鸭疫里氏杆菌的鉴定及药敏试验.doc

天津农学院毕 业 论 文 中文题目: 鸭疫里氏杆菌的鉴定及药敏试验 英文题目: Anatipestifer in ducks infected identification and susceptibility testing 学生姓名 玉苏普卡迪尔.阿卜杜拉 系 别 动物科学系 专业班级 2010级动物医学专业升本班 指导教师 贾 英 科 成绩评定 2012 年6月目 录1.前言.41.1分类41.2血清型41.3诊断.42试验材料.52.1试验设备522试验用具.52.3试验试剂.52.4试验用病料.53试验方法53.1细菌分离鉴定.53.2触片染色镜检63.3菌落观察63.4肉汤增菌培养基.63.5生化试验.63.6药敏试验.64试验结果.64.1染色镜检结果64.2菌落观察结果64.3生化试验结果74.4MIC测定结果.85讨论分析.85.1生化鉴定试验注意内容.85.2形态学坚定地意义95.3药物筛选与治疗.96 总结12参考文献13致谢13附录1：外文文献14附录2：外文文献中文译文22摘 要从天津不同地区临床疑似鸭疫里氏杆茵感染病死鸭中分离到12 株鸭疫里氏杆菌，通过细菌形态、培养特怔、生化试验，鉴定为鸭疫里氏杆菌。采用微量液体二倍稀释法，测定了14 种常用抗菌药物对12 株鸭疫里氏杆菌的抗菌活性，结果表明，有2 个菌株均对14 种药物高度敏感，其MIC值均1g/ mL，其它菌株MIC值差异较大，所有抗菌药对Y4 菌株的最小抑菌浓度较高，其MIC值均32g/ mL。关键词：鸭疫里氏杆菌；分离；鉴定；药敏试验 ABSTRACTAbstract： Twelve bacteria strains were separated from dead ducks in different areas of Tianjin Province. They were identified as Riemerella anatipestifer by bacteria morphology, cultural characteristic and biochemical test. Using the micro liquid two-fold dilution method, antibacterial activity of 14 antibiotics against 12 Riemerella anatipestifer strains was determined. The results showed that 2 of 12 strains were sensitiveto all the 14 antibiotics and all the MIC values were equal or less than 1g/mL. There were significantdifferences among the MIC values of other strains. The MIC values of Y4 strainto all the drugs were very high and all the MIC values were equal or greater than 32g/mL.Keywords:Riemerellaanatipestifer;isolation;identification;drugsensitivitytest鸭疫里氏杆菌的鉴定及药敏试验玉苏普卡迪尔.阿卜杜拉（天津农学院 动物科学系 ）1 前言鸭疫里氏杆菌( r iemer ella anat ip estif er , RA ) 是引起雏鸭、雏火鸡以及雏鹅等多种禽类感染发病的病原, 对18 周龄的鸭危害最大, 呈急性或慢性败血症, 病变以纤维素性心包炎、肝周炎、气囊炎、脑膜炎以及部分病例出现干酪性输卵管炎、结膜炎、关节炎为特征, 俗称鸭传染性浆膜炎。过去一直认为该病原早由Hendrickson 等报道于1932 年, 但德国学者Seg er s 等( 1993) 认为该病原最早由Riemer 首次报道于1904 年, 引起鹅群发生败血症。本病曾先后被称之为“新鸭病”、“鸭败血症”、“传染性浆膜炎”、“鸭疫综合征”、“鸭疫巴氏杆菌感染”。目前, 在世界各养鸭国家和地区, RA 是造成肉鸭发病和死亡的重要病原之一。目前该病原的研究主要集中在细菌的分类、血清型和疫苗研究方面。1.1分类Hendrickso n 等( 1932) 将本菌命名为鸭疫斐佛氏菌。Bruner 等( 1954) 将本菌命名为鸭疫莫拉克氏菌( 共同) 和鸭疫巴氏杆菌( 形态) 。Bang un 等( 1981,1987) 认为本菌不属上述2 种。Rossau ( 1991) 将本菌划归黄杆菌/ 噬纤维菌rRNA 同源群。在第九版伯杰氏细菌鉴定手册中, 将其列为位置未定的种。德国学者Seg er 等( 1993) 在Rossau 基础上, 通过对16S rRNA 序列和DNA-rRNA 杂交结果以及细胞内蛋白质和脂肪酸含量进行分析, 指出: 引起小鸭传染性浆膜炎的细菌不应为莫拉克氏菌和巴氏杆菌。提出将本菌归列为黄杆菌/ 噬纤维rRNA 同源菌群,同时将其划为独立的一属, 并将本菌的命名由鸭疫巴氏杆菌更改为鸭疫里氏杆菌。1.2血清型目前, RA 血清型分类都是基于凝集试验和琼脂凝胶试验。按照Sandbu 等( 1991) 建议形成的分型系统, RA 共21 个血清型, 由此前的17 个血清型, 加上Lo h 等( 1992) 报道的18、1 9 Pathanasophon等( 1995) 报道的20、21 型。但Ry ll 等( 2000) 认为20型参考菌株670/ 89 不属于RA, 故实际上RA 只有20个血清型。我国自1982 年郭玉璞等在北京确定血清1 型鸭疫里氏杆菌的存在后, 全国各地相继有本病的报道, 直到1987 年仍然认为我国仅有血清1 型鸭疫里氏杆菌存在, 但据张大丙等( 1999) 报道, 从北京、河南、上海分离并鉴定了1、2、6、10、11、13、14 等7 个血清型, 血清10 型更易感染3周龄以内的小鸭。此外张大丙等( 2002a, 2002b) 还报道, 6 和12 型、1 2 和16 型存在交叉凝集反应, 2 和17型有单向或双向交叉凝集反应。2002 年又报道从河北分离鉴定了1 5型。汪铭书等( 2 001 , 2 002 ) 先后在全国28 和25 个省( 市、自治区) 分离到血清3型和血清5 型鸭疫里氏杆菌, 因此我国至少有1、2、3、5、6、10、1 1、13、14、15 等10 个血清型。由于地域差异性, 鸭疫里氏杆菌在不同国家的流行情况不一。1.3诊断本病的诊断仅仅靠临床症状是不可靠的, 必须依靠RA 的分离, 以便与其他引起相似症状或损伤的病原区别, 如多杀性巴氏杆菌、大肠杆菌或沙门氏菌。然而由于其它细菌的优势生长或是刚好在败血症时期, 从病料中分离往往是困难的( Hig gins 等,2000) , 因此, 在诊断上要注意。适于分离的组织有: 心血、脑、气囊、肝和病变中的渗出物等, 此外还有骨髓。从骨髓中分离病原, 简单易行, 不易污染。用于分离培养RA 的培养基有胰酶大豆琼脂( T SA ) 、血液琼脂、巧克力琼脂、P-L 培养基等固体培养基以及相应的液体培养基和胰蛋白胨肉汤( TB) 、胰蛋白胨葡萄糖硫胺素肉汤( TGT )等。鸭疫里氏杆菌的鉴定方法, 最常用的有生理生化试验, 但由于本菌营养要求较高, 用商用生化管做生化试验产生的结果往往不稳定、不一致, 因此采用自制生化管, 试验结果往往更可靠、典型。血清型的确定对选用适当的疫苗预防该病有重要意义。平板( 试管) 凝集反应和琼脂扩散试验可用来鉴定血清型, 但要考虑某些血清型间的交叉凝集反应。必要时可测定细菌DNA 的G+ C 百分含量以及未定型菌与定型菌进行DNA 同源性比较, 以便从基因组水平上归类或鉴定) 本试验通过细菌形态、培养特征和生化试验鉴定所分离菌株，并采用微量稀释法测定了阿莫西林、头孢吡肟、环丙沙星、左氧氟沙星、氟苯尼考、多西环素、阿米卡星、庆大霉素、黏菌素和亚胺培南等14临床常用的抗菌药物对12 株临床分离的鸭疫里氏杆菌的最低抑菌浓度，为临床合理选择抗菌药、防止耐药菌株的传播提供重要依据。近日从某个养殖厂采取病料，遂将剖解后采取的病料，用于实验室鸭疫里氏杆菌检验和药敏实验。现将具体方法、操作过程、结果分析等介绍如下。2 试验材料2.1 试验设备 超净工作台、恒温箱、高压蒸汽灭菌器、冰箱、干热灭菌器、电子天平。2.2 试验用具锥形瓶、试管、烧杯、平皿、显微镜、载玻片、盖玻片、棉塞、纱布、擦镜纸、酒精灯、微量移液器、火柴、接种针、量筒、染缸、 细菌涂布棒、钥匙、游标卡尺、镊子、洗瓶. 2.3 试验试剂普通琼脂平板、鲜血琼脂平板、巧克力平板、伊红美蓝平板、麦康凯平板、TSA及TSB培养基、香柏油、二甲苯、草酸铵结晶紫染色液、革兰氏碘液、95%酒精脱色液、沙皇染色液、75%酒精、蒸馏水、乳糖发酵管、麦芽糖发酵管、甘露醇发酵管、蔗糖发酵管、甘露糖发酵管、木胶糖发酵管、尿素发酵管、蕈糖发酵管、N乙酰葡糖胺发酵管、硝酸盐发酵管、药敏片（阿莫西林、头孢吡肟、环丙沙星、左氧氟沙星、氟苯尼考、多西环素、阿米卡星、庆大霉素、黏菌素和亚胺培南）2.4 试验用病料 天津市某养殖厂病死鸭采集病料3 试验方法3.1 细菌分离鉴定无菌采取病死鸭心血、肝脏和脑组织等病料分别接种于胰蛋白胨大豆琼脂平板、巧克力琼脂平板、鲜血琼脂平板和麦康凯琼脂平板上，置烛缸内37培养2448 h。观察菌落形态，挑取单个疑似菌接种于巧克力琼脂平板上作纯培养；通过细菌瑞氏染色和革兰氏染色镜检及生化试验后观察结果。3.2 触片染色镜检 镊子夹持病料，在载玻片上轻轻触压，留下薄薄的一层触痕。 用酒精灯干燥固定，染缸上染色，草酸铵结晶紫染色3分钟后蒸馏水冲洗，革兰氏碘液作用2分钟后蒸馏水冲洗，95%酒精脱色液脱色1分钟后蒸馏水冲洗、沙皇染液复染30秒后蒸馏水冲洗晾干。 镜检时，含有二甲苯的擦镜纸擦拭油镜，低倍镜定位，定位后滴加香柏油，用油境镜检，来回转动微调螺旋，确定有无细菌、染成的颜色、形状、排列。3.3 菌落观察 超净工作台中，镊子夹持病料划线涂抹营养琼脂，放入恒温箱中、37下培养24小时。观察菌落颜色、形状、光泽、干燥或湿润、菌落边缘是否整齐、是否凸起。3.4 肉汤增菌培养 在超净工作台中，用酒精灯给试管口、锥形瓶口灭菌，向试管中倾倒肉汤5毫升左右。接种环用酒精灯灭菌。在酒精灯火焰处，挑取菌落接种到装有肉汤的试管中，盖上管塞，在37下培养24小时，观察肉汤状态和备用。3.5 生化试验在超净工作台中，将乳糖发酵管、麦芽糖发酵管、甘露醇发酵管、蔗糖发酵管、甘露糖发酵管、木胶糖发酵管、尿素发酵管、蕈糖发酵管、N乙酰葡糖胺发酵管、硝酸盐发酵管的一端用砂轮划痕折断，接种针蘸取增菌培养液接种到各发酵管中，每接种一管火焰灭菌一次。接种后的试管放入无菌的平皿中，放入恒温箱中，在37下培养24小时，观察颜色变化。3.6 药敏试验首先将药液配成初浓度为1 280 g/mL 的储备液，纯培养好的菌液使用前稀释1 000 倍，采用微量稀释法，测定抗菌药物的最小抑菌浓度（MIC）。4 试验结果4.1 染色镜检结果 革兰氏染色为阴性，菌体呈单个或成双的短小杆菌，不形成芽胞；瑞氏染色为两极浓染的短小杆菌4.2 菌落观察结果接种TSA平板, 37 烛缸内培养24 h, 均形成圆形、隆起、露珠样、直径为0.52 mm的菌落。菌株接种鲜血琼脂平板培养2448 h后, 有6株在有氧条件下生长更好; 疑似RA的19个菌株在伊红美蓝平板、麦康凯平板、普通琼脂平板上均不生长;另外6株都能在普通琼脂平板上生长良好, 接种液体培养基37 培养2448 h表现均匀混浊, 不形成菌环、菌膜; 在麦康凯琼脂上, 其中4株形成均匀一致的粉红色菌落, 2株形成无色; 伊红美蓝平板上, 4株形成黑色带金属光泽菌落, 2株形成中等大小半透明菌落4.3 生化试验结果对葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖均不发酵, 靛基质试验、VP 试验、枸椽酸盐试验和硫化氢试验都为阴性, 尿素酶试验为阳性。在半固体琼脂培养基上沿穿刺线上生长, 没有发现该细菌具有运动性。具体结果见表1。4.4 MIC 值测定结果用阿莫西林、氨苄西林等14 种药物对12 株分离细菌进行了药敏试验。结果见表2、表3。由表2 可知，分离菌株(Y4 和Y12菌株除外)对亚胺培南、头孢吡肟高度敏感，其最小抑菌浓度（MIC） 值分别0.5g/mL 和16g/mL；其它药物对分离菌的最小抑菌浓度差异性较大。另外，上述多种药物对Y4 菌株的最小抑菌浓度均128g/mL，说明Y4 菌株对各药的耐受性较高，对Y7、Y8 的最小抑菌浓度均0.0625g/mL，说明Y7、Y8 菌株对各药高度敏感。其它菌株由于菌株之间的差异性和用药不同而表现出不同的耐药性。由表3 可知，分离菌株(Y4 菌株除外)对环丙沙星、庆大霉素敏感，其最小抑菌浓度（MIC）值分别为8g/mL 和16g/mL；其它药物对分离菌的最小抑菌浓度值差异较大。另外，上述多种药物对Y8 菌株的最小抑菌浓度均0.0625g/mL，说明Y8 菌株对各药高度敏感，对Y7 菌株的最小抑菌浓度均1g/mL，说明Y7 菌株对各药有较高的敏感性，其它几株菌由于菌株之间的差异性而表现出不同的耐药性。5 讨论分析5.1 生化鉴定试验注意内容 对于生化试验来讲，对于同一试验采用不同试验方法可能会有不同结果，同一方法也会受到材料等因素影响使结果不同，如此本次生化试验采用微量发酵管，应保证在有效期内、使用环境应适宜，以增加鉴定的准确性。5.2 形态学鉴定的意义 形态学是细菌分类的基本依据，形态学主要包括染色反应、排列、特殊结构、和菌落特征，这些常在实际检测中被忽视，尤其是近些年，微量快速鉴定系统的使用，往往因形态学鉴定被忽视，导致错误结论。表2： 阿莫西林等7 种药物对12 株鸭疫里氏杆菌的MIC 测定结果单位：g/mL菌株阿莫西林氨苄西林头孢噻肟头孢曲松亚胺培南头孢吡亏粘菌素Y116432160.125232Y20.250.25410.0625122864640.582Y4128128128128128128128Y5832320.06250.062540.0625Y66432320.06250.1250.062532Y70.06250.06250.06250.06250.06250.06250.0625Y80.06250.06250.06250.06250.06250.06250.0625Y90.06250.25320.06250.06250.06252Y100.1251320.06250.1250.06252Y110.521680.06251632Y1224163212816Y20.5160.250.250.51288Y388116412816Y4326412832128128128Y50.06250.06250.06250.062581280.125Y6132324641616Y70.06250.062510.06250.06250.06250.0625Y80.06250.06250.06250.06250.06250.06251284Y1044144642Y11421241284Y12440.510.53215.3 药物筛选与治疗-内酰胺类抗生素及-内酰胺酶抑制剂抗菌机制是与细菌内膜蛋白质分子(Penicllin binding proteins，PBPs)相结合，PBPs可以活化细胞壁中转肽酶和羧肽酶等，其与-内酰胺环类抗生素结合后便失去活性，导致细胞壁肽链交联中止，同时抑制正常糖肽结构的形成，最终抑制细胞壁的合成而呈现杀菌作用。多数革兰氏阴性菌能产生水解-内酰胺环的-内酰胺酶而使此类抗生素失去活性，而-内酰胺酶抑制剂与此类抗生素联合应用可灭活-内酰胺酶而发挥抗生素原有的抗菌作用。治疗鸭RA病常用的青霉毒类药物有阿莫西林和氨苄西林。阿莫西林、氨苄西林是两种半合成广谱青霉素类抗生素，作用范围较青霉素广泛，过敏反应少，肌注、内服均易吸收。头孢菌素类为广谱半合成-内酰胺类抗生素，杀菌力强，抗菌谱广，毒性小，主要作用于抗生素结合蛋白(PBPs)，其结构上R1基团决定本类药物的抗菌性质，此基团含2-氨基噻唑结构可使抗菌活性增强8。防治鸭浆膜炎多用第2、第3代头孢菌素，如头孢噻呋、头孢噻吩、头孢曲松、头孢噻肟、头孢哌酮等。 头孢噻吩、头孢曲松、头孢噻肟等11均是用于治疗鸭RA病的常用头孢类药物。与PBPs具有很强的结合亲和力，主要抑制细胞壁肽多糖的形成，对耐一代头孢菌素和庆大霉素的鸭RA有效。头孢哌酮为超广谱抗生素，通过抑制细菌细胞壁的合成而产生杀菌作用，在体外除对各种临床致病菌株都有活性以外12，还能耐受多种-内酰胺酶的破坏，因此对其他头孢菌素耐药的菌株本品有效。刘颖等对鸭RA的药物敏感性检测发现，全国各地共85株RA菌株均对头孢噻肟、头孢呋新、头孢噻吩等敏感。 氨基糖苷类药物 主要作用于细菌体内的核糖体，抑制细菌蛋白质的合成过程，使合成异常蛋白，对静止期细菌的杀灭作用强。其突出特点是水溶性好，性质稳定，抗菌谱广，对多种革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌及结核杆菌均有效。由于其脂溶性差，口服吸收不好，多以肌注用药，有部分或完全交叉耐药性。防治鸭浆膜炎有链霉素、卡那霉素、庆大霉素、阿米卡星、小诺米星、安普霉素等。链霉素、卡那霉素、庆大霉素在早期兽医临床上发挥有重要作用，随应用时间的延长，耐药性较为普遍，之间有部分或完全交叉耐药性。目前治疗鸭RA病多选择氨基糖苷类药物，如阿米卡星、小诺米星、安普霉素等。 阿米卡星为卡那霉素A的衍生物，半合成氨基糖苷类药物。抗鸭RA菌活性较强，且与前3种氨基糖苷类药物间无交叉耐药性，自上世纪末以来在兽医临床上应用非常广泛。小诺米星抗菌谱、抗菌活性类似阿米卡星，主要抑制细菌蛋白质的合成，并有破坏细胞膜的作用。突出特点是对氨基糖苷转移酶稳定，此酶能使卡那霉素、庆大霉素、阿米卡星等钝化，并对乙酰基转移酶AAC的耐药菌株也有抗菌作用，即本品对产酶的氨基糖苷类耐药菌株有效。安普霉素是兽医专用的氨基糖苷类抗生素14，能有力阻止细菌蛋白质的合成，对其他抗生素耐药的细菌有较强作用。多种菌类的试验表明，90%以上对安普霉素敏感，属正在推广的防治鸭RA病的药物。四环素类抗生素主要通过与细菌核糖体30 S亚基在A位上特异性结合，阻止氨基酰-RNA在该位置上的联结，抑制肽链延长和蛋白质合成。另一机制是引起细菌胞质膜通透性改变，使胞内的核苷酸等主要营养物质外泄，而迅速抑制DNA复制。该类药物主要有金霉素、四环素、土霉素、多西环素、米诺环素等。 金霉素、土霉素、四环素是早期的四环素类药物，现因应用时间过长、耐药严重，已较少作为治疗用。多西环素则以其优良的抗菌特性、吸收特性及广泛的抗菌谱在兽医临床上发挥着重要作用，在应用于兽医临床30多年以来取得了良好效果。内服后吸收迅速，生物利用度高，组织渗透力强， 易进入细胞内。 体内、外抗菌活性较土霉素、四环素强2倍10 倍。氯霉素抗生素易透入细胞内对致病菌发挥强大的抗菌作用，但毒性较大。该类药物主要有氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考。氯霉素因抑制骨髓造血机能而禁止使用于所有食品动物。甲砜霉素克服了氯霉素的毒性，但是不能解决其耐药性问题，因此甲砜霉素在上市不久便出现了耐药性，当前治疗鸭RA病本类药物首选氟苯尼考。 氟苯尼考是由先灵-保雅公司研制的动物专用抗生素，特点是抗菌活性强、吸收良好、分布广泛，无潜在致再生障碍性贫血作用15，对甲砜霉素和氯霉素耐药的菌株仍对本品仍敏感。在临床应用上取得很好的效果，且未见有耐药菌株报道，目前仍是治疗鸭RA病的首选药物之一，但随着应用时间延长，应适时进行药敏检测并进行耐药分析。 抗菌肽(antibacterial peptide，ABP)又称抗微生物肽或肽抗生素，广泛分布于细菌、病毒和各种动植物体内。具有广谱抗菌作用，能杀死抗生素耐药菌株，且杀菌机制使病原菌不易产生耐药性突变，其杀菌机理独特有望开发成为新一代抗菌药物，且能够归避化学抗生素的药物残留和耐药现象两大问题，其将在以后的兽医抗菌临床及治疗鸭RA感染上发挥重要作用。华南农业大学研制的抗菌肽通过对猪、鸡、虾的临床中试，抗菌效果显著17-18。但是天然抗菌肽的提取纯化工艺复杂，成本较高，用基因工程方法生产又可能对宿主菌有杀伤作用而影响其表达等限制性因素，会影响其在临床上的应用。 氟喹诺酮类药物(FQs)主要作用于细菌的DNA旋转酶(DNA Gyrase)，抑制DNA合成而致细菌死亡，还通过“抗生素后效应”而发挥杀菌作用19。其特点是抗菌谱广、杀菌力强(在体外很低的药物浓度即可显示高度的抗菌活性，MIC值最小可达0.001 25 g/mL)、临床疗效好、动力学性质优良(吸收快、体内分布广泛，可多途径投药)、与其他抗生素无交叉耐药性等。治疗鸭RA病最常用的是第3、第4代产品，如诺氟沙星、洛美沙星、左旋氧氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、加替沙星及奥比沙星等。 环丙沙星、恩诺沙星、左旋氧氟沙星抗菌活性较诺氟沙星、洛美沙星强，平均强2倍4倍。自20世纪80年代末环丙沙星、恩诺沙星投放中国市场以来，其在鸭浆膜炎等细菌病的治疗中占有举足轻重的地位，至今仍有一些菌株对其敏感。与此同时，由于其在临床上的大量使用，甚至是滥用，其耐药性也最严重。 奥比沙星22与恩诺沙星、单诺沙星同为第3代氟喹诺酮类动物专用抗菌药物。国外将该药用作治疗猪和牛等家畜的肺炎与腹泻病的特效药，还未用于治疗禽病。其抗菌活性较高，生物利用度高达89%100 %，且用药后吸收及组织穿透性强，无体内积蓄、无残留。是一个颇具特色、总体效果优于恩诺沙星和单诺沙星的动物专用抗菌药，可用于防治鸭RA病，在国外已有制剂上市，我国尚处于研发阶段。 磺胺类药物能够抑制细菌的核酸代谢而发挥抗菌作用，是最早人工合成的有效的治疗广泛性细菌感染的药物。其在一定的历史时期内曾作为抗感染和治疗传染病的中流砥柱，但由于细菌耐药性的增加及更为安全有效的抗生素的问世，其重要性已逐渐降低，在防治鸭RA病感染时，已逐渐被较新的抗菌性质优良、动力学性质优良及安全性较高的药物所替代，如氟喹诺酮类、头孢菌素类等。主要原因之一是磺胺类药敏感菌无论在体内、体外极易产生耐药性，且磺胺药物之间交叉耐药性严重，其次是安全范围小，副作用多(抑制免疫功能、肾毒性强)，对食品动物有降低产蛋、影响采食和药物残留等问题，现绝大多数磺胺药在蛋禽产蛋期、肉禽中均被禁用。 6 讨论鸭疫里氏杆菌对- 内酰胺类抗生素如阿莫西林、氨苄西林、亚胺培南、头孢噻肟、头孢曲松、头孢吡肟的敏感性较高，其中亚胺培南、头孢吡肟抗菌活性最高，它们对所有菌株的最小抑菌浓度（MIC）值较低。亚胺培南对多种- 内酰胺酶稳定，具有广泛的抗菌活性，因此临床上一直是治疗革兰阴性菌感染的有效药物。而且由于亚胺培南的价格较高，在动物治疗方面应用较少，因此不容易产生耐药性。头孢吡肟主要抑制细胞壁肽多糖的形成，通过抑制细菌细胞壁的合成而产生杀菌作用，能耐受多种- 内酰胺酶的破坏，因此抗菌活性较高。鸭疫里氏杆菌对氟喹诺酮类药物环丙沙星敏感，其MIC 值均32g/mL。氟喹诺酮类药物(FQs)具有抗菌谱广、临床疗效好及可多途径给药的优点，同时还可通过“抗生素后效应”而发挥杀菌作用13，在临床实践应用中与其他抗生素无交叉耐药性。鸭疫里氏杆菌对氨基糖苷类药物阿米卡星、庆大霉素也较敏感，氨基糖苷类药物具有抗菌谱广、性质稳定及水溶性好等优点。该类药物主要通过抑制细菌蛋白质的合成过程来对静止期细菌起杀灭作用。四环素类药物多西环素对鸭疫里氏杆菌的MIC 值均16g/mL。该类药物具有内服吸收迅速、生物利用度高及组织渗透力强等优点。该类抗生素主要通过抑制肽链延长和蛋白质合成及细菌胞质膜通透性使主要营养物质外泄而发挥抗菌作用。其它药物由于菌株之间的差异性和不同地区用药不同而表现不同的敏感性。目前，由于养鸭户广泛滥用抗生素，导致耐药性的普遍存在，造成当地大部分细菌性疾病已无药可治。解决这一问题的关键是养鸭户要养成免疫预防的习惯，摒弃盲目滥用抗生素的观念。鸭疫里氏杆菌很容易产生耐药性，对其治疗可根据药敏试验选用敏感药物进行。药物治疗短期内有一定效果，但连续使用很快就产生耐药性。因此每次用药前均需进行药敏试验以确定首选药物，也可采用联合用药，提高治疗效果。【参 考 文 献】1张大丙, 郭玉璞. 鸭疫里默氏菌6 型、12 型与16 型之间的交叉反应 J . 中国兽医学报, 2002a, 22( 6) : 565.2张大丙, 郭玉璞. 鸭疫里氏杆菌2 型与17 型之间交叉反应的研究 J . 中国预防兽医学报, 2002b, 24( 3) : 192194.3张大丙, 郭玉璞. 我国鸭疫里氏杆菌血清型的鉴定 J . 畜牧兽医学报, 1999, 30( 6) , 536542.4苏敬良, 郭玉璞, 吕艳丽. 鸭疫里氏杆菌外膜蛋白免疫原性研究 J . 畜牧兽医学报, 1999, 30( 5) : 444448.5胡青海, 李刚, 郑明球, 等. 鸭疫里氏杆菌江苏分离株G 十C 含量测定及DNA 同源性研究 J . 南京农业大学学报, 1998, 21( 4) :6鲍国连, 韦强, 佟承刚, 等. 鸭传染性浆膜炎疫苗的研究 J . 中国预防兽医学报, 1999, 21( 6) : 414416. 7 张大丙,郭玉璞.我国鸭疫里氏杆菌血清型的鉴定J.畜牧兽医学报,1999, 30(6):536-542.8 郭玉璞,陈德威,范国雄,等.北京鸭传染性浆膜炎德调查研究.畜牧兽医学报J.1982,13(2):107-112.9 刘颖,苏敬良,刘文华,等.鸭疫里默氏菌的药物敏感性检测J.中国兽医杂志,2005,41(5):10-12.10 黎满香,董伟,雷红雨,等.鸭疫里默氏菌和大肠杆菌混合感染的诊断及防制J.畜牧兽医杂志,2004,23(3):46-47.11 赵瑞宏,潘孝成,董成达,等.鸭疫巴氏杆菌和大肠杆菌的药敏筛选J.安徽农业科学,2002,30(2):234-249.8791.6鲍国连, 韦强, 佟承刚, 等. 鸭传染性浆膜炎疫苗的研究 J . 中国预防兽医学报, 1999, 21( 6) : 414416.致 谢本论文是在我的导师贾英科教授的亲切关怀和悉心指导下完成的。衷心的感谢贾老师对我本次试验的悉心辅导，在论文的选材中给予宝贵建议，以及修改我的论文。贾老师严谨求实的治学态度、孜孜以求的工作作风对我产生了重大的影响。论文从选题到定稿，刘老师都给予了我极大的帮助。还要感谢在此期间给过我帮助的马吉飞老师、秦顺义老师、段县平老师以及动物科学系所有辛勤培育我的所有老师。还要感谢帮助过我的同学们。从开始进入课题到论文的顺利完成，有多少可敬的师长、同学、朋友给了我无言的帮助，在这里请接受我诚挚的谢意!谢谢！ 感谢各位老师在百忙中评阅论文和参加答辩，在此谨致谢意！附录1：外文文献原文Antimicrobial susceptibility of Riemerella anatipestifer isolatedfrom ducks and the efficacy of ceftiofur treatmentChao-Fu Chang, Wen-Hwa Lin, Tung-Mao Yeh, Tai-Sheng Chiang, Yung-Fu ChangAbstract. The in vitro susceptibilities of 50 field isolates of Riemerella anatipestifer from ducks to ceftiofurand 16 other commonly used antimicrobials were determined. The MIC90 values (MIC refers to minimuminhibitory concentrations) for the antimicrobials used in this study are as follows: penicillin was 16 mg/ml;ceftiofur was 32 mg/ml; cephalothin, chloramphenicol, flumequine, and kanamycin were 64 mg/ml; nalidixicacid, nitrofurantoin, and sulfamethoxazole were 128 mg/ml; amikacin, ampicillin, gentamicin, lincomycin, spectinomycin,streptomycin, tetracycline, and trimethoprim were $256 mg/ml. The therapeutic efficacy of ceftiofuragainst a highly lethal experimental R. anatipestifer infection in ducks was also evaluated. All experimentalducks were infected through the infraorbital sinus with 1 ml of 9 3 109 CFU of R. anatipestifer. Ceftiofur (0,0.25, 0.5, 1, and 2 mg/kg) was injected subcutaneously 5 hours after infection. A single dose of 2 mg/kg resulted in 73% survival as compared with 10% survival in the infected, but untreated controls.Riemerella anatipestifer is a major bacterial pathogenof ducks in Taiwan and other countries causing a disease variously known as infectious serositis, newduck disease, duck septicemia, or anatipestifer septicemia.3,19 This serious and widespread disease causesmajor economic losses in the duck industry throughhigh mortality, reduced growth rate, poor feed conversion,increased condemnations, and htreatment costs.The occurrence of different serotypes of R. anatipestifer in field cases has been reported.2,3,5,7,18 Unfortunately,no cross-protection has been observed withinactivated bacterins made from different serotypes of R. anatipestifer.16 This lack of cross-protection seriously limits the usefulness of immunization in controlling this disease. Consequently, chemotherapy is very important in the treatment of ducks infected with R. anatipestifer.The availability of ceftiofur, a third-generation cephalosporin antibiotic, which is active against manygram-positive and gram-negative bacteria, provided the impetus for a study in which ceftiofur and 16 otherantimicrobial agents were compared for their potential usefulness in controlling R. anatipestifer infections in ducks.11 The in vitro minimum inhibitory concentrations (MICs) of 17 antimicrobial agents against fieldisolates of R. anatipestifer were determined. The therapeutic efficacy of ceftiofur against R. anatipestifer infection was determined in ducks inoculated with a virulent strain of the organism. From the Department of Veterinary Medicine, National Taiwan University, 142 ZhouShan Road, Taipei 106, Taiwan (C.-F. Chang, Lin, Yeh, Chiang), and the Department of Population Medicine and Diagnostic Science, College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca, NY 14853 (Y.-F. Chang).Materials and methodsBacterial strains. Fifty strains of R. anatipestifer were chosen, all isolated from ducks with infectious serositis, and serotyped at the Laboratory of Clinical Microbiology, Department of Veterinary Medicine, National Taiwan University. American Type Culture Collection (ATCC) quality control strains, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 29212, and Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, were used in this study.6,8 The test strains were storedat 270 C before testing.In vitro susceptibility tests. Agar-dilution MIC tests were conducted as previously described.6,8 The following antimicrobial agents were tested: amikacin, ampicillin, ceftiofur sodium, cephalothin, chloramphenicol, flumequine, gentamicin, kanamycin, lincomycin, nalidixic acid, nitrofurantoin,penicillin, spectinomycin, streptomycin, sulfamethoxazole, tetracycline, and trimethoprim. With the exception of ceftiofur, which was provided by the Pharmacia & Upjohn Pharmaceutical Company,a all other antimicrobials were purchased from Sigma.b The dilution ranges used for these antimicrobialagents were 0.03256 mg/ml, except sulfamthoxazole with 0.5512 mg/ml. Inoculum was dispensed, with areplicatorc housing 3-mm pins.Selection and preparation of the most virulent strain for infection. A total of forty-eight, 4-week-old,