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多管发酵法测定水体中大肠杆菌姓名：马文霞 学号：320100922240学院：生命科学学院 班级：2010生态班实验时间：2011年11月9日 地点：贺兰堂C104摘要：生活用水水源常被生活污水或工业废水或人与动物的粪便所污染，因此必须对生活用水及其水源水进行严格的细菌学检测。因为病菌数量少，要从自来水中分离出病原菌非常困难，这样就要找一个合适的指示菌，最广泛应用的指示菌是大肠菌群，其定义为：需氧及兼性厌氧、在37能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。根据水体中大肠菌群的数目来判断水源是否被粪便所污染，检测大肠菌群的方法有多管发酵法、滤膜法。关键字：灭菌、划线、接种、镜检引言：学习检测水中大肠菌群的方法了解大肠菌群数量与水质状况的关系 材料与器材：培养基：乳糖蛋白胨发酵管（内有倒置小套管），三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管（瓶）（内有倒置小套管），伊红美蓝琼脂平板，灭菌水。仪器：载玻片，灭菌带玻璃塞空瓶，灭菌吸管，灭菌试管等。方法：1、水样的采集自来水 将自来水龙头用火焰烧灼3min灭菌，再拧开水龙头流水5min， 以排除管道内积存的死水，随后用已灭菌的三角瓶接取水样，以供检测。池水、河水或湖水 将无菌的带玻塞的小口瓶浸入距水面1015cm深的水层中，瓶口朝上，除去瓶塞，待水流入瓶中装满后，盖好瓶塞，取出后立即进行检测，或临时存于冰箱，但不能超过24h。2、初（步）发酵实验 将水样分别接入10支装有10ml三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管中，37培养48h。3、平板分离 将经24h和48h培养后产酸产气的发酵管，分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板上，再于37培养1824h，将符合下列特征的菌落进行染色镜检。深紫黑色，有金属光泽；紫黑色，不带或略带金属光泽；淡紫红色，中心颜色较深。4、复发酵试验经涂片、革兰氏染色、镜检，如为革兰氏阴性无芽孢杆菌，则挑取该菌落的另一部分，重新接种于普通浓度的乳糖蛋白胨发酵管中，每管可接种来自同一初发酵管同类型菌落13个，37培养24h,结果或产酸又产气，即证实又大肠菌群存在。证实有大肠菌群存在后，再根据初发酵试验的阳性管数查表XV-2(P186),即得大肠菌群数。结果：10ml水样的阳性管数为三支，查表得每升水样中的大肠菌群数为11.讨论：1.进行涂片时的菌落和重新接种于普通浓度的乳糖蛋白胨发酵管中菌落必须是同一菌落。2.进行复发酵实验是为了排除杂菌干扰实验结果的可
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