药物残留快速测定方法.ppt

随着人们环境意识的不断加强，由药物残留引起的食品安全问题也越来越受到人们的关注。为了保障消费者的安全和健康，提高食品的质量安全水平，我国政府决定加强食品中药物残留的监控，建立健全药物残留的检测体系，实施对蔬菜、瓜果、茶叶生产全过程的农药监控，对有防病治病、促进生长、提高生产性能、改善动物性食品的一些含有化学的、生物药用成分功效的动物保健品或饲料添加剂的监控。 食用含有药物残留的食品，使人类的健康受到了极大的危害，引起了世界各国的关注。因此，对食品中药物残留情况，必须加以监测，以保证食用安全。,我国食品中部分兽药的最高残留限量,果实内的农药残毒达到以下标准： 砷 0.5mg/kg， 氟 0.5mg/kg， 镉 0.03mg/kg， 汞 0.01mg/kg， 六六六 0.2mg/L， DDT 0.1mg/kg， 杀螟硫磷 0.4mg/kg， 倍硫磷 0.05mg/kg， 敌敌畏 0.2mg/kg， 乐果 1.0mg/kg， 锌 5mg/kg， 甲拌磷、马拉硫磷、对硫磷等不得检出,（一）药物残留的概念 农药残留：是指农药使用后残存于生物体、食品(农副产品)和环境中的微量农药原体、有毒代谢物、降解物和杂质的总称。 兽药残留：兽药在动物源食品中的残留”的简称，是指动物产品的任何可食部分所含兽药的母体化合物及（或）其代谢物，以及与兽药有关的杂质。,食品中农药残留的快速检测,1抗生素类：包括青霉素、链霉素、金霉素、土霉素、四环素、泰乐菌素等。 2呋喃药类：包括呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃呾啶等。 3磺胺药类； 4. 抗球虫药； 5. 激素药类； 6. 驱虫药类。,（二）主要残留药物有以下几类：,（三）药物对食品的污染及危害,药物对食品的污染 1预防和治疗畜禽疾病 2作为饲料添加剂使用 3保鲜：在食品的保鲜过程中，有时加入某种抗生素以抑制微生物的生长、繁殖，使用后也会对食品造成污染。,药物的残留对人体的危害 药物虽然有预防和治疗疾病的作用，但同时对机体也产生有害的作用。药物与毒物之间并无明显的界限，有些毒物在适当的剂量时具有治疗作用，而所有药物过量或应用时间过长，均有毒性。残留的药物对人体的不良影响主要有： 1毒性作用 2使某些细菌产生抗药性 3过敏反应 4造成菌群失调 5致癌作用：现已证明残留在食品中的克球粉、雌激素具有致癌作用。,国际上用于农药残留快速检测方法种类繁多，究其原理来说主要分为两大类：生化测定法和色谱快速检测法。 生化检测法是利用生物体内提取出的某种生化物质进行的生化反应来判断农药残留是否存在以及农药污染情况，在测定时样本无需经过净化，或净化比较简单，检测速度快。生化检测法中又以酶抑制法和酶联免疫法应用最为广泛。 色谱快速检测法通过尽可能的简化样品净化步骤，直接提取进样分析蔬菜和水果中的有机磷类农药残留。上述快速检测方法在具体应用中可以根据实际情况和方法各自适用范围及优缺点来选择使用。,（五）农药残留主要检测方法,传统的农残化学分析主要是气相或液相色谱等仪器 优点：敏感(10l2 106 molL) 、准确 缺点：操作复杂、费时及成本高。 发展适合我国的快速检测技术,适合我国的农药残留快速检测方法,生化检测 生物检测 化学比色法,酶抑制法,免疫分析法,发光菌检测法,敏感家蝇检测法,速测仪,速测卡,主要为酶免疫法,酶抑制技术是研究比较成熟、应用最广 泛快速的农药残留检测技术，是根据有机磷和氨基甲酸酯类农药对乙酰胆碱酯酶（AChE)的特异性生化反应建立起来的农药残留的微量和痕量快速检测技术。 1、速测卡法,“-”阴性（蓝色） “+”弱阳性（淡蓝） “+”强阳性（白色）,速测卡检测结果,原理:在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度呈正相关。酶催化乙酰胆碱水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质。 用分光光度计在412nm处测定吸光度随时间的变化，计算出抑制率，通过抑制率可以判断出样品中是否含有有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。,2、速测仪,农药残留快速测试仪,抑制率与农药残留量成正相关，抑制率越高说明残留量越高,速测仪检测结果,免疫分析技术,免疫分析技术是将免疫反应与现代测试手段相结合而建立的超微量分析技术，是基于抗原抗体特异性结合和反应为基础的分析方法。 目前应用于农残检测的是酶免疫分析(EIA)和放射性免疫分析(RIA)。其中酶联免疫分析技术应用最为普遍。,3、酶联免疫技术 ELISA是一种以酶作为标记物的免疫分析方法，也是目前应用最广泛的免疫分析方法之一，它将酶标记在抗体抗原分子上形成酶标抗体酶标抗原，酶作用于能呈现出颜色的底物，通过仪器或肉眼进行辨别。,ELISA法基本原理是预先结合在固相载体上的抗体或抗原分子与样品中的抗原或抗体分子在一定条件下进行免疫学反应。 该法因不需昂贵仪器设备，对人体无害等优点而被广泛采用，具有灵敏、特异、快速、稳定以及易于自动化操作等特点。,酶标板 u型 96孔,目前，ELISA方法常用的固相载体是96孔聚苯乙烯酶标板，常用的酶是辣根过氧化物酶，常用的底物是邻苯二胺和四甲基联苯胺等。,4、发光菌检测法,农药与细菌作用后可影响细菌的发光程度，通过细菌发光情况，可测出农药残留量。 此方法简便但是特异性差,5、敏感家蝇检测法,敏感家蝇对杀虫剂具有敏感性，记录家蝇存活情况，根据家蝇的死亡率可知农药残留情况。 该技术方法直接、过程简单、容易掌握，但定性粗糙，只对少数农药有效，而且由于其他生物对不同农药的毒性反应与人畜可能不同，因此影响对农药残留量的判断。如家蝇对毒性较低的除虫菊酯类敏感，远超过有机磷和氨基甲酸酯类中毒或高毒的农药。,6、化学比色法,目前常用的化学比色法包括各种检测试剂和试纸，两者都是利用迅速产生明显颜色的化学反应检测待测物质，可通过与标准比色卡比较进行目视定性或半定量分析。,化学比色分析法与一般的仪器分析方法相比，具有价格低，操作相对简便，结果显示直观，一次性使用，不需检修维护，有一定的灵敏度和专一性等优点。随着检测仪器的不断发展，与其相配套的微型检测仪器也相应出现。如与试剂检测方法相配套的微型光电比色计目前已发展得比较成熟。,抗生素类：氯霉素、四环素、土霉素、青霉素等； 磺胺类：磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶等； 呋喃类：呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因等； 激素和-兴奋剂：盐酸克伦特罗、己烯雌酚、孕酮等； 抗寄生虫类：左旋咪唑、苯丙咪唑、克并咪唑、克球酚、吡喹酮等。,1.兽药残留的类型,兽药残留检测,2、兽药残留的分析方法,兽药残留分析技术的特点 待测物质浓度低 样品基质复杂，干扰物质多 兽药残留代谢产物多样或不明 动物种类多样，对药物代谢存在差异,对检测方法的要求 快速 高通量 定量 准确度和精确度 确证,理想的仪器装备 样品经简单处理即可上机测定 不需萃取和净化 快速、准确的定量分析 自动的资料处理,分析方法的总体思路 高水平(Level )方法确证和定量被分析物质 中等水平(Level )方法定量但不需要确证被分析物质 低水平(Level )方法筛选,筛选方法,检测和确认方法：理化检验技术（GC、HPLC、TLC、GC-MS、HPLC-MS等）。,兽药残留的检验分析方法包括筛选、检测和确认。,ELISA：简单、快速、灵敏度，但容易产生假阳性，一般只适用进行样品粗筛，阳性结果需进行确证。 GC：灵敏度较高，但大多数兽药极性或沸点偏高，需繁琐的衍生化步骤，限制了应用。 HPLC：操作简单，但灵敏度不高；某些残留，检出限达不到要求。 仪器联用：分离、定性、定量一体，灵敏、准确、选择性都高，是国际公认的确认方法。 GC/MS、LC/MS等,兽药残留的分析方法,GC灵敏度较高，但易出现假阳性、阳性结果需进一步确证；HPLC操作简单，但灵敏度不高；ELISA简单、快速、灵敏度，但容易产生假阳性，一般只适用进行样品粗筛，阳性结果需进行确证；目前灵敏度较高、确证率较好的是GC/MS、GS-MS/MS 。,GC和GC-MS的区别 GC是指气相色谱仪 一般来说 气象色谱仪使用的检测器 有npd fid fpd ecd等等. 如果气象色谱器没加上述常用检测器 而是用质谱当做检测器 那么就是GC-MS了， GC-MS一般指的是单级质谱 如果是二级质谱就是 GC-MS-MS了。 GC就是一个分离装置 严格说 GC是没法单独用的 必须加检测器 只不过人们习惯吧 GC-FID 、GC-ECD、GC-FPD等等 简称为GC而已。,质谱分析 Mass Spectrometry，MS,质谱分析法是通过对被测样品离子的质荷比的测定来进行分析的一种分析方法。 化合物分子受到电子流冲击后，形成的带正电荷分子离子及碎片离子，按照其质量m和电荷z的比值m/z（质荷比）大小依次排列而被记录下来的图谱，称为质谱。,质谱分析的过程与原理,1、进样 化合物通过汽化引入离子化室；,2、离子化 在离子化室，组分分子被一束加速电子碰撞（能量约70eV），撞击使分子电离形成正离子； M M+ + e 或与电子结合，形成负离子 M + e M,5、加速离子进入一个强度为H的磁场，发生偏转，半径为：,不同的物质有不同的质量谱质谱，利用这一性质，可以进行定性分析（包括分子质量和相关结构信息）；谱峰强度也与它代表的化合物含量有关，可以用于定量分析。,化合物C5H12O 的质谱图,GC-MS的基本流程,GC-MS联用的优缺点,色谱仪有很强的分离混合物的能力，但是对化合物定性的能力差。 质谱分析试样必须是高度纯净物，而质谱本身无分离混合物的能力，但是能用来测