用亲合电泳显影技术 热景生物在科技部资金的支持下，独家研发出捕获AFP-L3的专利技术,33,检 测 原 理,34,亲和层析吸附离心法分离AFP-L3,原理示意图,35,2012：卫生部“艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治”专项，“传染病现场快速诊断试剂的研制”课题 2010：“科技部“863”计划重大项目“体外诊断技术产品开发”课题 2007,2013：科技部科技型中小企业创新基金（含北京市配套课题） 2012：北京科委“首都十大危险疾病-肝癌早期诊断标志物研究”课题,产品研发及产业化进程中来自国家的大力支持,36,AFP-L3%已在全国范围内快速推广应用,AFP-L3%部分临床应用单位（