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文档简介

小鼠肝组织RNA提取及 RT-PCR,一、试剂及材料,1、小鼠肝脏 2、DEPC处理过的EP管、PCR管 3、 Trizol 、氯仿、异丙醇、DEPC水,二、实验原理,TRIZOL：异硫氰酸胍 + 苯酚,裂解细胞，RNA与蛋白质分离，将RNA释放到溶液中。,促使RNA进入水相，离心后可形成水相层和有机层。,RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。水相层（无色）主要为RNA，有机层（黄色）主要为DNA和蛋白质。,三、实验步骤,RNA提取 1、新鲜肝组织置EP管中，加200l Trizol充分研磨后，补加800l Trizol，枪头吹匀。 2、加入200l 氯仿，剧烈震荡15秒，4 12000g离心15min。 3、将上层水相移至洁净EP管中，加入500l异丙醇颠倒混匀。 4、4 12000g离心10min。 5、弃水相，EP管开盖干燥，溶于50l DEPC水中。,RT-PCR：RNA的反转录 + cDNA的PCR,RT-PCR操作步骤,5x Prime Script Buffer 2 l Prime Script RT Enzyme Mix 0.5 l Oligo dT primer (50 m) 0.5 l Random 6 mers (100 m) 1 l 提取的RNA 0.5 l RNase Free 水 5.5 l 37 15min 85 5 sec,10 l,PCR 10x PCR Buffer 5 l dNTP 4 l 模板DNA 2 l 引物1 2 l 引物2 2 l Tag 酶 0.5 l H2O 34.5 l,50 l,94 5 min 94 30 sec 54 30 sec 72 30 sec 72 7 min,25 cycle,20 ul 样本 4 ul loading buffer 1 ul DNA 染料 1%琼脂糖凝胶电泳观察结果,后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用 资料仅供参考，实际情况实际分析,主要经营：课件设计，文档制作，网络软件设计、图文设计制作、发布广告等 秉着以优质的服务对待每一位客户，做到让客户满意！ 致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、PPT设计、计划书、策划案、学习课件、各类模板等方方面面，打造全网一站式需求,感谢您的观看和下载,The user can demonstrate on a projector or computer, or print the presentati
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