课件：脓汁和粪便标本中病原菌的检测(1).ppt

斜面4支，空气、手指皮肤、细菌分离培养物（上次实验平板）,器材准备,空气细菌检查结果分析,细菌菌落直径13mm，有光滑型、粗糙型、粘液型。 霉菌菌落比较大，呈棉絮状、绒毛状。 霉菌和酵母菌最适培养温度为2528。 计数菌落形成单位（CFU）,报告结果。,37培养24小时室温放置 48小时 72小时,手指皮肤的细菌学检查,甲和乙、丙和丁共用1个平板,上:甲、丙常规洗手 下:乙、丁标准洗手,第1格为洗手前， 第2格为洗手后， 第3格为消毒后， 第4格空白对照。,在培养基表面触摸23厘米,手指皮肤细菌检查结果分析,比较洗手前后细菌的种类。 洗前细菌种类多。 洗后细菌种类少。 洗手能洗掉大多数暂住菌。 比较常规和标准洗手的细菌数量。 常规（简单）洗手，平板上细菌数量少。 标准洗手，平板上细菌数量多。原因：常住菌数量大，牢固附着在皮肤上，常洗不掉， 可洗松动，经摩擦接种、脱落到培养基上，显示细菌更多？ 外科手术人员洗手？ 碘酒和酒精棉球消毒以后，有没有细菌生长？ 空白对照有没有细菌生长？ 洗手前没有细菌生长？,脓汁和粪便标本中病原菌的检测 实验流程(6次课12学时）,培养基的制备,细菌的分离培养,细菌的纯培养,细菌的形态学检查,细菌的生化试验等,细菌的血清学试验、结果分析实验论文撰写,菌落特征 Bacterial Colony Characteristics 大小：大(直径约3mm以上)，中(直径约13mm)，小(直径约1mm以下)。 形状：圆形，卵圆形、假根形、丝状、不规则等。 边缘：整齐，锯齿状，波浪状，羽毛状。 表面：隆起、平坦、中心凸起、脐形凹陷；光滑或粗糙、湿润或干燥。 色素：一般为无色或灰白色，特殊色素有两类：脂溶性色素(菌落本身着色，培养基不着色)和水溶性色素(菌落及培养基均着色)。 溶血性：不溶血，不完全溶血(菌落周围呈草绿色、不透明)，溶血(菌落周围出现透明环)。,金黄色葡萄球菌菌落特征,X-SA 琼脂 培养基添加了显色酶基质，金黄色葡萄球菌形成淡蓝色菌落 。,血琼脂 菌落直径约2mm、圆形、隆起、表面光滑、湿润、边缘整齐，菌落周围有透明的溶血环，溶血菌株大多有致病性。,Baird-Parker琼脂 菌落黑色，奶油状，表面光滑，湿润，圆形，凸起，有光泽，边缘整齐，周围绕以不透明圈 ( 沉淀 ), 其外常有一清晰带 ( 卵磷脂环 ) 。,链球菌菌落特征,血琼脂 甲型溶血性链球菌，菌落周围有12mm宽的草绿色溶血环，称甲型溶血或溶血。,血琼脂 乙型溶血性链球菌，菌落周围有24mm宽、红细胞完全溶解、透明的溶血环，称乙型溶血或溶血。,血琼脂 丙型链球菌，不产生溶血素，菌落周围无溶血环，称不溶血性链球菌或溶血。,甲型,乙型,丙型,伤寒沙门菌菌落特征,HE琼脂 Hektoen Enteric Agar 沙门菌产生蓝绿色、黑色中心菌落,XLD琼脂 Xylose Lysine Desoxycholate Agar 沙门菌产生较小黑色菌落,SS琼脂 Salmonella Shigella Agar 沙门菌产生较小黑色菌落,志贺菌菌落特征,HE琼脂 Hektoen Enteric Agar 形成不发酵乳糖 的深绿色菌落。,麦康凯琼脂 MacConkey Agar 形成较小的，无色半透明不发酵乳糖的菌落。,SS琼脂 Salmonella Shigella Agar 菌落圆形、液滴状、边缘整齐，湿润，无色半透明。,大肠埃希菌菌落特征,麦康凯琼脂 MacConkey Agar 含乳糖及中性红指示剂，菌落呈红色。,伊红美蓝琼脂 eosin methylene blue Agar 分解乳糖产酸，使伊红与美蓝结合而形成紫黑色菌落，具有金属光泽。,SS琼脂 Salmonella Shigella Agar 分解乳糖产酸，使胆盐呈胆酸析出，形成中心浑浊的深红色菌落（中性红指示剂） 。,细菌的纯培养 Pure Cultures,脓汁标本在普通平板上有金黄色、白色两种菌落，菌落的色素是脂溶性的，是细菌本身的颜色。菌落直径2mm左右、圆形、隆起、表面光滑、湿润、边缘整齐、不透明。,37培养24小时,粪便标本在伊红美蓝平板上，有紫黑色、淡粉红色两种菌落，菌落色素是水溶性的，不是细菌本身的颜色，颜色的产生是因为大肠埃希菌分解乳糖产酸，酸使伊红与美蓝结合，形成紫黑色具有金属光泽、大而隆起、不透明的菌落，菌落直径23mm。致病菌不分解乳糖，菌落呈伊红的颜色，淡粉红色，半透明，直径12mm。,37培养24小时,若培养、放置时间过长或者平板上某个部位细菌比较多、菌落比较密集，大肠杆菌菌落颜色可能会发生改变。因为大肠杆菌利用完乳糖以后，就要利用蛋白质，蛋白质分解大多产生碱性物质，中和了乳糖分解时产生的酸。大肠杆菌菌落可能会由原来的紫黑色变成粉红色，或者菌落中心黑色，边缘粉红色。,大肠埃希菌菌落特征改变,划线分离失败！没有典型单菌落,菌落分布稀疏的区域单菌落较多。,菌落分布密集的平板CFU(不同种属)较多。,在菌落分布最稀疏的区域，选择平板上相同的菌落数多的、典型的、容易挑取的单菌落。,单菌落与菌落形成单位辨认比较困难,斜面接种分工,甲普通平板金黄色菌落(auratus，golden yellow)1支斜面 黄色菌落可能是空气污染的微球菌、黄色小球菌，不能挑选。 乙普通平板白色菌落(albus，white)1支斜面 丙 EMB平板紫黑色菌落(atropurpureus)1支斜面 丁 EMB平板粉红色菌落(pink) 1支斜面 戊 EMB平板粉红色菌落(pink)1支斜面 斜面正面上2/3作标记： 组号 + 金黄、白色、紫黑、粉红。,接种环套住菌落轻刮取菌,甲金黄色,乙白色,丙紫黑色,丁粉红色,斜面接种法 Streak Slant Method 甲金黄, 乙白色。 丙紫黑, 丁粉红。 标记：组号，颜色,接种环取菌后，伸入斜面底部，自下向上先拉一条细菌接种线。,再伸入底部，自下向上，作蜿蜒划线。,细菌涂布接种在斜面培养基的表面。,生物安全警告,接种环接种斜面一次，可产生几十个微生物气溶胶颗粒。 气溶胶粒径100um沉降很快,50um在0.4s内扩散开,5um通过呼吸道直接到达肺泡。 Pike博士对实验室感染统计分析结果发现，不明原因的感染高达82%，大多数是气溶胶在空气中扩散引起的。 实验时应坐着，在火焰周围1020厘米内操作，保持安静、有序，尽量少说话、少走动，以免感染病原菌。,灭菌,收集平板 灭菌桶内（平板底部朝下，盖朝上放置） 速送灭菌室 高压蒸汽灭菌 洗刷。,奥林巴斯 CX21型 生物显微镜,显微镜的搬运,开关与调整光强,调整聚光镜位置和孔径光阑,转换物镜,A.旋转物镜转盘，将希望使用的物镜（10、100）转到标本的上方。,聚焦,注：10倍物镜的工作距离为10.5mm。油镜的WD为0.13mm。,100倍浸油物镜使用方法,香柏油折射率n=1.515,空气的折射率n=1.000,玻璃的折射率n=1.520,油浸镜的原理,光线,滴加香柏油可使光线更多进入物镜,避免光线通过折射率低的空气而散失,以提高物镜的分辨率,使物象明亮清晰。 放大倍数：目镜10倍物镜90或100倍。,奥林巴斯 CX21型 生物显微镜 （实验柜内，每人一台）,注意：只能横放，不得竖放。,显微镜油镜的使用P13,将标本放置、移动到光路上，用“黄色圈”的10物镜找到、看清楚标本。 将聚光器调到最高处。 调整孔径光阑,将与物镜相对应倍率调到正面（10100） 在标本观察部位上滴加一滴香柏油。 将“白色圈”100物镜放入光路，浸泡于香柏油中，可看到模糊物象。 调整亮度及微调旋钮，直到物象清晰为止观察物象，记录结果关闭电源。 油镜处理：擦镜纸拭去香柏油 擦镜纸沾少许乙醇和乙醚（7:3）混合液擦拭擦镜纸擦拭油镜。 显微镜罩上防尘罩 横放在实验柜内。 (顺德校区）实验台两侧的电源插座，只能插入一个插头，请选择离你最近的电源插座。 （校本部）实验台中间，三个位的插座，中间那位插孔没有电，不能使用，只能用两侧的插座。,医学微生物学实验 综合性实验三、一,空气、手指皮肤的细菌学检查结果分析 脓汁和粪便标本中病原菌的检测 菌落特征观察P11 细菌纯培养P10 油镜使用方法（讲解） 脓汁标本检验 （录像） 肠道致病菌的分离鉴定（录像）,试管用毛刷，上下、旋转刷洗内壁和管底。,字迹用湿纱布，粘去污粉擦拭。,管口朝向相同，流水冲洗10次。,洗干净的试管，倒扣在筐内，晾干。,平皿用纱布，旋转擦拭内外侧，字迹用纱布粘去污粉擦拭。,流水冲洗10次。逐个倒扣在筐内，晾干。,思考题,在微生物学实验中,怎样才能避免杂菌的污染? 空气的卫生标准规定如何? 你的实验结果说明了什么问题? 怎样从医务人员手指上分离和鉴定金黄色葡萄球菌? 菌落特征主要描述哪几方面问题？如何挑选单菌落？,常用器材摆放顺序：电源插座试管架酒精灯污物盘。 试管架上器材：靠近插座一侧第1列放置接种针,第2列放置 接种环，另一侧中间两行放置油性笔和打火机。,器材使用后，必须放回原处，依次摆整齐。,实验器材 整齐有序,后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用 资料仅供参考，实际情况实际分析,主要经营：课件设计，文档制作，网络软件设计、图文设计制作、发布广告等 秉着以优质的服务对待每一位客户，做到让客