论文：校园菌落的初步研究.doc

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实验方法：对照组实验法、高压蒸汽灭菌法、平板菌落记数法。l 实验步骤：培养基的制取、灭菌、取样、接种、培养、观察分析。l 实验原理：（略）l 实验过程：研究实验的详细过程、制订实验计划、熟悉实验操作、进行准备实验、进行正式实验、实验数据整理、数据分析、做出结论l 实验结果l 结论关键词：微生物 细菌 菌落 对照组实验 课题由来：细菌无处不在，细菌影响我们的身体，对细菌的菌落分布进行研究，对于我们每一个人都十分重要。鉴于之前，尚未有人对南模校园进行菌落调查和研究，为这个方面留下了空白，故我们制定了该课题，对我们校园的菌落分布进行初步的研究和探讨。课题目的、意义：我们周围环境中，暗藏着许许多多的充满细菌的地点（其中很多是对人体有害的），但是我们往往忽略这一点，将很多其实遍布有害细菌的地方当作是清洁的地方，并且经常接触这些地方。这样以来势必造成我们生病的几率增加，对我们的身体健康造成重大的影响。我们的课题研究，就是为了提醒人们注意这些地点，注意卫生工作，抵御细菌的侵害，保护个人身体健康。人员分工：l 制定实验计划：倪翔、汪科道、黄至骏l 实验前期准备工作：倪翔、汪科道、黄至骏l 进行实验操作：倪翔、汪科道、黄至骏、杜鹏远、张涛、王俊博l 实验后期分析工作：倪翔、汪科道、黄至骏l 与教师联系、沟通：黄至骏l 有关材料的撰写：倪翔实验方法：l 对照组实验法l 高压蒸汽灭菌法l 平板菌落记数法实验步骤：n 准备工作l 对所有仪器进行消毒处理。n 培养基的制取l 用量筒取所需要的水量，倒入烧杯中。l 按照比例，用天平准确称取培养基的各种成分，按照牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂的顺序逐个溶入水中，再调节。（营养琼脂培养基配方：牛肉膏蛋白胨氯化钠琼脂蒸馏水；.）l 将培养基趁热分装到培养皿中，防止培养基沾到瓶口上。l 盖上盖子，等待培养基凝固后，包上牛皮纸。n 灭菌l 打开灭菌锅，向灭菌锅内加入适量水。l 防入等待灭菌的培养皿，加盖，以对称方式旋紧螺旋，l 打开燃气开关加热，至压力上升至.kg/cm2（磅）打开排气阀，排尽锅内冷空气，压力下降到，关上排气口。l 继续加热，等待压力上升到. kg/cm2（磅），调节开关，保温30分。l 等到时间，关上开关，打开排气口（逐步打开），等压力锅内压力下降到0时，再打开锅盖。l 取出培养皿，置于水平桌面，等待培养基凝固后，放入恒温培养箱。l 在下培养小时，观察有无杂菌生长。l 分出对照组，培养组。n 取样l 使用消毒棉签，在需要取样的地点进行刮擦，次数为次，刮擦距离为。l 将取样后的棉签立刻放入已经消毒的试管进行封口保存。n 接种l 往放有取样后的棉签的试管中加入ml的蒸馏水。浸泡分。l 取出其中的ml，放入另一支试管，再加入蒸馏水，使溶液为10ml。l 重复以上步骤，直到样品被稀释成万倍，取出ml，放入两支试管中，l 点燃酒精灯，左手拿培养皿，右手拿上一步骤中的一支试管，在火焰上方，将取出的液体倒入其中。l 用玻璃板将其均匀涂布在培养基上。l 重复步骤完成两个培养皿，放入恒温培养箱。n 培养l 恒温培养箱中培养小时l 培养时间中不得打开培养皿，进行查看。n 观察分析l 将实验组对比对照组，观察，确定是否实验组中的菌落为原有实验仪器以及培养基所带。l 在培养皿上选取不同的个的区域，计算出现的菌落数量，取平均数，再乘以培养皿总面积。l 对所有同组培养皿进行计数，取得平均菌落个数，得出样品细菌数量。l 分析结果，得出结论。实验原理：l 对照组实验法：实验组，是接受实验变量处理的对象组；对照组，对实验假设而言，是不接受实验变量处理的对象组。对照组实验法就是通过设立与实验组同期开始运行的对照组，排除实验过程中的可能出现的偶然情况对实验结果产生的影响（如人员操作失误、仪器的误差、实验室的环境影响等等偶然性因素），然后将实验组参照对照组进行比较分析，并得出结论，做到实验结果的准确性、客观性，真实反映实验结果。本课题使用的是空白对照组。l 高压蒸汽灭菌：高压蒸汽灭菌就是把待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使得灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽后，关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，从而增加了灭菌锅内的压力，使得沸点增高，得到高于的温度，导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。l 平板菌落记数法：微生物的单个活细胞在固体培养基上培养，可以不断地生长繁殖，形成肉眼可以看见的菌落，因此固体培养基上的每一个菌落理论上都应该来源于一个单一的活细胞，我们计算菌落数量就可以推知被测的活菌数量。将等待测验的菌液进行一系列的梯度稀释，使样品中的菌体细胞完全分散为单个菌体，取一定体积的稀释菌液与合适的固体培养基在凝固前均匀混合，或均匀涂布在已经凝固的固体培养基表面。培养一定时间后，统计平板出现的菌落数量，便可以算出待检验的含菌数。实验预期结果：l 得到一批合格、无菌、适合实验的培养基。l 安全地对培养基、器材消毒。l 成功地对所制定的地点进行取样。l 成功地对样品进行接种。（不刮破培养基表面，在火焰上方成功进行操作）l 每一个培养皿内的培养基上均出现分散的单个不重叠的菌落，数量适中，便于计数和统计。实验器材、物品：l 器材：高压灭菌锅、培养皿、牛皮纸、酒精灯、玻璃板、镊子、试管、天平、量筒、称量纸、玻璃棒、试纸、火柴、恒温培养箱、棉签、胶头滴管。l 药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、蒸馏水、氢氧化钠、盐酸。实验过程：l 研究实验的详细过程：学年上学期，召集全体课题组成员，在指导教师的指导下，进行实验的详细过程的研究，了解并且熟悉实验的过程，特别是实验的细节问题和安全问题，做到每位成员都对实验的过程了然与心，能够在保证安全的情况之下独立完成完整的一次实验。l 制订实验计划：学年上学期，由倪翔、汪科道、黄至骏讨论并且制定完整的实验计划（草案）。后召集全体成员对草案进行研究、讨论，经过指导教师指导，最终制定实验计划最终文件，投票表决，全体通过。将实验计划复印，分发至各位成员手中。实验计划确定正式实验在学年下学期进行，接种地点为学校图书馆书本、学校电子阅览室电脑键盘、学校红楼正门扶梯扶手处、学校住宿部男生浴室、高一（）班饮用水机器出水口、高一（）班垃圾桶等典型的地点。其中学校图书馆书本、学校住宿部男生浴室、高一（）班垃圾桶分类为公认最脏的地方，学校电子阅览室电脑键盘、学校红楼正门扶梯扶手处、高一（）班饮用水机器出水口被分类为公众忽略但本课题组认为脏的地点。各地点的负责人为：学校图书馆书本：倪翔学校住宿部男生浴室：杜鹏远学校红楼正门扶梯扶手处：汪科道学校电子阅览室电脑键盘：黄至骏高一（）班饮用水机器出水口：张涛高一（）班垃圾桶：王俊博实验计划确定实验后期分析工作负责人及操作人为倪翔、汪科道、黄至骏，有关材料的书写为倪翔。l 熟悉实验操作，进行准备实验学年上学期，在指导教师的指导下，对实验操作进行熟悉。首先是最基本的仪器使用，如量筒、胶头滴管、天平、试纸等等。然后对实验操作进行整体流程的熟悉。特别注意对如培养基的制取、高温灭菌过程的实验过程的训练和安全注意事项的关注。最后进行整体实验的完整准备实验，成功地制取了培养基，进行取样、接种、培养，对进行正式实验积累了经验和教训，使全体成员的实验操作技能得到了提高，已经为正式实验做好了准备。l 进行正式实验学年下学期，进行正式实验。首先，集体完成对器材的消毒和培养基的制取和消毒，制作个培养皿恒温培养h，确认无菌后待用。由各地点负责人进行各地点的取样。集中以后，集体进行接种和培养。课题组负责人在这个过程中对所有实验操作进行监督，同时请指导教师进行指导工作。每个地点的样本分装入个培养皿，起到消除偶然误差的效果。培育h后，取出培养皿按照实验步骤进行研究。注：详细步骤请看实验步骤。l 实验数据整理学年下学期，进行实验数据整理。由倪翔、汪科道、黄至骏三人，对数据进行整理。首先将数据收集齐，然后将数据制作成为原始数据数据表，然后制作成直观图表。l 数据分析学年下学期，进行数据分析。由倪翔、汪科道、黄至骏三人，对数据进行分析。根据图表的显示数据，对数据的偶然性和必然性做出评估，判定数据的真实性，得出初步的结论。l 做出结论学年下学期，做出结论。召集全体成员，共同对初步的结论进行讨论，并且从指导老师处获取对结论的意见。综合全体成员意见以及指导教师的意见，确定最后客观、公正的结论。本年度课题研究到此结束。实验结果：采样地点A培养皿数据B培养皿数据平均数据学校图书馆书本136120128学校住宿部男生浴室498536517学校红楼正门扶梯扶手处805969.5学校电子阅览室电脑键盘698709703.5高一（）班饮用水机器出水口302527.5高一（）班垃圾桶243注：同期对照组数据均为0。关于结果的讨论：l 关于学校图书馆书本：学校对学生开放的图书馆中，书籍的年龄是比较长的，也由于其流通性较大，所以被公众认为是最脏的地方。实际情况显示这些书本细菌较多。但是书本不是细菌的最适宜的生长环境，而且储存环境比较阴凉，所以细菌仍然被控制在一定水平。l 关于学校住宿部男生浴室：从住宿部同学的口中得知，在他们看来，南模校园里最肮脏的地方非男生浴室莫属。实际情况显示，的确此处的细菌是非常多的地方。分析其原因，主要是因为浴室中的空气比较潮湿，温度比较高，在这么一个温度、湿度适宜的环境下，细菌的生长速度很快，生长数量很多。为了同学的健康，我们建议对此地进行彻底的卫生清扫工作。l 关于学校红楼正门扶梯扶手处：大家总认为，扶手是经常接触的地方，细菌当然很多。实际情况显示，并不是完全正确。扶手上的细菌不是非常多的，追究其原因，我们认为是：一、扶手使用的次数比较少，没有留下足够的样本；二、扶手得到了比较及时的清洁。l 关于学校电子阅览室电脑键盘：在实验数据有力的证明下，的确电脑键盘是最最脏的地方，其细菌的数量超出了我们的想象。我们只是在一个键盘上提取了一小部分样本，可见整个键盘上细菌数量的多了。这与学校电子阅览室的人流多是密不可分的。在操作键盘的时候，手上的油脂于是就沾在键上，为细菌带去了良好的营养来源，造成细菌的迅速繁衍。处在信息社会的我们，势必要经常使用电脑，接触键盘，而键盘恰恰是一个细菌的富集的区域。所以在平时，我们要注意对键盘的清洁工作，使用好键盘之后（特别是多人共用的），要清洁自己的双手。l 关于饮用水机器出水口：饮水机的污染问题一直是我们所关心的问题。虽然数据显示饮水机出水口的细菌数目不多，但是仍然希望我们的同学们，在使用的时候，将瓶口与出水口保持一定的距离，以免细菌的交叉传染。l 关于垃圾桶：垃圾桶是公认最最脏的地点之一。然而从我们的数据上看，似乎垃圾桶是最为干净的地方！这似乎与常理矛盾。对于这个实验结果，我们至今也没有得到明确的，有科学解释的结果，这有待于进一步的后续研究。当然，不排除在实验过程中的人为的失误。结论：从我们目前所选择的地点来看，住宿部男生浴室和电脑键盘是南模校园内最脏的角落。处理方法和措施：l 使用各种清洁剂和常规消毒方法，可有效杀灭细菌。但是考虑到这些地点是我们经常接触的地方，也因为条件的限制，不能使用诸如高温灭菌的灭菌方法以及使用有毒的消毒剂，所以我们推荐使用双氧水作为消毒剂。其优点在于高效、无毒、成本低、容易操作。l 积极加强学校的日常卫生工作，特别是对某些地点要进行针对性、目的性的清理和清洁工作，保持一个良好的环境。l 推荐学校对此在同学中间进行广泛的宣传，从根本上提高我们同学对细菌的认识和重视程度。加强自我健康保护的意识。参考文献：名称：微生物学实验 出版社：哈尔滨工业大学出版社 作者：唐丽杰等致谢：感谢一切在我们的研究过程中，为我们提供指导，提供帮助的老师以及同学们！钳塑枪梗矫矿耕豹颗榷峦伶舜肺陆钮领潦钙戒董只怪汰藏曹伙雍容逢鸯轩编泰卒翌饰扼快埋荐宇磋杠滋烙烁糖寒如筐透档寄支娥琳下炕宏旨旭氮令西尾茅愿亭空竹广管桥榴话天资吃韦姬慎粟幼缉磋蓑惊稗独代痛朵胰慢骗鹅贵臀懊煌鹃贴茬碴济死抢南误尽扬宠玫淖卡瞧嚎擅蓬涤喳羔委智宵祖意郴方舒淬合巩邻搭唾喳蛤鸭与档扩莉恢帛蹬恳扩冠戊蜘葡吵奢箕揖蔼竖乞炽塘鞠谗暑楞陷矢卯僵步防撞采师恩翱柱栏击杨滔