植物组织培养第十一章植物种质资源的保存.pptVIP

陈传红 制作 2007 / 5,第十一章 植物种质资源的保存,陈传红 制作 2007 / 5,本章内容提要： 一、概念及保存类型 二、种质资源离体保存 （一）、低温保存 （二）、超低温保存 （三）、生长抑制剂保存,陈传红 制作 2007 / 5,一、概念及保存类型,植物种质资源保存: 是指利用天然或人工创造的适宜环境保存种质资源，使个体中所包含的遗传物质保持其遗传完整性和活力，并能通过繁殖将其遗传特性传递下去。 其保存类型: 原生境保存 、非原生境保存。,陈传红 制作 2007 / 5,1、原生境保存 将植物的遗传材料保存在它们的自然环境中。 原生境保存的地方大多是植物保区； 另一种方法为农田种植保存。,陈传红 制作 2007 / 5,珍宝岛国家级自然保护区,陈传红 制作 2007 / 5,美国、马里兰、农田,陈传红 制作 2007 / 5,2、非原生境保存 将植物的遗传材料保存在不是它们的自然生境的地方。 非原生境保存方式有：植物园、种子库、种质圃、试管苗库、超低温库等。 保存方法有：种植保存、贮藏保存、离体保存和基因文库保存。,陈传红 制作 2007 / 5,华南植物园,陈传红 制作 2007 / 5,昆明野生生物种子库,陈传红 制作 2007 / 5,超低温库,陈传红 制作 2007 / 5,二、种质资源离体保存,离体保存方法： 低温保存、超低温保存和生长抑制剂保存。,定义: 就是将要保存的种质以离体的形式保存起来的方法。,陈传红 制作 2007 / 5,（一）低温保存 一种缓慢生长保存方法，是通过控制培养温度来限制培养物各种生长因子的作用，使培养物生长减少到最低限度。,陈传红 制作 2007 / 5,低温保存冰箱,陈传红 制作 2007 / 5,低温保存的基本特征：保存材料的定期继代培养，不断繁殖更新； 基本措施是：控制保存材料所处的温度和光照。 延缓保存材料生长速度的另一项措施是：改变培养基的成分。,注意！种质库要定期检查，保持清洁，及时清除污染材料，并注意积累资料。,陈传红 制作 2007 / 5,（二）超低温保存 又称冷冻保存，一般以液N2为冷源，使保存温度维持在-196。,陈传红 制作 2007 / 5,1、保存原理 低温冰冻过程中，如果生物细胞内水分结冰，细胞结构就遭到不可逆的破坏，导致细胞和组织死亡。 植物材料在超低温条件下，冰冻过程中避免了细胞内水分结冰，并且在解冻过程中防止细胞内水分次生结冰而达到植物材料保存目的。 植物细胞含水量大，冰冻保存难度大，投放液N2中易引起组织和细胞死亡，故须借助于冷冻防护剂，防止细胞冰冻或解冻时引起过度脱水而遭到破坏，保护细胞。,陈传红 制作 2007 / 5,超低温冰箱,陈传红 制作 2007 / 5,2、基本程序 基本程序包括： 预处理、冷冻处理、冷冻贮存、解冻 和 再培养。,（1）预处理 为保证茎尖在液N2处理后具有稳定且高的存活率，需进行一定的预处理，或在冷冻防护剂存在下进行预培养，或直接进行低温（-310）预处理。,陈传红 制作 2007 / 5,陈传红 制作 2007 / 5,（2）冷冻处理 冷冻处理的方法有： 快速冷冻法； 慢速冷冻法； 预冷冻法； 干燥冷冻法。,陈传红 制作 2007 / 5,a、快速冷冻法 指将植物材料从0或者其他预处理温度直接投入液氮中保存的方法，降温速度为1000/min。 采用该法要求细胞体积小、细胞质浓厚、含水量低、液泡化程度低的材料。,陈传红 制作 2007 / 5,b、慢速冷冻法 将处于0或其他预处理温度的材料以 12/min的降温速度从起始温度降到 -100，稳定1h后，投入到液氮保存或以此降温速度连续降温至 -196 的方法。 适宜保存的材料有：成熟的、含有大液泡和含水量高的细胞，对于保存在悬浮培养中的细胞特别有效。,陈传红 制作 2007 / 5,c、预冷冻法 指将植物保存材料放入液氮前，需经过短暂时间的低温锻炼的方法。 可分为两步冷冻法和逐级冷冻法。 该方法可以使保存材料细胞内充分脱水，避免因细胞内结冰而导致不可逆伤害的出现。,d、干燥冷冻法 将材料置于2729烘箱内降低植物含水量，再投入液氮中保存的方法。 可防止材料冻死。,陈传红 制作 2007 / 5,（3）冷冻贮存 适宜温度下贮存冷冻材料也很重要。 长期内贮存在液氮内的材料，需合适的液氮容器。 冷冻贮存的茎尖随保存时间的延长，其生活力可能下降。,（4）解冻 植物材料在超低温贮存过程中所发生的冻害是在冷冻和解冻过程中产生的。 解冻时发生的冻害是由细胞内次生结冰造成的； 解冻时水的渗透冲击也会对细胞膜体系造成破坏。,陈传红 制作 2007 / 5,a、快速解冻法 是指将液氮中保存的材料直接投入到3740温水浴中进行解冻的方法。解冻的升温速度为500750/min，大多数植物材料可采用此种方法。,解冻方法有： 快速解冻 和 慢速解冻,陈传红 制作 2007 / 5,b、慢速解冻法 将液氮中保存的材料先置于0低温下解冻，再逐渐升至室温下进行解冻的方法。 适宜细胞含水量较低的材料，如木本植物的冬芽。,陈传红 制作 2007 / 5,（5）再培养 指将已解冻的材料重新置于培养基上使其恢复生长的过程。 再培养是检验冷冻保存效果或确定保存方法是否合适的最根本方法。,陈传红 制作 2007 / 5,3、影响因素 材料超低温保存时，除了预处理、冷冻、解冻方法对植物材料冷冻保存效果有重要影响外，植物材料的性质和冷冻保护剂的使用对其也有很大的影响。,冷冻保护剂应具有以下特性：分子质量较小、易于与溶剂混合、快速渗入细胞、无毒或毒性小、易洗脱。常用的是DMSO。,陈传红 制作 2007 / 5,（三）