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不同提取工艺对软枣猕猴桃口服液中多糖成分的影响 摘要：采用水醇法和离心法分别制备软枣猕猴桃口服液，并采用紫外分光光度法测定其所含多糖的含量。结果显示：离心法比水醇法制备的软枣猕猴桃口服液中多糖含量高。采用离心法制备其有效成分损失少，值得大力推广，为进一步研究优化软枣猕猴桃口服液的制备工艺提供参考。 下载 关键词：不同提取工艺；软枣猕猴桃；多糖 中图分类号：TS201.2；R285 文献识别码：A 文章编号：1001-828X（2015）019-000-01 本文拟通过将水醇法与高速离心法两种工艺制备的软枣猕猴桃口服液中多糖成分进行比较研究，为进一步研究优化软枣猕猴桃口服液的制备工艺提供参考依据。 一、实验材料、仪器与试药 1.实验材料 软枣猕猴桃（Actinidia arguta S采自于吉林省通化地区，经通化师范学院制药与食品科学学院关颖丽副教授鉴定。取其果实经干燥后，再进行粉碎，备用。 2.仪器与试药 H723 型可见分光光度计（天津市普瑞斯仪器有限公司）；电子天平（上海越平科学仪器有限公司）；KQ-100E型超声波清洗器（昆山市超声波仪器有限公司）；TDL-5-A 型离心机（上海安亭科学仪器厂）。 无水乙醇、葡萄糖、苯酚、浓硫酸，均为分析纯。 二、实验方法与结果 1.软枣猕猴桃口服液的制备 （1）软枣猕猴桃中有效成分的提取 称取软枣猕猴桃粉末50g，加入适量的纯化水浸泡20min，再加纯化水至400ml。煮沸后用文火煎煮40min，经搅拌过滤后得200ml药液，将药液分为体积相等的两份，分别用于水醇法制备和离心法制备。 （2）水醇法制备 向所制备的软枣猕猴桃提取液中的一份加入无水乙醇186ml，使其乙醇含量为65%，于冰箱中静置24小时。回收乙醇，蒸至无醇味后得药液45ml。加入无水乙醇135ml，使乙醇含量为75%。于冰箱中静置24至48小时，抽滤，回收乙醇，得25ml药液，再浓缩至17ml，滤过后药液，得样品1，放于冰箱中备用。 （3）离心法制备 将静置24小时的软枣猕猴桃提取药液用抽滤得澄清液，将其于离心机中离心，合并上清液备用，得药液60ml，将药液加热浓缩至17ml，配得药液，得样品2，放于冰箱中备用。 （4）苯酚试剂的配制 称取80g苯酚加20g水使之溶解。从中取75ml的80%苯酚于烧杯中，加入960ml水，制备成6%苯酚，置于棕色试剂瓶中备用。 （5）葡萄糖标准液制备 精确称取80干燥至恒重的葡萄糖1g，加入少量蒸馏水溶解，移入100 ml容量瓶中，加入0.5ml浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度，摇匀。再精密吸取1%葡萄糖标准液1ml加入至容量瓶，加水定容至1升。即配制成浓度为100g?l-1的标准葡萄糖贮备液。 2.方法学考察 （1）测定波长的选择 分别吸取葡萄糖溶液和供试样品溶液1.0ml于试管中，加6%苯酚溶液1ml，快速加入浓硫酸5.0ml，摇匀，静置30min，以蒸馏水为对照品同法操作，确定最大吸收波长。 （2）线性关系考察 精密量取葡萄糖标准溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0ml于试管中，加入蒸馏水至4.0ml，再加入1.0ml 6%苯酚溶液，加入浓硫酸5.0ml，摇匀，静置30min，以蒸馏水为空白组同法操作，分别于确定波长处测定吸光度。 （3）加样回收率试验 精密称取软枣猕猴桃粉末约0.5g，各5份，分别加入精制软枣猕猴桃多糖各5mg，按“2.1.2”的方法制备样品溶液，测定吸光度，并计算平均回收率。 3.软枣猕猴桃口服液中多糖含量的测定 精密吸取8个供试品溶液各1.00ml，测吸光度，平行测3次，取平均值，按下式计算粗多糖含量： 多糖含量（%）=CV10000/W 式中，C为样品溶液的葡萄糖的浓度（?g?ml-1）；V为样品溶液的体积；W为样品重量（?g）。 4.结果与分析 （1）最大波长的确定结果 经测定各溶液在485nm处均有最大吸收波长，确定检测波长为485nm。 （2）线性关系考察结果 标准溶液在不同浓度下的吸光度值，以吸光度（A）对浓度（C）进行线性回归，得到回归方程为：Y= 1.6364X+ 0.0208， r= 0.9926，葡萄糖含量与吸光度值在0.050.30 mg?ml-1范围内线性关系良好。结果见图1、表1。 （3）加样回收率试验结果 结果表明软枣猕猴桃中多糖的平均回收率为99.89%（n=5），结果表明回收率良好。 （4）软枣猕猴桃口服液中多糖含量测定结果 离心法制备的溶液中葡萄糖的吸光度值为0.486，多糖含量为0.56%；水醇法制备的溶液中吸光度值为0.339，多糖含量为0.38%。 图1 线性回归曲线 三、讨论 离心法通过离心机的高速运转使沉降增加，以加速药液中的杂质沉淀并实现除去杂质的方法，这种方法更适合于软枣猕猴桃这一类组分十分复杂的中药材及其制剂的有效成分的提取。对于软枣猕猴桃口服液来说，多糖类成分是主要活性成分，而水醇法中会损失，从而导致含量不如离心法高。离心法能解决水提醇沉时沉淀物中药液的回收，提高了药物的有效成分含量，因此离心法是一种值得推广的