课件：实验肝功能检测.ppt

技术5-肝功能检测技术,肝功能检测,目录 Table of Contents,5.酶学检测,4.胆汁酸 代谢功能检测,3.胆红素代谢功能检测,2.蛋白质代谢功能检测,1.概述,一. 解剖学特点,双重血液供应,腹主动脉的分技肝动脉,氧,门静脉,营养,双重输出管道,肝静脉,代谢降解物,下腔静脉,胆道系统,脂溶性物质及其代谢产物,体外,概述1-肝脏结构,二. 肝脏的显微结构特点,1、组织结构,2、亚细胞结构,三 .细胞的再生,概述1-肝脏结构,排泄功能 物质代谢功能 生物转化,重要生化功能,概述2-肝脏的生物化学功能,A.排泄功能,主要排泄对象：胆汁酸、胆红素、氨,1.胆汁酸代谢,胆汁功能,胆汁的来源：,肝胆汁 胆囊胆汁 十二指肠,胆汁的成分：,水/胆汁酸（盐）、卵磷脂、蛋白质、 脂肪酸和胆固醇,概述2-肝脏的生物化学功能,胆汁酸生成及种类：,初级胆汁酸（肝细胞） 次级胆汁酸（肠道）,初级游离胆汁酸 初级结合胆汁酸 （甘氨酸/牛磺酸） 次级游离胆汁酸 次级结合胆汁酸 （甘氨酸/牛磺酸）,概述2-肝脏的生物化学功能,胆汁酸肝肠循环：,胆汁酸的功能：,促进脂类消化 促进脂类吸收 抑制胆固醇从胆汁中析出沉淀,游离型胆汁酸,结合型胆汁酸,概述2-肝脏的生物化学功能,2.胆红素代谢,胆色素,尿胆素原 粪胆素原 尿胆素 粪胆素 胆绿素 胆红素,胆素原,概述2-肝脏的生物化学功能,3、血氨代谢,药物及体内含氮物质（如嘌呤、嘧啶等）,来源,去路,相对平衡,概述2-肝脏的生物化学功能,部位肝脏细胞,鸟氨酸,瓜氨酸,瓜氨酸,精氨酸代琥珀酸,ATP,AMP+PPi,延胡索酸,鸟氨酸,精氨酸,H2O,尿素,天门冬氨酸,NH3,CO2,氨甲酰磷酸,+H2O,尿素循环,概述2-肝脏的生物化学功能,B.物质代谢功能,1、营养物质代谢,(1)在蛋白质代谢中的作用 (2)在氨基酸代谢中的作用 (3)在糖代谢中的作用 (4)在脂代谢中的作用,概述2-肝脏的生物化学功能,2、激素及维生素代谢 (1)激素的灭活 (2)多种维生素的储存与转化,C.肝脏的生物转化,定义：非营养物质，如物质代谢过程所产生的终产物、生物 活性物质（如激素），外界进入机体的各种异物 （如药物及其它化学物质）、毒物或从肠道吸收的腐 败产物等在肝脏经代谢转变，使极性弱的脂溶性物质 变为极性强的水溶性物质，使易于经尿液或胆汁排出 体外，此过程称为肝脏的生物转化。 转化对象：药物。毒物、致癌物 转化过程：氧化、还原、水解、结合 生理意义,概述2-肝脏的生物化学功能,D. 肝脏疾病的生化改变,1.胆红素代谢障碍（黄疸）,定义:高胆红素血症？ 黄疸？,黄疸分类:,阻塞性黄疸,溶血性黄疸,肝细胞性黄疸,概述3-肝脏疾病的生物化学功能改变,概述3-肝脏疾病的生物化学功能改变,2.胆汁酸代谢障碍,胆汁酸合成障碍 胆汁酸向肠道排出障碍 胆汁酸肠肝循环紊乱 胆汁瘀积病变时胆汁酸代谢紊乱,概述3-肝脏疾病的生物化学功能改变,3.血浆酶异常,肝脏合成酶类:胆碱脂酶、凝血因子、铜蓝蛋白； 肝细胞内酶: ALT、AST 肝脏阻塞性疾病酶活性改变：ALP、GGT 肝硬化疾病酶活性改变：单胺氧化酶（MAO）,4.血浆蛋白异常,概述3-肝脏疾病的生物化学功能改变,血清总蛋白、白蛋白测定 血清总蛋白(total protein TP)包括清蛋白（albumin A）（半衰期：1519） 和球蛋白（globulinlb G）。清蛋白由肝脏合成；球蛋白主要由单核吞噬细胞系 统(B淋巴细胞、浆细胞 )合成和分泌。合成减少可出现腹水、出血倾向等。血清总 蛋白和清蛋白检测是反映肝功能状态的重要指标 参考值： T: 60-80g/L A：40-55g/L A/G: 1.5-2.5/1,肝功能检测-蛋白质代谢功能检测,血清总蛋白检测原理（双缩脲法）：凡具有二个或二 个以上肽腱单位的化合物，与碱性酒石酸钾钠铜盐作 用，均能产生特异的紫色的铜一钾双缩脲化合物。双 缩脲反应所呈紫色的强度与各种血清蛋白质分子量或 氨基酸成分无关，紫色络合物的生成，引起在波长 540-560nm范围内吸光度的上升，吸光度的变化与总蛋 白含量成正比，且可用于自动化检测。,肝功能检测-蛋白质代谢功能检测,试剂与器材： 标本：待检人血清 试剂：上海科华总蛋白（TP）测定试剂盒 器材: 全自动生化分析仪，4冰箱、温育箱，移液头，离心机等,肝功能检测-蛋白质代谢功能检测,操作步骤： 分析类型：终点法 波长：540-560nm 温度：37 孵育时间 10分钟 S：100ul R：5000ul 注：R（双缩脲试剂）：酒石酸钾钠、硫酸铜、碘化钾、NaOH S (标准液)：白蛋白 50g/L,肝功能检测-蛋白质代谢功能检测,临床意义： TP含量升高见于各种原因失水，在其它情况下，高 值通常反映一种或多种球蛋白组分的增加；总蛋白含 量下降与白蛋白浓度下降有关。,肝功能检测-蛋白质代谢功能检测,血清白蛋白检测原理（溴甲酚绿法）：在PH4.2的缓冲 液中，白蛋白分子带正电荷，与带负电荷的溴甲酚绿 (BCG)生成蓝绿色复合物，在波长630nm有吸收峰。复 合物的吸光度与白蛋白浓度成正比，与同样处理的白 蛋白标准比较，可求得血清中白蛋白的浓度。 白蛋白+溴甲酚绿（BCG）,肝功能检测-蛋白质代谢功能检测,PH4.2,Brij-35,白蛋白溴甲酚绿复合物,试剂与器材： 标本：待检人血清 标准液：40g/L白蛋白标准液，也可用定值参考血清白蛋白标准，均需置冰箱保存 试剂：上海科华白蛋白（ALB）测定试剂盒 器材: 全自动生化分析仪，4冰箱、温育箱，移液头，离心机等,肝功能检测-蛋白质代谢功能检测,操作步骤： 分析类型：终点法 波长：630nm 温度：37 孵育时间 60秒 S：10ul R：2000ul 注：样品与试剂量可按生化分析仪要求衡比例改变,肝功能检测-蛋白质代谢功能检测,临床意义： 低水平ABL含量与肝脏疾病、肾病综合征、营养不良 以及蛋白丢失有关，高水平白蛋白与失水有关。,肝功能检测-蛋白质代谢功能检测,血清总胆红素（TBIL）测定原理(重氮耦合法)：在没 有加速剂存在时，血清与重氮试剂反应所生成的红色 偶氮胆红素为直接胆红素。在同样的反应条件下，有 加速剂存在时，血清与重氮试剂反应，所生成的红色 重氮胆红素为总胆红素。 胆红素 胆红素的减少引起在波长450nm处吸光度的下降，吸光度的变 化与总胆红素含量成正比。,肝功能检测-胆红素代谢功能检测,钒酸盐,PH3.0表面活性剂,胆绿素,试剂与器材： 标本：待检人血清 试剂：上海科华直接胆红素（DBIL）测定试剂盒 器材: 全自动生化分析仪，4冰箱、温育箱，移液头，离心机等,肝功能检测-胆红素代谢功能检测,操作步骤： 分析类型：终点法 波长： 450nm（主）、546nm（副） 温度：37 孵育时间 60秒 S：100ul R1：2800ul R2:700ul 注： R1：枸橼酸盐缓冲液（PH2.9）、表面活性剂 R2：磷酸盐缓冲液（PH7.0）、偏钒酸盐,肝功能检测-胆红素代谢功能检测,孵育时间,5min,临床意义： DBIL含量的升高与胆管阻塞以及肝细胞疾病有关,肝功能检测-胆红素代谢功能检测,总胆汁酸（TBA）的测定原理（循环酶法）： 胆汁酸+Thio-NAD 3-酮类固醇+Thio-NAD 3-酮类固醇+NADH 胆汁酸+NAD 血清中微量的胆汁酸在多次酶循环过程中被放大，同 时可使生成的Thio-NADH扩增。在405nm处测定Thio- NADH吸光度变化值，即得血清中胆汁酸的含量。,肝功能检测-胆汁酸代谢功能检测,3-HSD,3-HSD,试剂与器材： 标本：待检人血清 试剂：上海科华总胆汁酸（TBA）测定试剂盒 器材: 全自动生化分析仪，4冰箱、温育箱，移液头，离心机等,肝功能检测-胆汁酸代谢功能检测,操作步骤： 分析类型：两点速率法 温度：37 S（标准液）：胆汁酸50u mol/L S：4ul R2：90ul R1:270UL 注：R1：Thio-NADN(-硫烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型),Goods缓冲液 R2：NADH， 3-HSD (3-羟类固醇脱氢酶),Goods缓冲液，叠氮钠,肝功能检测-胆汁酸代谢功能检测,孵育时间,延迟时间,读数时间,5分钟,30-60秒,2-3分钟,波长： 405nm（主） 600nm（副）,临床意义： 血清总胆汁酸的测定可为检测肝胆系统是否正常提 供一个灵敏的指标。血清总胆汁酸升高见于急、慢性 肝炎，肝硬化，原发性肝癌，胆汁郁积 ，酒精肝、中 毒性肝胆疾病及一些胃肠疾病。,肝功能检测-胆汁酸代谢功能检测,天门冬氨酸氨基转移酶（AST）的测定原理（速率法): 在AST速率法测定中，酶偶联反应式为： L-门冬氨酸+-酮戊二酸 草酰乙酸+L-谷氨酸 草酰乙酸+NADN+H+ L-苹果酸+NAD+H2O NADH的减少，引起在波长340nm处吸光度的下降， 下降速率与AST 活力成正比。,肝功能检测-酶代谢功能检测,AST,AST,试剂与器材： 标本：待检人血清 试剂：上海科华天门冬氨酸氨基转移酶（AST）测定试剂盒 器材: 全自动生化分析仪，4冰箱、温育箱，移液头，离心机等,肝功能检测-酶代谢功能检测,操作步骤： 分析类型：速率法 波长：340nm 温度：37 理论K值：4180 毫摩尔消光系数：6.22 （NADH， 340nm） 注：R1：NADH, LDH,MDH R2:L-门冬氨酸，-酮戊二酸,肝功能检测-酶代谢功能检测,预孵育时间,延迟时间,读数时间,5分钟,1分钟,1-2分钟,S：60ul R1:1000ul,R2:500ul,临床意义： AST（EC2.6.1.1）活力升高与心肌梗死有关，疼痛 4-6小时后明显升高，24-30小时后达到高峰。高水平 酶活力也见于肝细胞损伤，肌营养不良以及皮肤炎。,肝功能检测-酶代谢功能检测,丙氨酸氨基转移酶（ALT）的测定原理（速率法): 在AST速率法测定中，酶偶联反应式为： L-丙氨酸+-酮戊二酸 丙氨酸+L-谷氨酸 丙氨酸+NADN+H+ L-乳酸+NAD+H2O NADH的减少，引起在波长340nm处吸光度的下降， 下降速率与ALT 活力成正比。,肝功能检测-酶代谢功能检测,ALT,LDH,试剂与器材： 标本：待检人血清 试剂：上海科华丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定试剂盒 器材: 全自动生化分析仪，4冰箱、温育箱，移液头，离心机等,肝功能检测-酶代谢功能检测,操作步骤： 分析类型：速率法 波长：340nm 温度：37 理论K值：4180 毫摩尔消光系数：6.22 （NADH， 340nm） 注：R1：NADH, LDH R2:L-丙氨酸，-酮戊二酸,肝功能检测-酶代谢功能检测,预孵育时间,延迟时间,读数时间,5分钟,1分钟,1-2分钟,S：60ul R1:1000ul,R2:500ul,临床意义： ALT（EC2.6.1.2）活力升高与肝炎及其它肝脏疾病 有关。,肝功能检测-酶代谢功能检测,思考题,复习思考题： 1. 血清结合胆红素升高见于哪些疾病？ 2. 简述肝脏疾病检查项目的选择原则。,问答-Q&A,Thanks！,后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用,主要经营