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谷物淀粉含量的测定(旋光法) 淀粉(starch)是植物的主要贮藏物质,大部分贮存于种子、块根和块茎中。淀粉不仅是重要的营养物质,并且在工业上的应用也很广泛。测定谷物中淀粉的含量对于鉴定农产品的品质和改进农业生产技术有很大的意义。 一、原理: 酸性氯化钙溶液与磨细的含淀粉样品共煮,可使淀粉轻度水解。同时钙离子与淀粉分子上的羟基络合,这就使得淀粉分子充分地分散到溶液中,成为淀粉溶液。淀粉分子具有不对称碳原子,因而具有旋光性,可以利用旋光仪测定淀粉溶胶的旋光度(),旋光度的大小与淀粉的浓度成正比,据此可以求出淀粉含量。溶提淀粉溶胶所用的酸性氯化钙溶液的pH值必须保持2.30,密度须为1.30,加时间的长短也要控制在一定范围。因为只有在这些条件下,各种不同来源的淀粉溶液的比旋度才都是203,恒定不变。样品中其他旋光性物质(如糖分)须预先除去。 二、材料、仪器设备及试剂: (一)材料:面粉或其他风干样品(二)仪器设备:1. 植物样品粉碎机;2. 离心机;3.分析天平;4. 粗天平;5. 旋光仪及附件;6. 三角瓶;7. 分样筛(100目);8. 布氏漏斗、抽滤瓶及真空泵;9. 离心管;10. 小电炉。(三)试剂: 三、实验步骤: 1. 样品准备:(1)称取样品:将样品风干、研磨、通过100目筛,精确称取约2.5g样品细粉(要求含淀粉约2g,请参考附注估计),置于离心管内。(2)脱脂:加乙醚数ml到离心管内,用细玻棒充分搅拌,然后离心。倾出上清液并收集以备回收乙醚。重复脱脂数次,以去除大部分油脂、色素等(因油脂的的存在会使以后淀粉溶液的过滤困难)。大多数谷物样品含脂肪较少,可免去这个脱脂手续。(3)抑制酶活性:加含有氯化高汞的乙醇溶液10ml到离心管内,充分搅拌,然后离心,倾去上清液,得到残余物。(4)脱糖:加80乙醇10ml到离心管中,充分搅拌以洗涤残余物(每次都用同一玻棒),离心,倾去下清液。重复洗涤数次以去除可溶性糖分。 2. 溶提淀粉:(1)加醋酸氯化钙:先用醋酸氯化钙溶液约10ml加到离心管中,搅拌后全部倾入250ml三角瓶内,再用醋酸氯化钙溶液50ml分数次洗涤离心管,洗涤液并入三角瓶内,搅拌玻棒也转移到三角瓶内。(2)煮沸溶解:先用蜡笔标记液面高度,直接置于加有石棉网的小电炉上,在4min5min内迅速煮沸,保持沸腾15min17min,立即将三角瓶取下,置流水中冷却。煮沸过程中要时加搅拌,勿令烧焦;要调节温度,勿使泡沫涌出瓶外;常用玻璃将瓶侧的细粒擦下;并加水保持液面高度。 3. 沉淀杂质和定容:(1)加沉淀剂:将三角瓶内的水解液转入100ml容量瓶,用醋酸氯化钙溶液充分洗涤三角瓶瓶,并入容量内,加30ZnSO41ml混合后,再加15K4Fe(CN)61ml,用水稀释至接近刻度时,加95乙醇一滴以破坏泡沫,然后稀释到刻度,充分混合,静置,以使蛋白充分沉淀。(2)滤清:用布氏漏斗(加一层滤纸)吸气过滤。先倾清溶液约10ml于此滤纸上,使其完全湿润,让溶液流干,弃去滤液,再倾清溶液进行过滤,用干燥的容器接受此滤液,收集约50ml,即可供测定之用。 4. 测定旋光度:用旋光测定管装满滤液,小心地按照旋光仪使用说明,进行旋光度的测定。淀粉()N100/20DL(WK)100 式中:用钠光时观测到的旋光度;20D:淀粉的比旋度,在这种方法条件下为203;L:旋光管长度(cm);W:样品质量(g);K:样品水分含量();N:稀释倍数;100:换算为百分率。也可以不用上列公式计算,改用工作曲线来求得淀粉含量,这样准确度高些。粗 淀 粉 测 定 法中华人民共和国专业标准ZB X 66027-87Determination of crude starch 本方法适用于酿造酱油原料中粗淀粉含量的测定。1 仪器和设备 a. 锥形瓶、玻璃管;b. 水浴锅、移液管;c. 容量瓶;d. 粉碎机;e. 加压锅等。2 试剂和溶液 2.1 2%盐酸:量取4.5mL浓盐酸加入到100mL容量瓶中,加水至刻度。2.2 20%氢氧化钠溶解:称取氢氧化钠20g,蒸馏水溶解后定容至100mL。2.3 pH 110试纸。2.4 0.5%次甲基蓝溶液:见ZB X 66040-87中2.1.1。 2.5 费林氏甲液: 见ZB X 66040-87中2.1.2。2.6 费林氏乙液: 见ZB X 66040-87中2.1.3。3 测定方法 精确称取粉碎并拌匀的样品,如大豆、豆粕或豆饼2g左右;面粉、大米、蚕豆、麦夫皮、甘薯粉、或高粱1g左右,放入250mL锥形瓶(或圆底烧瓶)中,再加入2盐酸100mL。然后把锥形瓶放置于加压锅内,以1kg/cm*2蒸汽压力保持30min(或在锥形瓶上用软木塞插一根一米左右长的玻璃管作为空气冷凝管,然后放置于水浴中加热至沸腾,并保持微沸3h ),取出冷却,逐滴加入20%氢氧化钠溶液中和至pH 67(用pH试纸测定)为止,中和完毕将其溶液全部转入250mL容量瓶中,瓶内所留残余物用蒸馏水冲洗23次,一并转入容量瓶中,定容至刻度。最后摇匀,用滤纸过滤,收集清液。用兰-艾农法(或其他方法)测定水解液的葡萄糖含量(R)。 测定方法见(ZB X 66038-87)。 4 计算 粗淀粉含量 S 计算如下: 0.9RV S = W 式中:S-样品粗淀粉含量,%; R-样品水解液含糖量,g/100mL; V-样品水解液体积,mL; W-样品重量,g; 0.9-葡萄糖换算成淀粉的换算系数。5 注意事项 5.1 本法(酸法)适用于含淀粉量较多,不含或少含其他能水解为还原糖的样品。由于酸水解时也会把半纤维素,多缩戊糖等水解为还原糖,从而使结果偏高。故测定结果称粗淀粉。若要测出较为精确的结果,可采用酶解法。酶解测定法见GB 5514-85粮食、油料检验淀粉测定法的淀粉测定法。麸皮等含较多的多缩戊糖,适用于酶法测淀粉含量, 酸法会使其结果偏高。其他原料一般都可用酸解法。 5.2 加压水解时,其压力和蒸煮时间应按要求加以控制。过高压力过长时间反而会使
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