电镜标本制作原理及方法.doc

电镜标本制作原理及方法一、相关理论A1 型 1 透射电镜最大放大倍数是：A 1000倍 B 2000倍C 5万倍 D 100万倍E 50万倍答：C 易X 型2. 透射电镜取材应注意A 动作快捷B 组织体积小（1mm1mm1mm）C 固定迅速D 组织损伤小E 冷环境下操作（0-4）答案：ABCDE 中二、专业知识A1 型 3. 透射电镜标本超薄，切片厚为：A 1mmB 1mC 0.5mD 0.3mE 0.1m答案：E 中X型 4. 透射电镜标本常用固定液是：A 多聚甲醛B 戊二醛C 锇酸D 丙酮E 乙醇答案：BC 易三、实践能力A2 型 5. 透射电镜标本制备超薄切片最常用的包埋剂是：A 火棉胶B 蜜蜡C 石蜡D 明胶E 环氧树脂答案：E 中A3 型6. 透射电镜超薄切片技术如同石蜡切片都需要切片支撑物，所不同是石蜡切片的支撑物为载玻片，超薄切片为载网，在其上覆盖支持膜问题1 超薄切片载网最常用的是：A 铁网B 钢网C 锡网D 铜网E 银网答案：D 难问题2 最常用的支持膜有：A 环氧树脂膜B 明胶C 火棉胶膜 D 甲基丙烯酸甲酯膜E 甲基丙烯酸乙二醇膜答案：C 难问题3 载网上覆盖支持膜的厚度要求是：A 4-7mB 10-20mC 0.2-0.5mD 30-50nmE 60nm答案：B 难A4型7.透射电镜的样品制备方法，超薄切片技术是最基本、最常用的制备技术。超薄切片的制备流程与石蜡切片相似，需要经过取材、固定、脱水、浸透、包埋、切片、染色等步骤。问题1 透射电镜的样品要求A 新鲜标本组织 B 陈旧标本组织C 石蜡标本块D 腐败标本E 冷冻标本答案：A 易问题2 对动物组织，如脑、动脉、脊髓等最好采用的固定方法为：A 浸泡法B 蒸汽固定法C 微波固定法D 冷固定法E 灌流固定法答案：E 难问题3 超薄切片技术通常采用双固定法，称谓前固定和后固定，后固定液为：A 甲醛 B 甲醇C 乙醇D 锇酸E 戊二醛答案：D 中问题4 如当时不能完成浸透、包埋步骤时，标本应保存在A 50%脱水剂中B 60%脱水剂中C 70%脱水剂中D 95%脱水剂中E 100%脱水剂中答案：C 难X 型 8. 超薄切片，为了保证包埋介质完全渗入组织内部，必须将组织内水分驱除干净，最常用的脱水剂是乙醇和丙酮，为防止细胞收缩变形，梯度脱水步骤应为：A 50%乙醇或丙酮B 70%乙醇或丙酮C 80%乙醇或丙酮D 90%乙醇或丙酮E 100%乙醇或丙酮（二次）答案：ABCDE 易9.脱水操作中应注意的问题A 脱水要彻底B 脱水剂要纯C 脱水剂中可加吸水剂 （如无水硫酸铜）D 更换脱水步骤时，动作要迅速E 避免样品干燥出现气泡答案：ABCDE 中10. 超薄切片常用的染色剂 是：A 巴氏染色B 苏木素染色C 醋酸铀D 硝酸银E 柠檬酸铅 答案：CE 中多项问题11. 透射电镜标本制备中，浸透就是利用包埋剂渗入到组织内部取代脱水剂，这种包埋剂在单体状态时为液体，能渗入组织内，当加入某些催化剂，经加温骤合成固定，便于超薄切片。问题1 理想的包埋剂应具有什么特点：A 粘度低，容易渗入组织 B 骤合均匀而充分，骤合前后体积变化小C 具有良好的切割性D 能耐受电子轰击，高温下不变形E 对细胞成份抽提少，微细结构保存良好F 电镜的高倍放大下，本身不显示任何结构 G 材料来源丰富，易得，价格低廉，对人体无害答案：ABCDFG 难问题2 常用环氧树脂包埋剂的性质A 环氧树脂是一类高分子骤合物B 分子中含有两种反应基团，即环氧基和羟基C 加入酸酐类时，树脂分子中的羟基能与酸酐结合D 形成分子间横桥连接E 横桥式连接作用的交联剂叫做硬化剂 F 硬化剂有十二烷基琥珀酸酐（DDSA）G 环氧树脂包埋剂骤合前后体积变化小H 耐电子束轰击答案：ABCDEFGH 难问题3 包埋操作中，应注意什么A 所有试剂要防潮，保存干燥瓶中B 所有器具要烘干C 试剂要搅拌均匀，不能有气泡D 动作轻巧E 骤合时温度要控制适宜F 盛放包埋剂的器具及时用丙酮清洗干净G 皮肤不接触包埋剂答案： ABCDEFG 中12. 超薄切片是透射电镜样品制备流程中，关键步骤之一，必须把标本切成厚度小于0.1m以下的薄片才适用，常用超薄切片厚度是50nm。问题1 超薄切片前的准备工作A 手工修包埋块（粗修）B 实体显微镜修块暴露组织 C 包埋块修成锥体形D 制刀（玻璃刀和钻石刀）E 载网（100，200，300目）F 支持膜制备（厚度10-20nm）G 半薄切片答案：ABCDEFG 难问题2 半薄切片制备及意义A 半薄切片厚度为0.2-2mB 美蓝染色C 显微镜下定位病变D 细修多余组织 E 便于光镜、电镜对病变对比观察 F 便于保留有用标本答案：ABCDEF 难问题3 超薄切片步骤包括A 安装包埋块B 安装玻璃刀C 调节刀与组织块的距离 D 调节水槽液面高度与灯光位置E 调节加热电流及切片速度 F 切片G 捞取切片至载网上答案：ABCDEFG 难13. 超薄切片技术虽然已在医学、生物学等领域中得到了广泛的应用，但它普及性、广泛性还有不足，更多的人还掌握的不好，常会在制备过程出现一些切片缺陷，这些缺陷原因是复杂的、相互关联的。问题1 经常出现的缺陷有A 超薄切片破碎B 超薄切片颤痕C 超薄切片刀痕D 超薄切片空洞E 超薄切片厚度不一F 超薄切片不成带答案：ABCDEF 难问题2 如何解决超薄切片，破碎和颤痕问题A 标本彻底脱水B 包埋剂去除气泡和水分C 调整刀的间隙角和切速D 更换新刀E