我的动物细胞融合与单抗.ppt

2.2.2动物细胞融合 与单克隆抗体,2.2 动物细胞工程,杂种植株,融合的原生质体AB,再生出细胞壁,脱分化,愈伤组织,再分化,植物细胞的融合,植物组织培养,植物细胞A,原生质体B,原生质体A,杂种细胞AB,去 壁,去 壁,人 工 诱 导,方法？,促进融合的方法？,融合完成的 标志,植物细胞B,温故而知新之植物细胞杂交（马铃薯番茄）,成果和未解决的问题,成果：克服不同生物远缘杂交的障碍，出 现自然界没有的新品种。,未解决的问题：未能让杂种植物按照人们 的需要表现出亲代的优良。,思考：植物细胞可实现杂交，不同种的动物细胞能实现融合吗？,1970年，有两位科学家做了一个人鼠细胞融合的实验，以证明细胞膜上的蛋白质分子是运动的。,温故而知新之细胞膜流动镶嵌模型,如何实现人鼠细胞的融合？阅读课本P52相关内容，思考以下问题：,1.动植物细胞在结构上有何区别？这对他们的杂交或融合过程有什么影响？ 2.植物体细胞杂交诱导原生质体融合有哪些方法？这些方法能用于动物细胞融合吗？ 3.动物细胞融合与植物体细胞杂交原理是否相同？该原理是什么？ 4.参照植物体细胞杂交过程尝试写出动物细胞融合过程简图。 5.植物体细胞杂交可得到杂种植株，动物细胞融合能得到完整动物个体吗？,小结1 植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较,获得杂种植株,细胞膜的流动性,细胞膜的流动性 细胞的全能性,去除细胞壁后诱导原生质体融合,使细胞分散后诱导细胞融合,物理（离心、振荡、电刺激） 化学（聚乙二醇）,物理、化学方法（同左） 灭活的病毒,杂种细胞,一、动物细胞融合,1、动物融合的过程,1）动物细胞诱导融合有不同于植物的方法吗？,2）为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不灭活行吗？,3）你能归纳出什么叫做动物细胞融合吗？,还可以利用灭活的病毒进行诱导,因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭活会感染细胞。,概念要点, 两个或多个动物细胞 一个细胞（杂交单核细胞）,2、动物细胞融合的概念,一、动物细胞融合,3、动物细胞融合技术的发展简史告诉我们：科学技术是不断发展的。那么，实现动物细胞融合有什么意义呢？,打破生殖隔离，使远缘杂交成为可能； 重要用途：制备单克隆抗体。,2、什么是抗体？,资料卡,3、抗体的分布？,抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。,主要分布在血清中。,1、什么是克隆？,“克隆”从英文“clone”音译而来，是指从一个共同祖先，通过无性繁殖的方法产生出来的一群遗传特性相同的DNA分子，细胞或个体。在细胞水平指动物细胞培养.,二、单克隆抗体,抗体,1、抗原 动物体内,抗体不纯,2、特异性差、纯度低；,产量低、反应不够灵敏,如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？,在动物细胞融合过程图的基础上尝试设计单克隆抗体的制备过程,B淋巴细胞,注射特定抗原蛋白,骨髓瘤细胞,培养骨髓瘤细胞,融合,（只考虑两两融合）培养液中细胞有几种类型？融合细胞几种类型？,骨髓瘤细胞-骨髓瘤细胞 B淋巴细胞- B淋巴细胞 B淋巴细胞-骨髓瘤细胞,多种杂交细胞,在具有筛选作用的培养基上培养,专一抗体检验阳性,克隆上述杂交细胞,分开不同杂交细胞，克隆专一抗体， 检验阳性细胞,单克隆抗体,注射到小鼠体内,体外培养,第1次筛选目的：得到杂交瘤细胞（多种）。,第2次筛选目的：在杂交瘤细胞中筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。,该细胞继承双亲细胞的遗传特性，既能产生专一抗体又能无限增殖。,杂交瘤细胞有何特点？,特异性强，灵敏度高,3、单克隆抗体的制备过程,免疫小鼠,培养骨髓瘤细胞,融合,骨髓瘤细胞,B淋巴细胞,注射特定抗原蛋白,选择培养基上培养,专一抗体检验阳性,专一抗体检验阳性,注射到小鼠体内,体外培养,单克隆抗体,克隆杂交细胞,分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞,多种杂交细胞,杂交瘤细胞有何特点？,本过程利用的那些技术？,动物细胞融合技术 动物细胞培养技术,是否注射抗原,（只考虑两两融合）培养液中细胞有几种类型？几种融合细胞？,两次筛选的目的分别是什么？,与传统制备的抗体相比具有什么特点？,3、单克隆抗体的制备过程,B BB B瘤 瘤瘤 瘤,细胞融合后培养液中有几种细胞？,已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两条DNA合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，加PEG促融，获得杂种细胞。,创始人：米尔斯坦,由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。 特点：特异性强、灵敏度高、 纯 度 高、产 量 大。,4.单克隆抗体概念,5、单克隆抗体的应用,与常规抗体相比，单克隆抗体产量高，特异性强，灵敏度高，优越性十分明显。,应用主要有：,1、临床诊断、治疗疾病。,2、作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”治疗肿瘤。,利用淋巴细胞产生抗体的功能 利用肿瘤细胞无限增殖的特性 利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤