观赏植物种质资源的研究.doc

观赏植物种质资源的研究1.1中国观赏植物对世界园林的贡献中国被西方国家称为“世界园林之母”，从十六世纪开始，西方国家就到中国采集植物标本，在18391938年的一百年的时间内，西方国家从中国引走了数千种植物，目前，仅爱丁堡植物园就保存了中国原产的植物1500多种，我国观赏植物能够在世界园林中确立如此高的地位，主要有以下几个方面的原因：世界上许多著名的观赏植物为我国特产，如山茶花（Camellia japoica）、金花茶（Camellia chrysantha）、牡丹（paeonia suffructicosa）、银杏（Ginkgo biloba）、珙桐（Davidia involucrata）、金钱松（Pseudolarix amabilis）、银杉（Cathaya argyrophy-lla）、白豆杉（Pseudotaxus chienii)、水松（Glyptostrobus pensilis）、台湾杉（Taiwania cryptomerioides）、水杉（Metasequoia glyptostnobcides）、蜡梅（Chimonanthus praecox）、七子花（Heptacodium miconioides）、喜树（Camptotheca acuminata）、青檀（Pteroceltis tatarinowii）、连翘（Forsythia suspensa）、猬实（Kolkwitzia amabilis）等等；世界上许多重要观赏植物的分布中心在中国，如槭属、山茶属、百合属、石蒜属、含笑属、木犀属、丁香属、报春属、竹类植物、兰科植物、蔷薇属等；世界许多重要观赏植物品种的形成都离不开中国植物，中国的月月红和香水月季是现代月季最重要的亲本，没有中国的月月红就没有周年开花的现代月季，没有中国的香水月季就没有现代月季的芳香气息；中国的高山杜鹃（Rhododen-dron）是形成杂种常绿阔叶杜鹃的亲本，英国人常说“没有中国的杜鹃花，就没有英国的园林”；中国的金花茶是培育黄色茶花的亲本；其它著名的种类还有报春属、兰属、绣线菊属、落新妇属等。1.2我国观赏植物种质资源的概况我国是世界上植物资源最为丰富的国家之一，全世界有植物种类约30万种以上，我国有3万多种植物，约占1/10，其中苔藓植物106科，占世界科数的70%；蕨类植物52科，2600种，分别占世界科数的80%和种数的26%；木本植物8000种（包括种、变种、变型和栽培种），其中乔木约2000种。全世界裸子植物共12科71属750种，中国就有11科34属240多种。针叶树的总种数占世界同类植物的37.8%。被子植物占世界总科、属的54%和24%。经过近年的调查和研究，我国观赏植物资源基本搞清，全世界观赏植物约有3万种，常用的约6000种；我国原产的观赏植物约12万种，常用的约2000种。1.观赏植物种质资源的收集和保护研究观赏植物种质资源的传统保存方法主要有原地保存和异地保存两种，超低温保存和核心种质构建是近年才开始的新技术。1.3.1原地保存（conservation in situ）指将种质资源在原生地进行保存，又称就地保存。设立植物种质资源原地保存区是主要形式，目前，全国各地建立的各种类型自然保护区、国家公园、自然地理标识、生境/物种保护区、景观/海景保护地、自然资源保护地等都属于这种类型。1.3.2异地保存（conservation ex situ）指将种质资源迁移出原生地栽培保存，又称迁地保存。异地保存的主要形式有国家和地方建立的植物种质资源库、植物良种基地收集区（圃）、植物园、树木园及种子资源贮藏库等。1.3超低温保存（cryopreservation）是指将植物活体材料在超低温条件下（-196）长期保存，待需要的时候将其恢复到常温状态，并确保其正常生长的一套技术。种质资源低温保存（cryopreservation）是由cryo和preservation组成，从词义看，低温所涉及的温度范围是不确定的。习惯上，人们将80以下的低温称为超低温，干冰温度（70）称为极低温，低温则从4往下推（李广武等，1998）。对植物而言，低温常常是指那些比常温稍低一些的温度。如果低温超过细胞原生质所能忍受的临界温度，就会致使植物细胞遭受冻害而死亡。如甜橙树发生冻害的临界温度通常在6.5，枳壳通常在20左右（沈德绪等，1986）。目前常用的超低温保存方法可分为两类，即冷冻诱导保护性脱水的超低温保存和玻璃化处理的超低温保存。在超低温条件下，生物的代谢和衰老过程大大减慢，甚至完全停止，因此可以长期保存植物材料。植物种质资源的超低温保存开始于20世纪50年代，保存的对象主要是农作物、果树、经济作物、药用植物等，观赏植物的比例非常小。我国超低温保存研究开始于1983年，郑光植等将药用植物三分三（Anisodus acutangulus）的愈伤组织和悬浮培养细胞进行了冰冻贮藏，观赏植物种质资源的超低温保存则是近年才开始进行研究开展，目前，观赏植物中实现超低温保存的种子、胚轴、体细胞约有26科51个属，保存花粉的约有9个科13个属，保存茎尖分生组织的约有14个科20个属。1.3.4核心种质构建核心种质（Corecollection）就是通过运用一定的方法从整个种质资源中抽取一部分个体,以尽量少的个体和遗传重复,尽可能大地代表整个种质资源的遗传多样性。核心种质的概念是1984年由澳大利亚的Frankel首先提出，并经过Brown（1989）的发展，逐步完善，研究的步骤和内容主要包括（Hodkin1993）：数据的收集整理；收集数据的分组；样品的选择；核心种质的管理。对于核心种质的代表性的评价，不同的学者分别从形态特征、表现性状和分子标记上进行了评价，提出了大量的代表性的评价参数，目前，对评价参数的有效性还没有统一的认识。据统计，至20世纪末，全世界已经在51个物种上构建了60多个核心种质（Brown和Spillane,1999）,我国也在主要农作物和经济植物种类上构建了核心种质，包括芝麻、棉花、小麦、大豆、油菜、水稻、茶树、果梅、亚麻等。关于观赏植物核心种质构建的研究并不多，仅明军（2005）在梅花上构建了核心种质，对许多重要的观赏植物都还没有开展相关的研究。观赏植物引种驯化研究引种驯化的主要理论2.1.1关于引种驯化的概念不同定义引种驯化是指将野生植物或栽培植物引入到自然分布区或栽培区以外栽培，通常分为简单引种和驯化引种。如果引入地区与原产地自然条件差异不大或引入的观赏植物本身的适应范围很广，只采取简单的措施就能适应新的环境，能够生长发育，达到预期的观赏效果的称为简单引种；如果引入地区与原产地自然条件差异较大或引入的观赏植物本身的适应范围较窄，只有通过其遗传性的改变才能适应新的环境或必需要采取相应的农业措施，使其产生新的生理适应性的方式称为驯化引种。引种驯化实质上就是一个由野生变家生，由外地栽培变本地栽培的过程。2.1.2引种驯化的主要方法和理论引种驯化的主要理论有达尔文学说、气候相似论、并行植物指示法和嫁接法、米丘林学说、栽培植物起源中心学说、植物地理学差示法、专属引种法、生态历史分析法、区系发生法、生态相似法。近年来我国观赏植物引种驯化的实践和成就据潘会堂、张启翔统计，在20世纪90年代以前的20年间，我国在商品观赏植物（包括盆花、观叶植物、切花、球根）的引种方面，共引入了500多种，4000多个品种。目前，我国商品生产中的观赏植物品种，绝大多数都是国外培育，尤其是大宗的切花、盆花和花坛植物品种，如月季、香石竹、唐菖蒲、百合、菊花、大花蕙兰、蝴蝶兰、鸢尾、杜鹃花、风信子、安祖花、马蹄莲、六出花、报春类、龙胆类等等；在绿化植物材料的引种方面，棕榈科植物是近年来引种的热点，全世界约有棕榈科植物200余属、3000余种，我国约有18属、100多种，通过近10年的大规模引入，我国棕榈科植物达到了90余属、300余种；彩叶植物也是近年重点引人的观赏植物，目前，我国共引入各类彩叶植物（包括春色叶类、秋色叶类和常绿色叶类）10多种，品种更是多达数百个；我国草坪草尤其是冷季型草坪草，基本上都依靠进口，平均每年引进品种30多个。我国观赏植物引种驯化中存在的主要问题和对策我国观赏植物的引种迅速缓解了我国新优品种缺乏的矛盾，但是大量的新品种引种工作中也暴露出一些严重的问题，主要体现在以下几个方面：（）重引进轻培育，很少有新品种培育出；（）过度重视观赏性状，轻视生态适应性，限制了栽培范围；（）重引进品种，轻引进技术，生产和栽培技术薄弱；（）引进过程中不注重检疫，增加了有害生物入侵的风险。针对目前我国观赏植物引种驯化中的问题，在解决我国观赏植物生产和城市绿化中新优品种缺乏的问题的同时，保证我国观赏植物产业的健康发展，提出了以下几条对策：（）加强对我国观赏植物种质资源的收集、开发和利用，创造自己的优良品种；（）在引进观赏植物品种的同时要注意引进相应的先进的栽培技术；（）加强对引进品种的选择和改良，培育适合我国气候条件的优良品种；（4）严格检疫制度，防范病虫害的入侵。遗传育种研究常规育种3.1.1选择育种选择是有效利用变异获得新品种的技术，它与其他育种方法紧密结合，贯穿于新品种产生的全过程。选择育种的方法包括芽变选种、实生选种、无性系选种。（）芽变选种芽变是观赏植物重要的变异来源之一，如菊花、月季、郁金香、飞燕草等，其花色、花径、花型、叶色、叶形等都有非常高的芽变频率。从中选出的优良变异可通过无性繁殖保持，是选育新品种的一种简易又行之有效的手段。观赏植物中许多花彩斑、嵌合花都是质体变异产生，如天竺葵、月见草、吊兰等;花叶常春藤和欧洲女贞也是因质体突变缺绿而引起的。长期无性繁殖的木本观赏植物如梅花、牡丹、山茶常有芽变品种产生，表现为垂枝、龙游、金边、银心、跳枝等类型。从杜鹃花五宝株系和四海波系中就选育出多个双色花芽变品种。（）实生选种实生选种是在自然授粉所产生的种子播种后形成的实生群体中反复评选，即经单株选择育成新品种。我国菊花很早就采用实生选种。广群芳谱(1708)中记载：“明年初春，自然出苗收种，其色多变”。现有的梅花品种中约有58%来自实生选种。武汉中国梅花研究中心通过实生选种育成36个梅花新品种。中国荷花研究中心从自然杂交后代中选出新品种128个。例如从中株型、重瓣、白花的白碗莲实生苗中选出了小株型、重办型的白花玉碗。（）无性系选种无性系选种是指对那些在整体性状或某些主要性状远远超过立地条件周围的同种同龄中一株加以选择的方法。在自然繁殖或人工繁殖的情况下往往有表现优良的单株。通过评选、繁殖、对比实验，可以产生新的品系。我国有许多优良的观赏植物是通过无性系选种保留下来的。陕西榆林卧石山植物园通过无性系选种选出了臭柏、杜松、柳叶鼠李、文冠果、扁桃、刺玫、小叶白蜡、细叶小檗等优良植株。3.1.2杂交育种杂交育种是传统的经典的方法。是国内外创造观赏植物新品种、新类型的基本途径。我国通过人工杂交己育成荷花、碗莲、梅花、紫斑牡丹等新品种等。杂交的方法包括：（）品种间杂交一般是用2个遗传性不同的品种进行杂交，然后对杂交后代进行培育和选择。创造出优良的新品种。如原产高加索的一种姆罗芍药（Paeoniamlokosewitschii）。花黄色、花期早、易结种子，将其选为母本。用不孕的优良品种月光（Clair delune)的花粉与之杂交，结果将得到有繁殖力的杂种新月光；黄国振以杂种荷花Mrs. Perrv D. Slocum (红千叶美洲荷花）作亲本，自交获得世界上唯一重瓣、黄色、大花的荷花新品种“友谊牡丹莲”。从而填补了我国荷花缺少重瓣、黄色品种的空白。（）远缘杂交远缘杂交能在一定程度上打破物种之间的界限，促使不同物种之间的基因交流，具有近缘杂交所不能获得的优良特性。为创造新类型或改进现有品种开辟了新的途径。马燕运用我国的蔷薇、古代月季和现代月季进行远缘杂交，培育出了耐寒、耐旱、抗病虫害、管理粗放的刺玫月季品种群。黄善武用我国的弯刺蔷薇与现代月季杂交育出了能耐-20的种间杂种大山之光。日本京都大学（1982）以原产中国、苏丹和分布在非洲、印度、印尼等地的凤仙花属20个种进行种间杂交，培育出许多株型、花色等不同的新品种。OkazakiK（1990）为了把粉红色引入开白花的麝香百合中，采用切断花柱授粉法将其分别与红点百合、日本百合杂交，培养获得从白色到比红点百合稍浅一些的各种花色变异的杂交后代。诱变育种3.2.1物理诱变育种物理诱变有温度激变、机械创伤和以电离辐射为主的辐射诱变。天津园林绿化研究所对仙客来用电子处理进行辐射育种，育出了彩云、彩虹、彩蝶系列品种。中国林科院观赏植物中心利用辐射育种技术进行水仙株型育种，己获得水仙花矮化株型。3.2.2化学诱变育种化学诱变主要是利用秋水仙素等化学诱变剂诱导多倍体的产生，从而产生新品种。3.2.3航空诱变育种航空诱变育种是继常规育种、分子生物学技术育种的又一有效的育种新途径。空间条件诱变效果比常规诱变更好，有益变异多、变异幅度大、稳定性强，大大缩短了育种周期。中国科学院遗传研究所自1987年以来，先后将一串红、鸡冠花、矮牵牛等27种观赏植物种子送入太空，这些观赏植物种子出现了许多地面上无法获得的变异。一品红矮化性状明显，花期长、分枝多、花朵大；原本红色的矮牵牛出现了花色相间、一株上长出不同颜色的花朵；三色堇花色变为浅黄色，花期更长。现代分子生物学在观赏植物育种中的运用.基因工程20世纪80年代以来，基因工程技术应用到高等生物的物种改良和新品种的培育上，为观赏植物花色的基础研究和品种选育带来了新的思路和途径。它可以导入控制某种（些）性状的基因扩大其基因库，可以定向修饰观赏植物的某个(些）性状而不改变其原有性状，因此可在保持原有性状的基础上，改变观赏植物的花色，甚至创造该物种所不具有的花色。在较短时期内培育出稳定遗传的新品种、新类型。.细胞工程通过原生质体融合和体细胞培养的方法产生杂种细胞，进而把这些杂种细胞人工培养成杂种植株，可选育出新品种。Matthews(1991年）采用黄刺玫的杂交种进行原生质体培养，获得再生植株。Power等(1977）用矮牵牛和拟矮牵牛（Petunia porodii）进行体细胞杂交获得杂种，目前，在矮牵牛、悬铃木、补血草、郁金香等100多种观赏植物的原生质体再生植株获得成功。3.3.3离体培养观赏植物体细胞无性系变异是继有性杂交和诱发变异之后，创造遗传变异的又一个来源，其中有的变异可作为观赏植物育种的遗传资源，有的则可以直接育成新品种。离体培养中，高浓度的激素可诱导愈伤组织发生变异。Vajrabhaya对石斛兰的205株再生植株进行检查，发现有5株是四倍体。体细胞无性系变异不仅发生的种类品种较多，而且变异性状的类型比较广泛，几乎所有的观赏植物在离体培养中都存在着不同程度的变异，其变异性状以花色、花期、叶色、株型等观赏性状为主。观赏植物种质鉴定园艺植物的品种鉴定有许多方法，从直观的形态学、孢粉学、细胞学方法到微观领域的生化指纹图谱都可以用来进行品种鉴定，鉴定方法的选择在某种程度上依赖于所需鉴定工作的具体要求。上世纪70年代以前，形态学鉴定是主要的检测方法，在品种鉴定和纯度分析上起到很重要的作用。目前，在观赏植物种质鉴定中研究和应用比较多的是生化指纹图谱。3.4.1形态学方法最早的品种鉴定以形态学为基础，其特点是以植物的外部形态特征为依据，如：株高、枝姿、叶形、花型、花色、果形、果重、种子等等。为了使形态特征的描述具有可比性，国际植物遗传资源专家编制了多种植物的描述记载标准和方法。中国园艺工作者予以借鉴，编制了适合中国情况的多种园艺植物的品种资源描述记载项目评价标准，如梅花二元分类系统（陈俊愉）、桂花（刘玉莲,向其柏,2000）等。当品种数量少、形态差异明显时，形态标记简单、直观，因此，长期以来栽培植物的品种资源鉴定包括园艺品种的国际登录通常都是采用此类标记。但是，形态标记数量少，遗传表达有时不太稳定，易受环境及基因显隐性的影响，使其在品种中的应用受到限制，当品种数量超过1000，记录特征项超过100时，这些方法就显得力不从心。由于观测、描述等方面的人为偏差，使形态学标记鉴定技术难以在现代纷繁复杂的杂交品种鉴定中独自担当主角，而且形态学标记由于标记数量的限制，已明显跟不上对越来越多的园艺品种进行鉴定的要求。3.4.2孢粉学方法花粉的形态特征受基因型控制，更少受外界条件影响,是探讨植物起源、演化及亲缘关系的重要特征之一。花粉形态结构的数据正逐渐成为植物系统学研究的一个不可缺少的组成部分（陈因硕，1992）。花粉形态特征影响到许多植物种、属、科的重新划分，如将芍药属植物从毛茛科分离出来便有花粉形态研究的支持（席以珍，1984）。近10年来，许多学者在应用孢粉学方法进行园艺植物品种种质资源鉴定方面做了许多有益的尝试，已经对枣（李树林,1987）、果梅（褚孟嫄，1988）、蔷薇类（马燕等，1991）、梅花（包满珠，陈俊愉，1992）、菊花（M. Endo，1990;王四清，1993）、荚蒾属(凌古平等，1995)、锈线菊（谢英渤，2000）等等。大量有关栽培植物品种花粉形态的研究认为花粉形态可以作为品种分类和鉴定甚至是无性系鉴定的依据（Ahmedullah，1983; Matusuta，1989;彭建营，1991;刘庆华，1998；张西丽等，2000），然而也有人持不同的意见（徐宏汉等，1989）。植物花粉形态的所具有的稳定性和保守性，为高级分类单位（科、属、种）的研究提供了有价值的分类信息，而品种间的差异并不一定能在花粉形态上完全体现。在探讨栽培品种分类时，单纯依靠孢粉学资料就不免带有片面性，获得的结果容易产生偏差，因而其用于品种分类的价值是有限的。不同的制样方法对花粉粒的形状有一定的影响，即使同一品种内花粉粒之间也存在个体差异，所以如果仅以个别花粉性状的差异作为分类鉴定依据有时并不可靠，必须结合其它指标进行综合考察（陈学森，1992;方从兵等，2000）。3.4.3细胞学方法细胞学方法是从20世纪30年代起兴起的一种利用染色体数目、核型、带型、减数分裂的行为分析等进行植物分类的方法。随着分带、细胞原位杂交等新技术的应用，染色体水平上揭示出了更多的遗传多样性。特别是多倍体在园艺植物育种和生产中显示出特殊重要性，使得该技术在园艺植物遗传多样性研究及品种鉴定技术中成为有效方法之一。已在苹果（俞宏，1985）、猕猴桃（姚家龙，1988;何子灿，1998）、梅花（黄哲，1989;黄燕文，1995）、百合属（劭建章，1994）、金钱松属（李林初，1994）、草莓属（葛会波，1997）、牡丹（李思锋等，1989）、羽叶点地梅属（孔宏志，1999）、等几乎所有常见的园艺植物上都进行了研究。由于染色体制片技术和分辨率的限制，核型分析应用于品种鉴定技术还有一定的难度，比如王然等（1992）对蔷薇科若干种核果类植物的核型分析，认为属的特异性不甚明显；陈学森等（1996）对中国银杏品种的研究表明银杏5大类50个品种其核型基本一致。对于大多数具有小染色体和结构差异较小的园艺植物来说，核型分析还不足以达到进行品种鉴定的要求。但是随着各种新技术的发展和应用，细胞学方法在将来可能会成为园艺植物品种资源鉴定的一个有效手段（宋婉，续九如，2000）。3.4.4生化指纹图谱生化指纹图谱（Biochemical Fingerprint map）包括贮藏蛋白电泳指纹图谱和同工酶电泳指纹图谱。蛋白质和酶的组成是由遗传因素决定的，不受环境的影响，其组分上的差异可以反应出基因性的不同，因而可作为品种的“生化指纹”。通过蛋白和同工酶电泳表达的指纹图谱简便快速，通常只需12天就可完成品种检测工作，而且产生的指纹图谱分辨率高、重复性好，可以被广泛采用。包括：贮藏蛋白电泳指纹图谱、同工酶电泳指纹图谱、DNA指纹图谱等。（）贮藏蛋白电泳指纹图谱蛋白质作为基因的直接稳定产物，能反应生物DNA组成上的差异，作为品种鉴定的蛋白质首先必须在品种间有丰富的多样性而且容易检测出来。最广泛的用于种质鉴定的蛋白是种子贮藏蛋白。在一些重要作物上，许多国家已建立起了种子蛋白指纹图谱数据库(Draper S R,1987)。在果树上，朱立武(1988)肯定了柑橘叶片蛋白质电泳带型的种间差异和种子蛋白质种以下分类群间的差异。蛋白质电泳图谱技术在大白菜(崔洪昌,郑晓鹰,1993)、泡桐(FAN Guo-qiang，2001)等许多园艺植物上得到应用。一般认为，目前采用的高效液相色谱法对品种种子蛋白的水溶性蛋白进行色谱分离，根据不同品种由大小不同的主要色谱峰组成的“指纹”图谱，可以很容易将各品种区别开。（）同工酶电泳指纹图谱同工酶谱差异主要是由决定酶蛋白本身的等位基因或非等位基因的差异造成的。同工酶有较丰富的变异类型，可以用作品种的指纹图谱，并广泛应用于许多作物的品种鉴定（刘华，1993），已成为目前园艺植物品种鉴定、雌雄株鉴别、研究系统与演化的一项重要手段。目前几乎涉及到所有种类的园艺植物，多种酶系统在枣(王秀伶,1999)、杏(郭秀婵,1998)、葡萄(Vidal.J.R.1998)、果梅(褚孟嫄1988)、梅花(汪祖华,1991;包满珠,陈俊愉1993;汪诗珊,1995)、龙眼(李建光,1997)等种类的品种分类中开展了研究。同工酶标记相对于形态学标记来说是一大进步，但是这种标记同时又具有一些缺陷，如多态性偏低、结果不稳定、具有组织特异性和阶段特异性等等，使同工酶在指纹图谱研究中受到限制。（）DNA指纹图谱的研究概况DNA指纹图谱直接反映DNA水平上的差异，是当今最先进的遗传标记系统之一。DNA指纹图谱技术与上述的技术相比具有以下优势：直接以DNA的形式表现，在植物的各个组织、各个发育阶段均可检测；多态性高，自然存在着许多等位变异，不需要创造特殊的遗传材料；酶切位点遍布整个基因组，遗传稳定；表现为“中性”，即不影响目标性状的表达，与不良性状无必然的连锁；有许多标记表现为共显性（codominace），能够鉴别出纯和基因型与杂和基因型，提供完整的遗传信息。DNA分子标记可以弥补和克服在种子纯度的形态学鉴定及同工酶、种子蛋白电泳鉴定中的许多缺陷和难题,可作为传统品种鉴定方法的有益补充和发展。目前，植物研究中较常用的指纹图谱主要有限制性片断长度多态性（restriction fragment length polymorphism,简称RFLP）、随机扩增多态性DNA（randomly amplified polymorphism DNA,简称RAPD）、微卫星DNA(microsatellite DNA,又叫simple sequence repeats,简称SSR)、扩增片断长度多态性（amplified fragment length polymorphism,简称AFLP）等。RFLP是Grodzicker于1974年发明的，从上世纪80年代起开始应用于植物上,如玉米和番茄（Helentjaris等，1986）,之后其它作物中的RFLP研究相继开展。到目前为止,RFLP已在许多植物的品种鉴定和纯度检测上得到应用。Smith(1991)利用RFLP技术使78个用同工酶蛋白电泳技术很难以区分的美国玉米杂交种和自交系得到快速的、方便的鉴定。Vacino(1993)等人利用RFLP技术将54个意大利普通小麦品种区分开。谭文澄等（2000）在对兰属和石槲的研究中，利用此方法得到具个体特异的DNA指纹图，以区分品种。王华忠（1998）对甜菜属近缘野生种和栽培种共12个材料进行了RFLP分析,结果表明了利用RFLP分子标记技术可以准确地鉴定和识别品种或品系间的特异性。RFLP指纹技术重复性好、共显性、不受植物生长发育阶段的影响，但RFLP需要的DNA量较大，检测方法较为繁琐，周期长，多态检出效率低，能提供的信息有限。因而RFLP在植物图谱中的应用受到一定的限制。RAPD是由Williams等1990年发展起来的一种分子标记技术，相对于RFLP来说比较简单，DNA用量较少，容易掌握，检测灵敏、方便，多态性强，因而在品种鉴定和纯度分析得到广泛应用。陈新露等（1995）用RAPD技术证明了6个丁香(Syringa)品种是同一品种不同无性系。林伯年等（1999）对杨梅属植物的24个材料进行了RAPD带型及聚类分析，结果证明RAPD技术可作为种级水平的分类鉴定依据。周岐，王章荣(2001)利用RAPD分子标记技术对31个杂种马褂木无性系的研究，成功地对各无性系进行了区分。此外，利用RAPD技术在杏（Gogorcena Y等，1994）、龙眼（林同等,1998）、菊花（戴思兰）、荔枝（丁晓东等，2000）、梅花（刘青林等，1999）、金银花（石俊英等，2001）、柑橘(Sugawara K等，1995)、枣(宋婉，1999)、芍药（郭先锋，2003）、葡萄(张立平，1998)等进行品种鉴定和亲缘关系的分析，均取的了良好的效果。RAPD技术由于是显性标记，不能区分杂合和纯合基因型。更重要的是，RAPD检测受反应条件的影响很大，重复性低，因而使RAPD在指纹图谱中的应用受到一定限制。微卫星DNA（Microsatellite）又称为简单重复顺序，是由几个核苷酸（25个）为重复单位组成的长达几十个核苷酸的重复序列。由于每个SSR两端的序列多是相对保守的单拷贝序列，因而可根据其两端的序列设计特异引物进行扩增。根据扩增产物长短的变化显示不同基因型的个体在每个SSR位点上的多态性（LitterLuty,1989）。SSR具有RFLP的遗传学优点，又比RAPD重复性和可信度高。目前已广泛应用于玉米（SeniorHeun,1993）、大豆(Morgan