石园 ： HnRNP A2B1在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及其.ppt

1,HnRNP A2/B1在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及其与DNA修复酶MGMT、OGG1、APEX、DNA-PKcs和Ku之间作用关系的初步研究,石园 陈颖 侯英勇 季春华 胡沁 周杨 宿杰阿克苏 谭云山 作者单位：复旦大学附属中山医院病理科(石园 侯英勇 胡沁 周杨 宿杰阿克苏 谭云山); 复旦大学附属肿瘤医院病理科(陈颖); 上海市第五人民医院(季春华) 第一作者:石园 通讯作者：谭云山,研究背景,肺癌的发病率和死亡率目前已经排在各种恶性肿瘤的第一位，但其发病机制尚未阐明 文献报道核不均一核糖核蛋白A2/B1（hnRNP A2/B1）在NSCLC中表达上调。hnRNP A2/B1一种重要的RNA连接蛋白，负责基因转录后调控,由hnRNP A2和hnRNP B1组成 ，广泛低量存在于正常肺组织中，参与RNA的拼接、Pre-mRNA的成熟和降解 ，mRNA由胞核到胞质的转运及转录后调节，细胞有丝分裂、成熟、分化及凋亡的调节 目前已知DNA修复酶MGMT、APEX、OGG1、DNA-PKcs和Ku在肺癌组织中的表达与正常肺组织有明显差别，均与肺癌的发生相关 hnRNP A2/B1是否对DNA修复酶转录后调控？,材料与方法,免疫组织化学： 50例NSCLC石蜡标本（包括癌及距离癌5cm以上的 正常肺组织）；一抗:鼠抗人hnRNP A2/B1单克隆抗体(1:1000,Sigma)及鼠抗人MGMT单克隆抗体（1:100，Abcam） ；评定标准：胞核阳性，以阳性细胞数量及阳性强度为标准进行半定量评分 Western blot： 5例鳞癌和5例腺癌的癌组织及对应正常肺组织新鲜标本；一抗:鼠抗人hnRNP A2/B1单克隆抗体 荧光实时定量PCR(real-time PCR):11例鳞癌和11例腺癌的癌组织及对应正常肺组织新鲜标本；2Ct 法检测目的基因hnRNP A2/B1 及MGMT mRNA的相对表达量 免疫共沉淀结合RT-PCR：人肺鳞癌细胞株 （HTB-182 ），裂解后加入鼠抗人hnRNP A2/B1单克隆抗体共沉淀，从产物中提取RNA进行RT-PCR检测（目的基因MGMT、OGG1、APEX、DNA-PKcs和Ku）,结 果,HnRNP A2/B1免疫组织化学：NSCLC癌组织中的阳性率及平均表达得分（100，5.30.9）显著高于正常肺组织（32，2.20.7）（p0.01）；在III-IV期癌组织中的平均表达得分（5.70.7）略高于I-II期（5.00.9）（p0.05），其表达与年龄、性别、肿瘤类型及吸烟史无明显相关性,鳞癌 （Envision400）,正常 （Envision100）,腺癌 （Envision400）,正常（Envision100）,HnRNP A2/B1 Westen blot：NSCLC癌组织平均灰度比值(1.40.5)明显高于正常肺组织(0.70.2)（p0.01）,hnRNP A2/B1及内参的western blot结果：1、3为同一鳞癌患者的癌组织及正常组织的条带；2、4为同一腺癌患者的癌组织及正常组织的条带,HnRNP A2/B1荧光实时定量PCR:,hnRNP A2/B1 mRNA在NSCLC癌组织中的平均表达量37.4(15.682.6)明显高于正常肺组织17.6(7.827.8)（p0.01）,免疫共沉淀结合RT-PCR结果：,基因扩增电泳条带图（1-2为MGMT扩增产物，3-10分别为OGG1、APEX、DNA-PKcs和Ku，均未显示明显条带）,提示hnRNP A2/B1蛋白与MGMT mRNA相结合,MGMT免疫组织化学：NSCLC癌组织阳性率及平均表达得分(32， 2.20.8)明显低于正常肺组织（78，4.11.2)（p0.01）,鳞癌 （Envision400）,正常 （Envision400）,腺癌（Envision400）,正常 （Envision400）,MGMT荧光实时定量PCR:,MGMT mRNA在NSCLC癌组织中的平均表达量1.8(0.63.1)明显低于正常肺组织9.8(6.818.3)（p0.01）,讨 论,hnRNP A2/B1蛋白及mRNA在NSCLC癌组织中高表达 MGMT蛋白及mRNA在NSCLC癌组织中低表达 + hnRNP